Nota final:

Laboratorio de observación de bacterias: Tinción simple

Profesora Tamara del Pino.

Integrantes: ___________________________________________________________________________________

Curso: ___________ Puntaje obtenido: _____/ 30

Objetivos del laboratorio:

• Familiarizarse con el manejo del microscopio óptico cuando se observan preparaciones teñidas.
• Aprender a realizar un frotis a partir de muestras y cultivos
• Teñir un frotis con un colorante (tinción simple)
• Familiarizarse con el correcto uso del lente objetivo 100X y el aceite de inmersión
• Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones
• Esquematizar la morfología bacteriana observada en las muestras

ANEXO

Las bacterias son organismos procariotas unicelulares, que se encuentran en casi todas las partes de la Tierra. Son
vitales para los ecosistemas del planeta. Algunas especies pueden vivir en condiciones realmente extremas de
temperatura y presión. El cuerpo humano está lleno de bacterias, de hecho, se estima que contiene más bacterias que
células humanas. La mayoría de las bacterias que se encuentran en el organismo no producen ningún daño, al contrario,
algunas son beneficiosas. Una cantidad relativamente pequeña de especies son las que causan enfermedades. Las
múltiples formas bacterianas pueden estar determinadas por distintos factores, siendo la rigidez de la pared celular, la
más importante de ellas.

El pequeño tamaño de la mayoría de las células bacterianas dificulta su visualización al microscopio óptico. La principal
dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste
es la utilización de colorantes. Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía, son
suficientes los procedimientos que usan un solo colorante,
llamados de tinción simple.

Vistas al microscopio, por lo general, las bacterias presentan tres

formas básicas: las bacterias esféricas se denominarán cocos, las
alargadas serán bacilos, las bacterias curvadas y las que tienen
forma de espiral serán los espirilos, espiroquetas, comas o
vibriones; cada una de ellas presentarán distintas características.

II.- Definiciones

• Esterilización: Es una técnica de saneamiento preventivo para conseguir la asepsia, o sea, la destrucción de
todos los microorganismos y sus formas de resistencia que puedan existir en la superficie o en el espesor de un
objeto cualquiera. Obtiene como resultado la ausencia de todo germen vivo consiguiendo material estéri l. La
esterilización se puede conseguir por procedimientos físicos y químicos, siendo más usados los primeros ,
aunque en los últimos años se están desarrollando los químicos.
• Técnica aséptica: Se refiere a las prácticas que se hagan durante e inmediatamente antes de un procedimient o
para que se reduzca la posibilidad de contaminaciones del lugar de trabajo, los materiales y de que el operador
contraiga infecciones.
• Medio de cultivo: Material nutritivo en el que se pueden recuperar, multiplicar y aislar los microorganismos ,
así como efectuar pruebas de susceptibilidad. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o
granular, pero también pueden presentarse hidratados y preparados.
III.-Fases de las tinciones

Los pasos que seguir para la realización de una preparación fijada y coloreada son los siguientes:

1. Confección del frotis: Puede prepararse a partir de productos líquidos o sólidos:

• Productos sólidos, se pasa sobre la superficie del portaobjetos el hisopo con el que se ha tomado la
muestra. También se puede preparar una suspensión del material en una gota de solución salina
previamente colocada en el portaobjetos.
• Productos líquidos, para la preparación del frotis, se coloca sobre el portaobjetos una gota del material
y se extiende con el asa de siembra.
2. Secado: Se deja secar el frotis a temperatura ambiente. Para ello, se puede agitar varias veces el portaobjetos al
aire hasta comprobar su secado.
3. Fijado: Tiene como objeto la inmovilización de las estructuras del material a estudiar en un estado lo más
próximo al estado vivo. Las formas más habituales de fijación son: Por el calor, se pasa varias veces, la parte
inferior de la preparación por la llama azul de un mechero de bunsen hasta que se note caliente al colocarlo en
el dorso de la mano sin que queme. Alcohol en frío, se cubre la preparación con etanol o metanol. Se deja actuar
durante varios minutos, se escurre y deja secar.
4. Coloración: Es el proceso de coloración de los microorganismos, para teñirlos existe un gran número de
productos químicos con propiedades colorantes. Su elección está condicionada al tipo de tinción a realizar.
5. Lavado y secado: El lavado es la eliminación del exceso de colorante. Para el lavado se utilizará el aguade la
llave, teniendo precaución de no dirigir el chorro directamente al frotis. Para el secado se sitúa la preparación
en posición vertical cerca del mechero, hasta que se evapore el agua o se toca suavemente con un papel
absorbente.

Primera parte: Cultivo

Procedimiento

Paso 1: Cada grupo consta de 2 placas de agar. Una placa debe ser rotulada, en su reverso, como ‘’AIRE’’. La otra placa
debe ser dividida con el rotulador por la parte de reverso; en una de las mitades debe rotular ‘’SUELO’’ y en la otra
‘’BOCA’’

Paso 2: Tomar las siguientes muestras:

A.- Boca (encías y dientes)

1. Con la tórula frotar encías y dientes.

2. Siembra en una placa de agar

B.-Suelo

1. Con una tórula humedecida recolectar muestra de tierra adherida a la suela de los zapatos de un alumno.
2. Siembra en una placa de agar.

C.- Piel

1. Frota la torula por alguna parte de tu piel

2. Siembra en una placa de agar

Segunda parte: Preparación y fijación de las extensiones

Pasos que seguir: Extensión y fijación de la muestra

1. Colocar en el portaobjetos una gota de agua con el asa

2. Con el asa flameada y fría, tomar una porción del cultivo bacteriano y suspenderlo homogéneamente en la gota
de agua.
 3. Extender la suspensión sobre la superficie del portaobjetos
4. Secar la preparación al aire, o bien calentando muy suavemente a cierta dist ancia de la llama del mechero
5. Fijar la extensión al portaobjetos por el calor (pasar el porta dos o tres veces a través de la llama del mechero,
con la ayuda de las pinzas

Pasos que seguir: Tinción de las extensiones

1. Cubrir la extensión con Azul de Metileno durante 2 minutos (cronometrados)

2. Lavar abundantemente con agua
3. Secar la preparación suavemente con papel de filtro

Pasos que seguir: Observación

1. Examinar al microscopio con objetivo de inmersión (100x) depositando una pequeña gota de aceite de
inmersión sobre la preparación teñida.
2. Debate, con tu grupo, lo que observas
3. Anotar y esquematizar lo que observas en el lente del microscopio.

Actividad

• Dibuja lo que creció y colonizo tu placa de agar.

1.- Muestra de mucosa bucal

2.- Muestra de piel

3.- Muestra de suelo

Muestra Presencia o ausencia de bacterias ¿Qué tipo de morfología bacteriana observaste?

Identifica y esquematiza
Suelo

Mucosa bucal

Piel
 Rubrica de evaluación
Criterio de evaluación Satisfactorio (5 puntos)
Desarrollo del laboratorio El equipo trabaja durante
toda la clase, sin gritos ni
faltas de respeto entre
pares ni con sus
profesores. No existen
distractores.
Limpieza y organización El equipo mantiene su área
de trabajo muy limpia y
ordenada, evitando tener
objetos que provoquen
accidentes.
Medidas de seguridad El equipo sigue todas las
normas de seguridad
presentadas al inicio del
laboratorio, evitando
generar accidentes
Apariencia Todos los integrantes del
equipo se presentan con su
delantal blanco, sin
accesorios y las personas
de pelo largo, recogido
Trabajo en equipo El equipo trabaja
colaborativamente,
determinando roles y
cumpliendo su rol dentro
del desarrollo del práctico.
Resultados El equipo rellena la tabla,
identificando de manera
correcta las 3 morfologías
presentes en sus placas de
agar, determinado la
presencia o ausencia de
bacterias en estas.
Bueno (3 puntos)
El equipo trabaja durante
toda la clase, pero generan
algún distractor para el
desarrollo del practico:
utilización de teléfono,
gritos y faltas de respeto.
El equipo mantiene su área
de trabajo limpia, pero no
ordenada, observando
materiales no solicitados
en el laboratorio.
El equipo sigue
medianamente las normas
de seguridad presentadas
al inicio de la clase,
generando situaciones que
pueden generar accidentes
en el desarrollo del
laboratorio
No todos los integrantes
del equipo se presentan
con el delantal blanco, sin
accesorios y las personas
con pelo largo, recogido
El equipo trabaja de
manera colaborativa, pero
los roles determinados no
los siguen al pie de la letra.
El equipo rellena de
manera incompleta la
tabla, identificando de
manera correcta 2
morfologías presentes en
sus placas de agar,
determinado la presencia
o ausencia de bacterias en
estas.
Puedo mejorar (1 punto)
El equipo no trabaja
durante la clase,
generando distractores en
la gran parte del desarrollo
del laboratorio.
El equipo no logra
mantener su área de
trabajo limpia y ordenada
El equipo no sigue las
normas de seguridad
dentro del desarrollo del
laboratorio, poniendo en
riesgo a su equipo,
compañeros y docentes
presentes en el laboratorio
Ninguno de los
integrantes se presenta
con el delantal blanco,
llevando accesorios y el
pelo suelto.
El equipo no trabaja de
manera colaborativa, ni
determina roles para la
realización del práctico
El equipo rellena de
manera incompleta la
tabla, identificando de
manera correcta solo 1
morfología presente en sus
placas de agar,
determinando la presencia
o ausencia de bacterias.