Instituto Primo Capraro Biología 3er año- 2023

TP de laboratorio N°1: Continuación

Diversidad celular y manejo del microscopio óptico: Célula procariota

● Objetivos
- Familiarizarse con los elementos y el funcionamiento del microscopio óptico.
- Aprender a realizar preparados microscópicos de bacterias.
- Observar la diversidad de células procariotas y compararla con la de los eucariotas.
- Comprobar que todos los organismos vivos están formados por células.

● Introducción:
Los procariontes son organismos unicelulares que pertenecen a los dominios Bacteria y Archaea. Las
células procariotas son mucho más pequeñas que las eucariotas, no tienen núcleo y tampoco
organelos. Su morfología puede ser muy variada, e incluso una misma especie puede adoptar distintos
tipos morfológicos, lo que se conoce como pleomorfismo.

● Materiales
- Microscopio óptico compuesto / Portaobjetos / Cubreobjetos / pipeta pasteur o gotero / agua destilada
/ Colorante azul de metileno / hisopos / Agujas de disección / bisturí / asa o aguja de siembra /
mechero / yogur / elementos de seguridad.

● Desarrollo
Se realizarán los siguientes protocolos para observar bacterias provenientes de distintas muestras
biológicas:

Bacterias del yogur

Se esteriliza el asa de siembra a fuego directo en el mechero de Bunsen (hasta que tome color rojo).
Se coloca una gota de agua destilada en el portaobjetos (con gotero). Se recoge una muestra de yogur
con el asa de siembra estéril. La muestra tomada se coloca sobre la gota de agua previamente
depositada sobre el portaobjetos y se mezcla de manera uniforme. Se toma el portaobjetos con la
pinza de madera y se fijan las bacterias (presentes en la muestra de yogur) por secado a fuego directo
con la muestra hacia arriba. Se agrega azul de metileno para teñir las bacterias y se deja actuar
durante 5 minutos. Se lava con agua destilada el colorante dejando caer el agua por el portaobjetos
inclinado. Se agrega alcohol y se deja actuar durante 2 minutos (para eliminar las grasas de la muestra
que obstruyen la visualización en el microscopio). Se repite el lavado con agua destilada.
Se deja secar la muestra del portaobjetos (puede acelerarse el proceso a fuego directo con
mechero)

Bacterias del sarro dental.

Con un palillo o hisopo toma una muestra de sarro dental, pasándolo por la base de los dientes.
Extiende el contenido de la muestra en una gota de agua en un portaobjetos. Pasa el portaobjetos
varias veces por encima de la llama del mechero, sin detenerte sobre ella, para secar la muestra y que
las bacterias queden pegadas al porta. Cubre la preparación con azul de toluidina (reemplazamos por
azul de metileno). Deja actuar durante 1 -2 minutos. Lava con agua destilada para eliminar el exceso
de colorante. Deja una gota de agua sobre la muestra y deposita un cubre sin que queden burbujas de
aire. Seca el revés de las preparaciones para no manchar la platina y observa al microscopio utilizando
los mayores aumentos posibles.
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Se observará el preparado al microscopio con ayuda del docente, teniendo en cuenta lo siguiente:

- Para utilizar el objetivo de 100X, se necesita usar aceite de inmersión, se requiere usar una gota
del mismo sobre el cubreobjetos, en el sitio que se desea observar. Al mover el revólver hacia
la posición del objetivo de inmersión, debemos detenernos a media distancia entre el objetivo
anterior y el de inmersión, luego añadiremos la gota de aceite de inmersión sobre el centro del
cubreobjetos en observación. Debe moverse el revólver de manera que el objetivo de inmersión
esté directamente sobre el cubreobjetos. La gota de aceite de inmersión debe formar un “puente”
entre el objetivo y la muestra.
- Use el tornillo micrométrico para observar una imagen nítida de su muestra.
- Tal vez se requiera ajustar el condensador, incrementando o disminuyendo la cantidad de luz
que proviene del condensador utilizando la manija del diafragma. (Figura 8).
-
Importante: Asegúrese de que los otros objetivos no se impregnen de aceite de inmersión, ya
que se pueden dañar.

Luego de la observación, responda las siguientes preguntas:

a) ¿Qué morfología tienen las bacterias observadas?

b) ¿Cómo podrías estimar el número de bacterias observado? Describe qué técnica usaría.
c) ¿Se puede observar alguna estructura perteneciente a la célula?