Esterilización de Material de laboratorio

Índice
a. Introducción
b. Objetivo
c. Desarrollo Teórico
d. Tabla de materiales, reactivos y equipos
e. Metodología
f. Resultados
g. Evidencias
h. Conclusiones
i. Referencias Bibliográficas
 a. Introducción
La preparación de los medios de cultivo microbiológico es el proceso de mezcla de
nutrientes, agentes amortiguadores y agentes destinados al mantenimiento del
equilibrio osmótico, además de inhibidores o indicadores selectivos para crear un
agar o caldo que sustente el crecimiento y la diferenciación de los
microorganismos. La preparación de los medios de cultivo microbiológico es una
tarea habitual en el control regular de los microorganismos descomponedores y
patógenos en las muestras microbiológicas.
El principal objetivo de los medios de cultivos es crear un ambiente adecuado para
el crecimiento, simulando las condiciones lo más cercanas posibles a las
naturales, asegurando así el apropiado funcionamiento de la maquinaria
enzimática de los microorganismos, lo cual implica un adecuado balance de
los componentes.
Existen medios cuya composición permite el crecimiento de:
1. Un gran número de especies (agar nutritivo, caldo ordinario, agar de
Sabouraud),
2. Determinados microorganismos (impidiendo el desarrollo de otros), son los
denominados medios selectivos.
3. Otros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas
fisiológicas o test bioquímicos (utilización de citratos, acidificación a partir de
azúcares, etc.).
 b. Objetivo
Conocer el procedimiento para preparar un medio de cultivo usando agar.
 c. Desarrollo Teórico
Cuando se habla de esterilización, se refiere a la eliminación total de
microorganismos, incluidas formas resistentes de estos como las esporas. La
desinfección elimina buena parte de microorganismos presentes en superficies,
pero no elimina sus formas resistentes. Además, el proceso de esterilización
normalmente tiene una duración más extensa y es un proceso más complejo. 
Por otra parte, existe la asepsia, que se define como la condición de una superficie
que está libre de microrganismos patógenos. En las técnicas asépticas se eliminan
bacterias patógenas, virus, hongos y esporas dañinas, que son todos perjudiciales
para la salud. La esterilización no discrimina entre microrganismo dañino y
beneficioso, así que se elimina todo microrganismo vivo. 
No se puede hablar de esterilización sin considerar el concepto de
microorganismo. Un microorganismo es un agente microscópico vivo e
imperceptible a los sentidosque generalmente está agrupado en colonias, aunque
bien puede estar como una unidad formadora de colonias (U.F.C.), la que se
desarrolla en un medio apropiado para formar colonias perceptibles. Los
microorganismos pueden ser patógenos (productores de ciertas enfermedades) o
banales (los habitualmente hallados en los alimentos, el aire, el polvillo ambiental,
que no perjudican al hombre.
El hecho de que existan distintos tipos de gérmenes en el medio ambiente, crea
grandes dificultades en los estudios bacteriológicos, cuando es necesario obtener
las especies microbianas en estado de pureza, ya que tanto el instrumental como
los medios de cultivo son invadidos con suma facilidad por los microbios del medio
ambiente.

Con el fin de subsanar éstos inconvenientes se practica la esterilización,

procedimiento que consiste en destruir todos los gérmenes vivos que existan
sobre los objetos o sustancias que se desean libre de ellos (asépticos).
Los Microorganismos pueden clasificarse en criorresistentes, que son los
resistentes al frío y termorresistentes o resistentes a las altas temperaturas,
aunque la clasificación más común es por la temperaturaa la que se reproducen.
Así se los puede clasificar en Criófilos (-5 a 14 °C); Mesófilos (25 a 47 °C) y
Termófilos (50 hasta 113 °C). Por ejemplo, muchos hongos se destruyen con la
temperatura, pero sus esporas aún son viables y cuando encuentran un medio
apropiado, rico en nutrientes y humedad, se reproducen. Por tal motivo la
tecnologíapara su destrucción debe considerar éstas variables.
Algunos microrganismos tienen la capacidad de “esporular”, es decir pasar a un
estado de espora. Cuando un microrganismo esporula, su pared celular se hace
más gruesa, dura e impermeable. Estas características la protegen de factores
ambientales hostiles tales como temperaturas extremas, radiación e incluso
escasez de nutrientes. Por comparar, se podría asimilar la esporulación a una
especie de “hibernación” de los microrganismos. Una vez el ambiente se vuelve
más benevolente, el microrganismo vuelve a su estado normal y activo.
La esterilización en el laboratorio es un proceso en el que, además de eliminar
suciedad, también se produce la eliminación de todas las formas de vida
microbiana como virus, bacterias, hongos y protozoos. Esto asegura que los
productos, materiales, ropa, superficies, entre otros, sean seguros, evitando la
contaminación.
Hay varias formas de realizar la esterilización, la decisión de qué proceso utilizar
debe basarse en el tipo de material y el riesgo de contaminación. Los métodos
más utilizados son calor seco, productos químicos y calor húmedo.
Esterilización por Calor Húmedo
El calor húmedo provoca la desnaturalización y coagulación de proteínas y
fluidización de lípidos. El vapor tiene mayor poder de penetración y elimina las
formas vegetativas de procariotas, virus y hongos y sus esporas.
Ejemplos: Esterilización en autoclave, ebullición y pasteurización.
La esterilización en autoclave se utiliza en los diversos sectores de los servicios de
salud porque es asequible, fácil de usar y la diversidad de artículos que se pueden
esterilizar. Sin embargo, se debe prestar atención a los materiales, ya que los
materiales termo sensibles y los que se oxidan con el agua no deben pasar por
estos procesos.
Los factores más importantes en este proceso son:
o La eficacia y rapidez del equipo para remover el aire de la cámara y
sustituirlo por vapor evitando fluctuaciones de la temperatura.
o El vapor debe proceder de agua limpia, sin contaminantes y generarse con
un porcentaje de agua líquida muy bajo (menor del 3%).
o El vapor debe estar en contacto directo con todo el material, el apilamiento
excesivo o incorrecto pueden disminuir la eficacia del proceso.
o Las piezas deben estar limpias, el vapor no penetrará una costra de
suciedad.
Esterilización por Calor Seco
El calor seco provoca la oxidación de los componentes orgánicos de las células,
penetrando las sustancias más lentamente que el calor húmedo y, por lo tanto,
requiere temperaturas más altas y tiempos más prolongados, por lo que este
método de esterilización solo debe usarse cuando es inadecuado el contacto con
el vapor. El uso de temperaturas muy altas puede interferir con la estabilidad de
algunos materiales, por ejemplo, el acero cuando se somete a temperaturas muy
altas pierde su temple; para otros materiales como caucho y telas, además de que
la temperatura utilizada es altamente destructiva, el poder de penetración del calor
seco es bajo, por lo que la esterilización por este método es inadecuada. Los
materiales indicados para esterilizar por este método son instrumentos de corte o
de punta, que pueden oxidarse con vapor, vidriería, aceites y ungüentos.
Para complementar el ciclo y ser realmente efectivo, el proceso de esterilización
en el laboratorio no se puede interrumpir, ya que depende de la relación tiempo x
temperatura. En un horno, esta interrupción se ve facilitada por la ausencia de
cerraduras como en una autoclave, considerado así más seguro, ya que no se
puede abrir antes de que finalice el ciclo. Sin embargo, para que el proceso sea
verdaderamente efectivo, ambos equipos deben estar en buen estado, con
mantenimiento preventivo al día, empaque y distribución de cargas adecuadas
para verificar el grado de esterilización mediante indicadores químicos o
biológicos.
El calentamiento del horno es lento y por lo tanto debe ser interrumpido. La
esterilización en autoclave debe realizarse a 121°C durante 15 a 30 minutos
mientras que en el horno esta temperatura y tiempo son superiores: 160 a 180°
durante 1 a 2 horas.
Para evitar fallas en el proceso, se debe tener cuidado, como: no dejar que los
elementos distribuidos dentro de la cámara toquen las paredes del equipo
(también dejar un espacio entre los materiales para favorecer la circulación del
aire); el envoltorio debe ser adecuado para el tipo de esterilización y para el
material a esterilizar, tales como: cajas metálicas, papel de aluminio y botellas de
vidrio refractario; el equipo debe estar calibrado y validado.
Esterilización por Métodos Químicos
Puede conseguirse desinfectar y/o esterilizar material de laboratorio usando
diversos productos químicos tanto en fase gaseosa como en fase líquida por su
capacidad para eliminar microorganismos. Los métodos químicos permiten la
esterilización de materiales e instrumentos a baja temperatura siempre que se
disponga del equipamiento e instalaciones adecuadas para controlar su
peligrosidad.
El óxido de etileno gaseoso es uno de los agentes químicos de esterilización
usados habitualmente con productos termosensibles que no soportan las
temperaturas de los procedimientos por calor. Por su capacidad de difusión en
conductos muy estrechos suele utilizarse para catéteres y similares. Es un agente
alquilante capaz de destruir los microorganismos, incluídos los virus. Debe
manejarse con cuidado por ser inflamable, potencialmente explosivo y
cancerígeno.
Los Aldehídos como la Formalina (formaldehído, metanal, formol) pueden actuar
como potentes agentes de esterilización capaces incluso de destruir esporas. El
formaldehído puro es un gas que puede comercializarse en diferentes formas para
su uso, disuelto en agua y/o alcohol y también como pastillas de paraformaldehído
que al calentar liberan el gas. Por ser un veneno protoplasmático debe evitarse el
contacto con la piel y la exposición a sus vapores.
Esterilización por Radiaciones Ionizantes
Las radiaciones ionizantes pueden usarse para esterilizar por su capacidad para
destruir microorganismos. La radiación gamma se caracteriza por su alta energía y
poder de penetración que permite su uso con los materiales y productos
envasados, característica muy importante para los materiales destinados a cultivos
y preparaciones biológicas como las Placas de Petri estériles.
Este método es muy efectivo puesto que puede ajustarse a cada necesidad
controlando la dosis de irradiación, que para una fuente determinada es el tiempo
de exposición. No produce daños al material, pero requiere una instalación
compleja con blindaje biológico.
Como apenas produce calor y no genera residuos se puede usar con muchos de
los materiales de laboratorio e instrumental clínico de metal, vidrio y plástico.
 d. Tabla de materiales, reactivos y equipos
Función Imagen
Materiales Cajas Petri (x3) Es utilizado para
poder observar
diferentes tipos
de muestras
biológicas y
químicas.
Pipetas (x2) Instrumento
volumétrico de
laboratorio,
que mide
alícuotas de
líquido con
precisión 
Matraz Contener y medir
Erlenmeyer muestras de
líquidos
químicos, pero
también se
puede usar para
mezclar, calentar
y hervir
productos
químicos.
Equipos Horno de Comúnmente
circulación usado
para deshidratar
reactivos de
laboratorio o
secar
instrumentos.
e. Metodología

f. Para cada técnica se

utilizará el material este
completamente limpio:
g. Para pipetas
h. • cortar trozos de papel
craft de 2x30 cm
aproximadamente.
i.• acomodar la lapicera de
forma diagonal en uno de los
extremos de lapicera
j.• envolver de forma que el
papel no quede flojo ni muy
arrugado y doblar el papel
sobrante,
k. si este excede de 2 cm
cortar
 l.• asegurarnos de que este de
la manera correcta y pegar un
trozo de cinta por seguridad
en
m. cada uno de los extremos
Para cada técnica se utilizará el material completamente limpio.
Para pipetas
 Cortar trozos de papel estraza de 2x45 cm aproximadamente.
 Acomodar de forma diagonal en uno de los extremos de la pipeta.
 Envolver de forma que el papel no quede flojo ni muy arrugado, y doblar el
papel sobrante. (Si este excede de 2 cm se debe cortar)
 Asegurar que esté de la manera correcta y pegar un trozo de cinta por
seguridad en cada uno de los extremos.
Para cajas Petri
 Cortar trozos de papel estraza de 22x32 cm
 Colocar la caja en el centro del papel
 Doblar el papel a la mitad, envolviendo la caja Petri
 Con el papel que sobre, doblamos a los extremos y formamos pequeños
triángulos.
 Pegamos con cinta por la parte contraria donde quedo el doblez inicial
 Finalmente, ponemos un poco de cinta formando una cruz.
Para matraces
 Cortamos un trozo de algodón, preferentemente largo.
 Cortamos también un trozo de gasa.
 Ponemos algodón sobre la gasa, y lo cerramos en forma de envoltorio.
 Introducimos el algodón con la gasa en la boquilla del matraz, dejando un
pequeño trozo afuera.
 Posteriormente, hacemos un gorrito con papel estraza.
 Lo colocamos sobre el algodón que quedó por fuera.
f. Resultados
Se debe utilizar el papel correcto, de lo contrario se romperá y el material
no queda esterilizado.
Si la cinta no se colorea, la práctica se rechaza.
Si el material no se envuelve correctamente a pesar de que la cinta se
coloree, el material no está estéril.
No se necesita mucho tiempo para la esterilización.

Material en el horno preparado para esterilizarse

 g. Evidencias

Pipetas envueltas con el papel estraza

Colocando la caja Petri en el centro del papel estraza para posteriormente

envolverla
Colocando el tapón de algodón y gasa en la boquilla del matraz

Introduciendo todo el material que fue envuelto en papel estraza en el horno para
ser esterilizado
h. Conclusiones

RESULTADOS:

CONCLUSION
En esta práctica pudimos
comprender y conocer más
detalladamente la importancia de
la
esterilización del material del
laboratorio para las prácticas de
microbiología, porque al
esterilizar
podemos matar microorganismos
los cuales nos pueden afectar o
alterar el análisis de nuestros
resultados.
Al realizar la práctica tengamos
las bases necesarias y así poder
aplicarlas. Cada material tiene su
diferente técnica y
procedimiento y así evitar que se
contamine y lleguemos a un
resultado
correcto. Es importante ya que
evitamos que el material se
contamine con bacterias u
hongos y
con esto también creamos
conciencia con lo útil y necesario
que es en el aspecto de la
microbiología.
En esta práctica pudimos comprender y conocer más detalladamente la
importancia de la esterilización del material del laboratorio para las prácticas de
microbiología, porque al esterilizar podemos matar microorganismos, los cuales
nos pueden afectar o alterar el análisis de nuestros resultados.
Al realizar la práctica tenemos las bases necesarias y así podemos aplicarlas.
Cada material tiene diferente técnica y procedimiento, para así evitar que se
contamine y lleguemos a un resultado correcto.
Finalmente, la esterilización de material es importante, ya que evitamos que el
material se contamine con bacterias u hongos, y con esto también creamos
conciencia de lo útil y necesario que es en el aspecto de la microbiología.
 j. Referencias bibliográficas
https://www.sigmaaldrich.com/MX/es/applications/microbiological-testing/microbial-
culture-media-preparation
https://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/
practicoIII.pdf
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/
preparacion-de-medios-de-cultivo