Electroforesis de ADN

ALUMNA: NARDA GRACIELA GONZALEZ AGUILAR

DOCENTE: QFB. RUBIO BAHENA JOSE DE JESUS

ASIGNATURA: TECNICAS MOLECULARES

LICENCIATURA: QUIMICO FARMACEUTICO BIOTECNOLOGO

TERCER SEMESTRE

CAMPUS: CIUDAD VISTORIA

CIENCIAS DE LA SALUD

FECHA: 18/09/2022

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 Índice
Introducción....................................................................................................................................... 2
Fundamento de la técnica ................................................................................................................. 2
¿Qué es el gel agarosa? ................................................................................................................... 3
¿Cómo se mueve el ADN a través del gel? .................................................................................... 3
Procedimiento de la técnica .............................................................................................................. 4
Diagrama ........................................................................................................................................ 5
Bibliografía ........................................................................................................................................ 8

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Introducción

El estudio que el humano ha enfocado hacia los microorganismos patógenos nos ha llevado
a un sinfín de avances en la identificación de ellos, dando mas facilidades y técnicas
diferentes para su estudio.

Una de las metodologías mayormente usada en los laboratorios dentro del proceso de
separación e identificación de cadenas de ADN es la electroforesis con geles de agarosa. Con
este proceso podemos separar las cadenas de ADN y ARN según su tamaño y numero de
pares de bases que estas contengan. De esta forma, dichos fragmentos de ADN podrán ser
visualizados gracias a la ayuda de una tinción. A pesar de que esta de una técnica simple y
fácil, posee dotes de separación eficaces.

Entre las diferentes metodologías, la mas aplicada es la electroforesis en gel de agarosa, la

electroforesis de campo pulsado o la electroforesis en gel con gradiente de desnaturalización,
para el caso de proteínas, la más utilizada es la electroforesis en gel de poliacrilamida con
duodecil de sodio y la electroforesis bidimensional.

La electroforesis es una técnica de separación biomolecular, esta se fundamenta en la

movilidad y naturaleza de los ácidos nucleicos. Esta tiene una gran variedad de aplicaciones,
ya sea en el campo de la medicina forense para determinar identidades de personas, en el área
clínica de un laboratorio en los análisis de algunos tipos de virus o bacterias, etc. Esta puede
ser de gran ayuda también en la identificación de geles dañados, enfermedades genéticas.
También puede determinar la llamada prueba de paternidad o establecer algún vínculo
genético entre grupos de personas.

Fundamento de la técnica

La electroforesis en gel agarosa es un método utilizado para separar fragmentos de ADN

según su composición, tamaño y carga. Esta consiste es la aplicación de una carga eléctrica
a un gel especial que contiene las moléculas de ADN de interés. De esta forma, en base a la
carga que se le otorga (en el caso del ADN esta será negativa). En este caso las moléculas de
ADN como cadenas de pares de bases se moverás por el gen hacia la parte de la carga
positiva, las cadenas más pequeñas tendrán una rápida llegada hasta el otro extremo del gel,
mientras que las cadenas más grandes tendrás más dificultad y se moverán mas lento.
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El gel utilizado tiene una consistencia porosa, que es por donde las hebras de ADN tendrán
lugar su movimiento. La electroforesis es definida como el movimiento o el desplazamiento
diferencial de las especies cargadas, en este caso los iones que contienen las moléculas del
ADN.

El ADN al ser una molécula con carga negativa, al implementar una corriente de carga
positiva, estas se verán en la necesidad de “correr” hacia ella. Cada molécula de ADN tiene
la misma cantidad de carga por masa, es por esto por lo que se separan los fragmentos por
tamaños.

¿Qué es el gel agarosa?

En la electroforesis se utiliza un cierto tipo de gel, parecido a un bloque de gelatina y en

donde en contenido en ADN para el proceso de electroforesis. Este es el gel de agarosa, el
cual es un polímero natural, polisacárido formado por galactosa alfa y beta. La preparación
es sencilla, en agarosa se mezcla a una temperatura elevada en una disolución amortiguadora
(esta puede ser agua mezclada con algunas sales), y cuando se deja secar se forma un gel
solido poroso formado por moléculas unidas por puente de hidrogeno.

¿Cómo se mueve el ADN a través del gel?

Cuando la muestra de ADN de interés es colocada en los pozos del gel, se aplica corriente
eléctrica a la cámara en donde este contenido el gel. Los grupos fosfato de las moléculas de
ADN les da una carga negativa, por lo tanto, se trasladan del extremo positivo al negativo
siendo atraídos por esta carga. “Cuando el sistema está encendido y pasa corriente por el gel,
se dice que el gel está corriendo.”3

De esta forma, las cadenas más cortas se encontrarán en el extremo positivo, mientras que la
más larga estará más cerca del extremo inicial o negativo. La velocidad de movilidad tiende
a ser proporcional al numero de bases, esto aplicado en la fricción que el gel de agarosa
impone dependiendo su concentración.

Para ello se determina una cantidad especifica de agarosa para la separación de ADN lineal
según su numero de pares de bases.

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 % en agarosa Tamaño del ADN (pb)
0,75 10000-15000
1,0 500-10000
1,25 300-5000
1,5 200-400
2,0 100-2500
2,5 50-1000
Tabla 1. Relación % agarosa con el tamaño de los pares de bases del ADN

Procedimiento de la técnica

El proceso de separación de moléculas de ADN se realiza en acuerdo al peso molecular, por

lo tanto, la distribución de las cadenas se vería igualmente afectadas en torno a la
concentración del gel.

El primer paso es asegurarse de portar adecuadamente el equipo de bioseguridad, en especial

los guantes al momento de la manipulación de la muestra.

Lo principal es la preparación del gel de agarosa en la concentración requerida o marcada

según la marca y especificaciones de esta. Después de pesar la cantidad requerida se disuelve
en un solvente como el agua o con el buffer de carga.

En las matras donde se esté realizando esta muestra, se deberá colocar un tapón de plástico
para evitar derrames en el calentamiento de la agarosa, aquí es cuando calentamos a la
temperatura indicada para la homogenización de la agarosa con el buffer de carga.

Una vez calentado, y antes de que solidifique, el gel de colocara en un molde especial, y con
ayuda de un llamado cepillo, se marcaran las celdas en donde de colocaran mas muestras.
Esta es una placa con forma de un cepillo un poco grueso, que se coloca en un extremo del
molde, de esta forma se crean los pozos donde serán contenidas las muestras de interés.

Después de pasado el tiempo debido de solidificación, se retira tanto el cepillo como el

molde, entonces el gel ya esta listo para usar, pero no es el fin del proceso. Este gel
solidificado será puesto en una llamada caja de electroforesis, aquí añadiremos mas buffer
en los lados, entonces nos quedaría el gel rodeado del buffer de carga.

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Empleando una micropipeta, añadiremos un poco del buffer en la muestra de ADN y
dejaremos que este homogenice. Esta muestra será transportada a ubo de los pozos del gel en
la caja, y así será con las demás muestras, las añadiremos en cada pozo del gel, sin embargo,
se deberá dejar un pozo especifico para colocar una referencia, esto nos servirá al momento
de analizar el resultado y poder tener un margen de conocimiento en relación.

En este punto inicia el proceso, después de la preparación, conectaremos la caja en una

corriente eléctrica que genere cargas diferentes, para este caso de ADN, las muestras en los
pozos estarán colocadas en el área negativa de la carga. Esto es así, la carga negativa del
ADN repelerá la carga negativa de la caja, pero será atraída por la positiva que se encuentra
en el otro extremo, dentro del proceso seria normal ver algunas burbujas en la caja.

Las cadenas mas cortas de encontraran en el extremo negativo completando el recorrido, y

aunque sea el mismo fundamento con las cadenas largas, estas se encontraran más atrás o al
inicio del gel. Esto se debe a que es más fácil a las cadenas cortas “moverse” por los poros
del gel llegando así más rápido. Entonces las cadenas más cargas estarán en la parte de atrás,
igual serán movidas, pero dentro de un tiempo determinado no tendrán la misma velocidad
que las cortas.

Al final del proceso de electroforesis, el gel deberá ser retirado y será teñido con una tinción
especial, la cual está diseñada para adherirse a las cadenas de ácidos nucleicos, de este modo
podrían ser visualizados con mayor facilidad y lograr diferenciarlos en el siguiente paso.
Existen diferentes reactivos que permiten la visualización del ADN, el más conocido es el
bromuro de etidio, el cual es un agente intercalante (se intercala entre las bases nitrogenadas)
que se usa como colorante fluorescente para la visualización de ácidos nucleicos en geles de
agarosa y poliacrilamida.

La tinción puede durar un par de horas, después del tiempo determinado se retirará el gel de
la tinción y será llevado a una caja especial de luz UV. De esta manera sal el resultado visible,
auqui es donde ya se pueden determinar las medidas de los pares de bases de una cadena.

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 Diagrama

Colocar una cantidad

establecida de agarosa en un
matraz.

Colocar buffer dentro del

matras dentro del matraz.

Tapar con un tapón de

plástico para evitar algún
derrame accidental. Llevar el matraz a calentar
por varios minutos para
homogenizar la mezcla.

Una vez solidificado, se

Colocaremos la mezcla en el retira del molde y se retira
molde del gel y el cepillo.
posicionaremos el cepillo en
uno de los lados.

En la caja de electroforesis
colocar el bloque de gel y
adicionar buffer cubriendo
las paredes del gel.
Este será llevado y
depositado en uno de los
pozos del gel. Con micropipeta añadir
buffer al ADN.

La caja se conectará a una

batería o generador por
Esta genera las cargas
medio de cables.
eléctricas para la
movilización de las cadenas
de ADN
En el proceso es normal que
aparezcan busbujas.
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 Al finalizar el proceso, el gel
será extraído y llevado a otro
Esta será bromuro de etilio. recipiente en donde se
encontrará una tinción.

Visualizar el resultado en luz

UV. Aquí ya se diferencias
las longitudes de las cadenas
y los pares de bases.

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Bibliografía

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September 18, 2022, from

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aplicaciones-prActicas-de-la-electroforesis-en-gell

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10. Herrnandez, A. (s/f). Electroforesis. Uah.es. recuperado el 18 de septiembre del2022,

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