Introducción

 Preparación de material estéril

Los microorganismos como otros seres vivos son susceptibles a los cambios de condiciones
ambientales y en la medida en que se han podido adaptar a estos cambios, se han distribuido en
una gran diversidad de hábitats incluyendo los de condiciones extremas sobre todo de tipo físico
y químico.(Aquiahuatl Ramos & Pérez Chabela, 2004)
Dentro del laboratorio se llevan a cabo procesos de investigación biológica, lugar donde cada
procedimiento es estrictamente realizado de manera aséptica, lo que permite reducir la
probabilidad de contaminación microbiana y tener resultados óptimos.
Uno de los procedimientos fundamentales es la esterilización que consta de la eliminación de
todo tipo de microorganismos que podrían estar presentes en los materiales a usar o bien en el
ambiente donde se desarrollara la práctica. La esterilización es un método que puede realizarse
de diferentes formas y son utilizadas de acuerdo con sus propiedades y la finalidad de dicha
esterilización.
 Agentes físicos:
o Calor: El uso de temperaturas altas puede fácilmente destruir microorganismos, además, la
mayoría de los instrumentos de laboratorio resisten altas temperaturas.
Calor seco
¿Qué es?
Este método se realiza por medio de aire caliente ya sea en hornos, mecheros (de alcohol, bunsen
y Fisher). Puede esterilizar asas de inoculación y todo tipo de material de vidrio y quirúrgico.
¿Qué hace?
El calor seco desnaturaliza enzimas y destruye a los microorganismos por oxidación, lo que
provoca daño y destrucción en la estructura del material vivo y cambios en sus propiedades
fisicoquímicas.

mechero de alcohol mechero Fisher

Calor húmedo
¿Qué es?
Es un método que utiliza calor por vapor en un contenedor hermético cuyo interior es sometido a
altas temperaturas apoyándose de un liquido (agua). Uno de los aparatos más usados es el
autoclave que alcanza temperaturas de 121 °C a 134 °C. También puede usarse métodos
tradicionales como la olla de presión.
¿Qué hace?
El material se deja a esta temperatura durante 15 minutos para asegurarse de la destrucción y/o
coagulación de proteínas de endosporas, que son las estructuras bacterianas más resistentes al
calor (Aquiahuatl R. M. y Pérez M. 2004).

Autoclave

Autoclave tipo olla de presión

Radiaciones ionizantes:
o Comprende en uso de rayos beta y gamma que inactiva y elimina todo resto de
microorganismo
Radiación no ionizante:
o Luz UV: La esterilización ultravioleta es un proceso de eliminación de microorganismos
debido a los cambios fotoquímicos en los ácidos nucleicos. Indispensable para espacios
cerrados para obtener un ambiente estéril. La campana de flujo laminar puede ser usado
para este método.

Campana de flujo laminar

Su función principal es proporcionar un flujo de aire laminar unidireccional que ayuda a

minimizar la contaminación de las muestras durante la manipulación y el procesamiento. El
flujo de aire se dirige desde la parte superior de la campana hacia abajo, creando un
ambiente estéril dentro de la cabina.
 También es especialmente útil en trabajos que involucran manipulación de muestras de
microbiología, cultivo de células, producción de productos farmacéuticos, ensamblaje de
dispositivos electrónicos, entre otros

Campana de flujo laminar

 Agentes mecánicos
Filtración
Al usar el método de esterilización por filtración los microorganismos no se destruyen,
únicamente se separan del material a esterilizar. Solo puede usarse con fluidos tanto líquidos
como gaseosos. No es funcional con todos los tipos de microorganismos.

 Agentes químicos
Gaseoso
El uso de óxido de etileno hace reaccionar con los componentes celulares de los
microorganismos produciéndoles daño y llevándolos a la destrucción.
No gaseoso
Para eliminar ciertos microorganismos se usa aldehídos (glutaraldehído), acido peracético y
peróxido de hidrogeno.
  Medios de cultivo
El medio de cultivo es un sustrato o solución nutritiva que permite según sea el caso la
reproducción, el aumento, transporte o mantenimiento de organismos. Los requerimientos mas
relevantes para una solución nutritiva son el carbono, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrogeno.
En la alimentación de la solución nutritiva algunos organismos usan C02 (en este caso serían
autótrofos, al igual que las plantas). Como fuente de nitrógeno se suelen usar proteínas
parcialmente hidrolizadas, peptonas u otros componentes, como sodio (Na+), potasio (K+) y
vitaminas.(Rodríguez et al., 2021)
No obstante, muchos organismos necesitan un abastecimiento extra de componentes para lograr
el cometido.
Existen varios tipos de medios de cultivo:
 Nutritivo: permite que la mayor parte de los microrganismos crezcan, es un medio muy útil
porque permanece solido incluso a relativamente altas temperaturas, además el crecimiento
bacteriano lo hace en la superficie distinguiéndose mejor la colonias más pequeñas.

 Enriquecimiento: permite la multiplicación de determinados microorganismos sin llegar a

inhibir el crecimiento de los demás

 Diferencial: contiene componentes que previenen el desarrollo de microorganismos

selectivos. Esto posibilita que los microorganismos sean sencillos de cultivar. Un ejemplo es
el medio de Levine o agar EMB, que contiene entre sus componentes, lactosa como fuente de
carbono y dos colorantes, eosina y azul de metileno. Las bacterias que no atacan la lactosa
dan colonias transparentes y las que producen acidez a partir de la lactosa dan colonias rojas,
rosadas u oscuras.(Lopardo, n.d.)

 Papa dextrosa agar: la papa dextrosa agar es un polímero usado como medio de cultivo
microbiológico que se prepara a partir de infusión de patata y dextrosa. La base del medio es
altamente nutritiva, favorece el crecimiento de hongos y levaduras y permite la esporulación
y la producción de pigmentos en algunos dermatofitos.
La papa aporta carbohidratos complejos, proteínas y vitaminas, mientras que la dextrosa es un
azúcar simple que proporciona energía rápida para el crecimiento celular. El agar actúa como un
agente solidificante, permitiendo que el medio se solidifique y proporcionando una superficie
para que los microorganismos crezcan.
 Bibliografía:

Aquiahuatl Ramos, M. de los Angeles., & Pérez Chabela, M. de Lourdes. (2004). Manual de prácticas del
laboratorio de microbiología general. Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa,
Departamento de Biotecnología.

Lopardo, H. A. (n.d.). Introducción a la microbiología clínica FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Libros de

Cátedra.

Rodríguez, G., Gómez, A., Anaya, J., Velásquez, C., & Miniet, A. (2021). Elaboración de medios de cultivo
alternativos y viables para el crecimiento microbiano del Bacillus Subtilis. La U Investiga, 8(1), 86–94.
https://doi.org/10.53358/lauinvestiga.v8i1.472

De, P. D., & Vitro, 10 Unidades Para Uso. (s/f). Agar Papa Dextrosa. Insumolab.cl. Recuperado el 26 de
abril de 2023, de https://www.insumolab.cl/descargas/industria/placas_90mm/ficha_tecnica/
02.pdf