INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRACTICA: AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO

Profesores:
M. en C. Verónica Alcántara Farfán
M. en C. Sakuntala Gonzara Andrade
Dr. en C. José Francisco González Benítez

Integrantes:
Jiménez Pineda Rosa
Ramírez Nieto Manuel
INTRODUCCION
Los plásmidos son moléculas de DNA extra cromosómico, circular y
generalmente de tamaño pequeño que se encuentran en muchas
especies bacterianas y que se pueden replicar de manera
independiente del DNA cromosómico. A diferencia de éste, los
plásmidos no son necesarios para la viabilidad general de la célula,
pero pueden contener contribuyen a la superficie en condiciones
especiales, como los que confieren resistencia a antibióticos o a
metales.
Los plásmidos son ampliamente utilizados en técnicas de Ingeniería
Genética por ser uno de los vectores más sencillos de usar. En
biología Molecular, un vector es una molécula de DNA que puede
replicarse en una célula y puede servir como un vehículo al que se le
pueden unir secuencias de DNA seleccionadas a voluntad del
investigador con diversos fines. La molécula que resulta de la unión de
un DNA vector con el DNA de interés (denominados inserto) se
denomina vector recombinante. Para ser utilizado como vector, un
plásmido debe poseer al menos tres características:

1. Debe tener su propio origen de replicación y por tanto la

capacidad de replicación autónoma independiente del genoma
2. Debe tener sitios de clonación múltiple que permitan la apertura
del DNA con enzimas de restricción y hacer posible la clonación
de insertos de DNA en la forma y orientación determinada
3. Debe poseer marcadores genéticos seleccionables que permitan
identificar las células hospedadoras que contengan el vector.

OBJETIVO
 Aplicar la técnica de aislar DNA plasmídico bacteriano y
comprobar por electroforesis en gel de agarosa
RESULTADOS
DISCUSION
La lisis alcalina es un método utilizado para romper las membranas celulares y
liberar el ADN contenido en las células. Consiste en tratar las células con una
solución alcalina, como hidróxido de sodio (NaOH), que provoca un aumento del
pH y la desnaturalización de las proteínas y lípidos de la membrana celular. Esto
resulta en la ruptura de las membranas y la liberación del ADN intracelular. Como
el objetivo era purificar el ADN se tuvo que usar éste método.
En el laboratorio, se realizó un experimento de electroforesis de ADN plasmídico
de Escherichia coli recién purificado, y se encontró una sola banda en el gel
revelado con bromuro de etidio. Esto se debe a varios factores relacionados con
los fundamentos de la electroforesis y la exitosa purificación realizada en el
proceso.

La electroforesis es una técnica utilizada para separar y analizar moléculas

cargadas eléctricamente, como el ADN, en función de su tamaño y carga. Durante
el proceso de electroforesis, una corriente eléctrica se aplica a través de un gel de
agarosa, creando un campo eléctrico que mueve las moléculas de ADN a través
del gel. Las moléculas de ADN más pequeñas se mueven más rápidamente que
las más grandes y, por lo tanto, se separan en diferentes posiciones a lo largo del
gel.

En el caso de la purificación exitosa del ADN plasmídico de E. coli, se espera

encontrar una sola banda en la electroforesis. Esto se debe a que el ADN
plasmídico es una molécula circular extracromosomal que contiene una única
secuencia de ADN. Durante el proceso de purificación, se aísla el ADN plasmídico
de las células bacterianas, lo que significa que solo se obtiene una copia del
plásmido por célula.

Como resultado, cuando se carga el ADN plasmídico purificado en el gel de

electroforesis y se revela con bromuro de etidio, se espera observar una única
banda correspondiente al tamaño del ADN plasmídico. Dado que el ADN
plasmídico es una molécula relativamente pequeña en comparación con el ADN
genómico, su migración en el gel es más rápida y se posiciona en un solo lugar,
formando una sola banda en el gel revelado.

La presencia de una sola banda en la electroforesis indica que la purificación del

ADN plasmídico fue exitosa y que se obtuvo una muestra altamente enriquecida
de ADN plasmídico de E. coli. Esto es un resultado deseable, ya que demuestra
que el proceso de purificación fue eficiente en la eliminación de otras moléculas de
ADN y contaminantes celulares, dejando solo el ADN plasmídico de interés.
CONCLUSION
 La presencia de una sola banda en la electroforesis de ADN plasmídico
de E. coli recién purificado revelado con bromuro de etidio indica una
exitosa purificación del ADN plasmídico, eliminando contaminantes y
otras moléculas de ADN.
 La electroforesis permite separar y analizar el ADN según su tamaño y
carga eléctrica.

BIBLIOGRAFIA
 Birncom, H. (1983). Método de extracción de plásmido DNA.
Meth. Enzymol.pág 243-255
 Adolgene. Sistemas de expresión bacteriana.
Addgene.org//collections/bacterial-expression/
 Salido, E (1995). DNA. Biología Molecular. Facultad de
medicina