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1. TÍTULO
2. APELLIDOS Y NOMBRES
Grace Barreto
Dayana Cardenas
Jennifer Collaguazo
Nicole Ortega
Mishell Rea
3. OBJETIVOS
3.1 GENERAL
Conocer y realizar los diferentes medios de cultivo, para el crecimiento bacteriano utilizando
una buena técnica y esterilizando correctamente los materiales a usar.
3.2 ESPECIFICOS
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forma de esterilización.
microbiana en el laboratorio
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4. MARCO TEORICO
INTRODUCCION
La esterilización del material y la preparación adecuada de medios de cultivo son dos aspectos
diferentes técnicas como: calor, sustancias químicas o radiación. Los métodos más comunes
de esterilización son la autoclave, la esterilización por calor seco, la esterilización por óxido
completamente seco antes de su uso para evitar la contaminación por microorganismos que
puedan estar presentes en el agua. Por otro lado, la preparación adecuada de medios de cultivo
laboratorio. Los medios de cultivo pueden ser sólidos o líquidos y pueden contener una
importante seguir las instrucciones de preparación de los medios de cultivo con precisión,
asegurándose de que todos los ingredientes estén completamente disueltos y que el pH del
medio sea el adecuado para los microorganismos que se desean cultivar. En resumen, la
esterilización del material y la preparación adecuada de medios de cultivo son esenciales para
Los medios de cultivo consisten en una mezcla de agua y sustancias que juntas proporcionan
los nutrientes que los microorganismos necesitan para desarrollarse. La composición del
"el proceso de eliminar todos los microorganismos, incluidas las formas resistentes, de un
que incluyen: calor (seco o húmedo), filtración (para sustancias termolábiles y aire), radiación
diminuto tamaño, los microorganismos no pueden ser estudiados como individuos, sino que
deben ser manejados como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos, es decir, facilitar su
naturales. hábitat. En estos ambientes, se deben eliminar todos los microorganismos que
interfieren en el estudio de los microorganismos diana, y además se les debe proporcionar los
métodos de cultivo y Prepare" a que los materiales y medios utilizados estén libres de
Medios de Cultivo
estratégicamente para la función específica para la que fue creado. Es decir, todos tienen una
base que gestiona las instrucciones para determinadas funciones.
En el estudio de Gil (2019) Hoy en día, existen muchas marcas comerciales que distribuyen
diversos medios de cultivo. Los medios se liofilizan o deshidratan y se protegen de la luz en
frascos herméticos. Cada medio se etiqueta con el nombre del medio, la composición, el
número de lote, el peso y se pesa para preparar 1 litro de medio.
Se utiliza agua destilada como diluyente. Se disolvió una cantidad pesada en 1 litro de agua
destilada hasta que la mezcla fue homogénea. La mayoría de los medios se realizan por
autoclave y se esterilizan a 15 libras de presión durante 15 minutos a 121 °C. Los medios
líquidos esterilizados en autoclave se dividieron en alícuotas en los respectivos tubos de
trabajo y los medios sólidos se esterilizaron en autoclave en matraces Erlenmeyer.
Este último se deja hasta que alcance los 55 °C y se sirve en cajas de Petri bajo campana de
flujo laminar o cerca de un mechero Bunsen. Estos deben ser guardados boca abajo en la
incubadora. Algunos cultivos sólidos se suministran en tubos. Esto le permite solidificarse en
forma de grumos (rectos) o picos (angulados). Antes de utilizar el medio preparado, ya sea
sólido o líquido, debe cultivarse antes de sembrar la muestra.
Según su consistencia
Líquido
Sólido
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Contiene 1,5-2% de agar. El compuesto solidificado tiene una superficie que resiste
suficientemente el desplazamiento sin romper el anillo de platino.
Semisólidos
Según su Composición
Estos son los más utilizados hoy en día, los medios deshidratados que compramos en las
tiendas comerciales, y están estratégicamente diseñados de acuerdo al tipo de
microorganismos aislados, asegurando así al tipo de microorganismo que se desea aislar.
Es una combinación de medios sintéticos con elementos naturales añadidos para enriquecer el
entorno.
Estos son medios especiales para el cultivo de virus. Estos microorganismos no pueden
sobrevivir fuera de las células, por lo que deben contener tejido vivo o células de origen
animal o vegetal. (Gil, 2019)
Esterilización
Este procedimiento es muy útil dentro del ámbito de laboratorio ya que con el logramos:
• Todos los objetos deben haberse limpiado a fondo antes de ser sometidos a al proceso de
esterilización o a la desinfección de alto nivel.
FISICOS
1. Calor Húmedo
2- Calor Seco
• Poupinel
QUIMICOS
1- Líquidos
• Glutaraldehido al 2%
2- Gas
• Gas de formaldehído
3- Plasma
PARAMETROS DE ESTERILIZACION
• Temperatura
• Humedad
• Tiempo
• Saturación o penetración
CICLO DE ESTERILIZACION
Pipetas
● Cajas petri
● Tubos de ensayo
● Autoclave
● Balanza
● Espátulas
● Folia de aluminio
● Erlenmeyer
● Medios de cultivo
● Agua destilada
PROCEDIMIENTO
1. Preparar los medios de cultivo deshidratados, siguiendo estrictamente las indicaciones del
fabricante:
- Durante la disolución, cubrir la boca del matraz con papel aluminio (evita la formación de
espuma y el derrame del medio) y hacer un agujero pequeño (para dejar salida al vapor)
2. Esterilizar en autoclave.
deshidratado (Agar MacConkey) con una característica de color beige rosado, se pesó
100ml de agua destilada dentro de una botella, esta cantidad nos ayudara para ser vertido en 4
cajas Petri, luego la cerramos y la colocamos encima del soporte y la malla para ser calentada
con ayuda del mechero hasta que se logre obtener una solución homogénea.
1. Preparar un área estéril (mesa, alcohol, mechero ó usar cámara de flujo laminar).
2. Marcar las cajas petri (en la base) y tubos de cultivo. Indicaciones generales: medio de
b. Tubos de cultivo:
iv. Los tubos con medio de cultivo agar se deberán colocar en una superficie inclinada de tal
forma que el medio se solidifique a una distancia de 1-2cm de la boca del tubo.
debidamente rotuladas:
a. Cajas petri de vidrio: colocar una sobre otra en grupos de 4-6 cajas.
5. Almacenar en refrigeración.
- Distribución del Agar MacConkey: Se preparó un área estéril (Limpieza con alcohol de la
mesa, mechero o flujo laminar), luego se tomó las 4 cajas Petri y se colocó una encima de
otra, para mejor manipulación se colocó solo dos una encima de otra y lo mismo con el resto
de las cajas Petri, en estas se vertió hasta la mitad para lograr tener el medio de cultivo
requerido, exactamente teniendo en cada caja Petri una cantidad de 25ml a una temperatura de
45°C, antes de llevar a la refrigeración los etiquetamos con el grupo de trabajo, fecha.
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1. Tubos de ensayo: con su debido tapón de algodón y gasa en frascos, o con tapa
2. Pipetas: envolver con folia de aluminio (señalar la ubicación de la punta) ó usar tubos
3. Cajas Petri de vidrio: envolver con papel kraff o folia de aluminio (puede usarse también
papel reciclado)
7. Frascos de medio de cultivo: sin cubrir, únicamente tapados, rotulados con marcador en las
Colocar en la autoclave (programar para que alcance 121ºC y mantener a esta temperatura
durante 15-20 minutos a 1,2 atmósferas de presión). Al término de este proceso el material se
encuentra listo para utilizar, no obstante, hay que tomar varias precauciones para evitar su
posterior contaminación.
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- Para evitar que haya microorganismo que alteren al medio de cultivo todo este proceso
debe hacerlo junto al mechero, en cada una de las cajas Petri se las coloca en orden
con su debida tapa sin tener mayor manipulación y no contaminar el área. Colocar en
la autoclave (todo esto a un alcance de 121°C de temperatura durante 15-20 min a 1,2
ser utilizado nuevamente, eso sí teniendo en cuenta las precauciones debidas para no
6.- CUESTIONARIO
60 g 1000 ml
X 600 ml
(60 * 600) / 1000
Total = 36 g
Respuesta: Se deberá pesar 36g del agar TSI.
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3. ¿Cuáles son los métodos de esterilización más utilizados en microbiología? ¿En qué tipo de
materiales se aplica cada uno?
TABLA 1
Métodos de Esterilización
FÍSICOS QUÍMICOS
Calor seco: Utilizado en la estufa. Óxidos de etileno: Utilizado en productos
termolábiles como plástico, equipamiento
electrónico, etc.
Calor Húmedo: Utilizado en autoclave. Plasma de peróxido de hidrógeno.
Radiaciones ionizantes: Gamma, beta y Pastillas de formol.
ultravioleta.
Filtración. Soluciones químicas:
Ebullición. Glutaraldehído
Flameo. Formal
2013)
de mantener estables un pH
Se pudo observar que hubo un pequeño error al momento de calcular los pesos en la balanza
se pudo deducir que talvez la balanza estuvo mal o talvez no se encero bien y que por esa
razón no salió bien el peso del agar y no salió como fue esperado el color, la textura dentro ya
de la caja Petri, entonces se volvió a repetir para saber cómo en realidad es el agar McConkey.
En lo que se observo en el error de la preparación fue su color que fue medio rosado pálido y
- Se pudo observar que cada medio de cultivo tiene su técnica de preparación y que es muy
importante saber la teoría ya que con ello nos podemos ayudar a manejarla mejor, cada
- La técnica más común que se diría es de echar alcohol por toda la zona que se va a trabajar,
pero sobre todo es mantener el trabajo que se está realizando cerca del mechero para que así
no se contamine el cultivo.
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- Una de las recomendaciones seria verificar siempre que la balanza este bien encerada para
tener buenos resultados, ya que si no hay la cantidad exacta o necesaria de agar para la mezcla
con el agua destilada pues esta no se podrá utilizar porque no servirá para nada.
- La asepsia asegura la ausencia de todas las bacterias y de todas las formas de resistencia a la
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10.- BIBLIOGRAFIA
CES. (27 de Febrero de 2019). Reglamento de Régimen Académico . RRA. Quito, Pichincha,
Ecuador.
Lifeder. https://www.lifeder.com/medios-de-cultivo/
Mdmadmin, M. (2018, 1 febrero). ¿Para qué sirve un agar microbiología? Mdm Científica.
https://mdmcientifica.com/agar-microbiologia/
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Colombia. https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/metodos-de-
esterilizacion
pasteurizacion/
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/preparacion-de-
medios-de-cultivo
https://www.lifeder.com/preparacion-medios-cultivo/