Taller 9.

1. Teniendo en cuenta las diferentes conformaciones del ADNp, dibuje un gel donde se evidencie la
migración de ADNp enrrollado, super-enrrollado y lineal. Justifique su respuesta (1.25).

El movimiento de pDNA en un gel de agarosa está determinado por su tamaño y forma. El pDNA lineal es
el más pequeño y se mueve más rápido en el gel, mientras que el pDNA superenrollado es el más grande
y lento. El pDNA enrollado está en algún punto intermedio.La forma en que el pDNA se mueve a través
del gel está relacionada con su carga. Cuando se aplica una corriente eléctrica al gel, los iones cargados
se mueven hacia el polo opuesto. El pDNA, que también tiene carga negativa debido a su estructura
química, se moverá hacia el polo positivo. En el caso del pDNA lineal, la carga se distribuye
uniformemente por toda la molécula, lo que significa que se mueve suavemente a través del gel. En el
caso del pDNA superenrollado, la carga está más concentrada en las regiones superenrolladas, lo que
significa que se mueve más lentamente a través del gel. En el caso del ADNp enrollado, la carga se divide
por la mitad para que se mueva a una velocidad promedio. En resumen, el pDNA lineal migra más
rápido, el pDNA superenrollado migra más lentamente y el pDNA enrollado migra moderadamente en
geles de agarosa.

2. En la extracción de ADNp, ¿por qué es importante realizar una lisis alcalina a las células de E. coli?,
¿qué implicaciones tendría hacer una lisis ácida u otro método de lisis celular? (1.0)

En la extracción de ADN, la lisis celular es uno de los pasos más importantes que implica romper la
membrana celular y liberar el material genético contenido en el interior de la célula. En el caso específico
de la extracción de ADN de E. coli, se utiliza una solución alcalina para romper la pared celular y la
membrana externa de las bacterias. La lisis alcalina es importante en la extracción de ADN de E. coli
porque las bacterias tienen una pared celular rígida que protege al material genético en el interior de la
célula. La solución alcalina disuelve la pared celular y la membrana externa de las bacterias, permitiendo
que el ADN sea liberado y esté disponible para su posterior purificación. Por su parte, si se utilizara un
método de lisis ácido en lugar de la solución alcalina, se correría el riesgo de dañar el ADN y reducir su
calidad. Además, los ácidos pueden interferir con las enzimas utilizadas en pasos posteriores de la
extracción del ADN afectando negativamente la calidad y cantidad del ADN obtenido (Green, M. R. &
Sambrook, J. ,2012).
3. Realice una tabla comparativa sobre las similitudes y diferencias entre el proceso de extracción de
ADNg y ADNp. También tenga en cuenta las condiciones del cultivo bacteriano a emplear, los reactivos
utilizados y el producto obtenido (1.5)

4. Adjunte los resultados de la práctica de clonación. Describa el tipo de colonias que presenta y la
implicación fenotípica de cada una, ¿fue exitoso el proceso de transformación en E. coli? Justifique
(1.25).
Aquí logramos observar los controles negativos y positivos, los cuales permiten identificar los resultados
adecuados de la práctica de clonación. Como podemos ver, en el control negativo se observan colonias
azules, es decir, que contienen el plásmido, pero sin el inserto. En el control positivo, logramos observar
colonias blancas, las cuales si contienen el plásmido con el inserto.

En estos resultados logramos divisar tanto colonias azules, como colonias blancas. Por lo tanto, se puede
concluir que se dio con éxito el proceso de clonación, ya que se obtuvieron colonias blancas. Lo que
permite esta diferenciación es el medio con X-gal, además, de que el funcionamiento del LacZ incide en
estos resultados, ya que, si hay colonias blancas, es porque el LacZ no está funcionando; si hay colonias
azules, quiere decir que el LacZ está funcionando correctamente.

Referencias

Green, M. R., & Sambrook, J. (2012). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th ed.). Cold Spring
Harbor Laboratory