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INSTITUTO SUPERIOR TECNOLÓGICO SUCRE

CARRERA DE GESTION AMBIENTAL

INFORME PRÀCTICA DE LABORATORIO / CASOS DE ESTUDIO

MICROBIOLOGIA / SEGUNDO SEMESTRE


Docente responsable: Ing. Alejandra López
Fecha: 01/02/2023

1. TÍTULO

Preparación de medios de cultivo

2. APELLIDOS Y NOMBRES

Grace Barreto

Dayana Cardenas

Jennifer Collaguazo

Nicole Ortega

Mishell Rea

3. OBJETIVOS

3.1 GENERAL

Conocer y realizar los diferentes medios de cultivo, para el crecimiento bacteriano utilizando
una buena técnica y esterilizando correctamente los materiales a usar.

3.2 ESPECIFICOS
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- Aprender las técnicas de preparación de medios de cultivo de diferentes clases y su

forma de esterilización.

- Conocer los principios generales de la preparación y técnicas de esterilización de

diversos materiales y medios de cultivo de uso común en Microbiología. –

- Conocer el efecto de las condiciones de asepsia en el control de la contaminación

microbiana en el laboratorio
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4. MARCO TEORICO

INTRODUCCION

La esterilización del material y la preparación adecuada de medios de cultivo son dos aspectos

fundamentales en microbiología para garantizar la ausencia de microorganismos no deseados

y obtener resultados precisos en los experimentos. La esterilización del material se refiere al

proceso de eliminación de todos los microorganismos presentes en un objeto o superficie,

incluyendo bacterias, virus y hongos. Esto se puede lograr mediante la aplicación de

diferentes técnicas como: calor, sustancias químicas o radiación. Los métodos más comunes

de esterilización son la autoclave, la esterilización por calor seco, la esterilización por óxido

de etileno y la esterilización por radiación. Es importante asegurarse de que el material esté

completamente seco antes de su uso para evitar la contaminación por microorganismos que

puedan estar presentes en el agua. Por otro lado, la preparación adecuada de medios de cultivo

se refiere a la mezcla de ingredientes necesarios para cultivar microorganismos en el

laboratorio. Los medios de cultivo pueden ser sólidos o líquidos y pueden contener una

variedad de nutrientes para apoyar el crecimiento de diferentes tipos de microorganismos. Es

importante seguir las instrucciones de preparación de los medios de cultivo con precisión,

asegurándose de que todos los ingredientes estén completamente disueltos y que el pH del

medio sea el adecuado para los microorganismos que se desean cultivar. En resumen, la

esterilización del material y la preparación adecuada de medios de cultivo son esenciales para

garantizar la precisión y fiabilidad de los resultados en microbiología. Estos procesos ayudan

a minimizar la contaminación cruzada y aseguran que los microorganismos que se cultivan

sean los que se desean estudiar. (Miguel, 2023)


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Los medios de cultivo consisten en una mezcla de agua y sustancias que juntas proporcionan

los nutrientes que los microorganismos necesitan para desarrollarse. La composición del

medio varía según el microbiota en estudio, y la preparación del medio depende de la

complejidad química (composición), estado físico y otras condiciones deseadas (pH,

concentración, etc.). Para el estudio de microorganismos es fundamental, entre otras cosas,

disponer de materiales y medios estériles. En microbiología, la esterilización se define como

"el proceso de eliminar todos los microorganismos, incluidas las formas resistentes, de un

objeto, medio o superficie" y su aplicación garantiz Existen varios métodos de esterilización

que incluyen: calor (seco o húmedo), filtración (para sustancias termolábiles y aire), radiación

y aplicación de gas de óxido de etileno (para jeringas y estuches de plástico). "Por su

diminuto tamaño, los microorganismos no pueden ser estudiados como individuos, sino que

deben ser manejados como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos, es decir, facilitar su

reproducción in vitro en ambientes especiales que proporcionen condiciones similares a sus

naturales. hábitat. En estos ambientes, se deben eliminar todos los microorganismos que

interfieren en el estudio de los microorganismos diana, y además se les debe proporcionar los

nutrientes necesarios para su crecimiento y reproducción. En esta práctica aprenderemos el

concepto de esterilización, métodos de realización y control. ; y las características de algunos

métodos de cultivo y Prepare" a que los materiales y medios utilizados estén libres de

microorganismos. (Libretexts, 2022)

Medios de Cultivo

Los medios son preparaciones nutricionales especiales para la recolección, aislamiento y


mantenimiento de microorganismos bacterianos y fúngicos. Estos medios son sólidos,
líquidos o semisólidos. Independientemente del tipo de medio, todos tienen una cosa en
común: promueven el crecimiento de microorganismos específicos. La diferencia radica en su
configuración, que determina su utilidad final. Cada medio de cultivo existente está diseñado
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estratégicamente para la función específica para la que fue creado. Es decir, todos tienen una
base que gestiona las instrucciones para determinadas funciones.

Tenga en cuenta que el medio de post-incubación debe tener condiciones de temperatura y


oxígeno adecuadas para el tipo de bacteria u hongo a aislar. Finalmente, podemos decir que
los medios de comunicación nos han ayudado a estudiar diferentes aspectos tanto de las
bacterias como de los hongos. (Gil, 2019)

El agar microbiano es un agente espesante muy utilizado en la preparación de medios para


facilitar la identificación, crecimiento y desarrollo de otros microorganismos que crecen en
sustancias alimenticias artificiales preparadas en laboratorio llamadas cultivos, por lo que
debe estar libre de microorganismos contaminantes. (Mdmadmin, 2018)

Preparación y Clasificación del medio de cultivo

En el estudio de Gil (2019) Hoy en día, existen muchas marcas comerciales que distribuyen
diversos medios de cultivo. Los medios se liofilizan o deshidratan y se protegen de la luz en
frascos herméticos. Cada medio se etiqueta con el nombre del medio, la composición, el
número de lote, el peso y se pesa para preparar 1 litro de medio.

Se utiliza agua destilada como diluyente. Se disolvió una cantidad pesada en 1 litro de agua
destilada hasta que la mezcla fue homogénea. La mayoría de los medios se realizan por
autoclave y se esterilizan a 15 libras de presión durante 15 minutos a 121 °C. Los medios
líquidos esterilizados en autoclave se dividieron en alícuotas en los respectivos tubos de
trabajo y los medios sólidos se esterilizaron en autoclave en matraces Erlenmeyer.

Este último se deja hasta que alcance los 55 °C y se sirve en cajas de Petri bajo campana de
flujo laminar o cerca de un mechero Bunsen. Estos deben ser guardados boca abajo en la
incubadora. Algunos cultivos sólidos se suministran en tubos. Esto le permite solidificarse en
forma de grumos (rectos) o picos (angulados). Antes de utilizar el medio preparado, ya sea
sólido o líquido, debe cultivarse antes de sembrar la muestra.

Estos medios de cultivo tienden a clasificarse ya sea por su consistencia, su composición y su


función.

Según su consistencia

Líquido

El agar-agar no está incluido. El crecimiento bacteriano o fúngico se evidencia por la turbidez


del caldo, que inicialmente es translúcido.

Sólido
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Contiene 1,5-2% de agar. El compuesto solidificado tiene una superficie que resiste
suficientemente el desplazamiento sin romper el anillo de platino.

Semisólidos

Como contiene alrededor de un 0,5% de agar, se encuentra en un estado intermedio entre


líquido y sólido. Perfecto para monitorear el movimiento de los medios. También se
recomienda para la conservación de cepas ya que retiene la humedad por más tiempo.

Según su Composición

Medios de cultivo natural

Se trata de sustancias extraídas directamente de la naturaleza para el crecimiento de bacterias,


proporcionándoles un entorno similar al que normalmente desarrollan en los ecosistemas.

Medios de cultivo sintéticos

Estos son los más utilizados hoy en día, los medios deshidratados que compramos en las
tiendas comerciales, y están estratégicamente diseñados de acuerdo al tipo de
microorganismos aislados, asegurando así al tipo de microorganismo que se desea aislar.

Medios de cultivo semisintético

Es una combinación de medios sintéticos con elementos naturales añadidos para enriquecer el
entorno.

Medios de cultivo celulares

Estos son medios especiales para el cultivo de virus. Estos microorganismos no pueden
sobrevivir fuera de las células, por lo que deben contener tejido vivo o células de origen
animal o vegetal. (Gil, 2019)

Esterilización

En el estudio de (Colombia, 2011) La esterilización es un proceso a través del que se logra la


destrucción total de los microorganismos viables presentes en un determinado material.

Este procedimiento es muy útil dentro del ámbito de laboratorio ya que con el logramos:

La desinfección terminal son procedimientos que se llevan a cabo para la destrucción de


microorganismos patógenos.

• Los residuos orgánicos y la biocarga microbiana se reducen sustancialmente, de que los


objetos pueden utilizarse con seguridad
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• La esterilización elimina los microorganismos en sus fases vegetativas y de espora. No


obstante, para que el proceso sea eficaz, la biocarga de los objetos debe ser relativamente
baja.

• Todos los objetos deben haberse limpiado a fondo antes de ser sometidos a al proceso de
esterilización o a la desinfección de alto nivel.

Los métodos de esterilización se clasifican en Físicos y Químicos.

FISICOS

1. Calor Húmedo

• Autoclave a vapor saturado

2- Calor Seco

• Poupinel

QUIMICOS

1- Líquidos

• Glutaraldehido al 2%

• Peróxido de Hidrogeno estabilizado al 6 %

• Acido Peracético 0.2 al 30 %

2- Gas

• Gas de oxido de etileno

• Gas de formaldehído

• Vapor de Peróxido de Hidrogeno

3- Plasma

• Plasma de peróxido de hidrogeno


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• Plasma de ácido peracético.

PARAMETROS DE ESTERILIZACION

Se deben considerar 2 tipos de parámetros para todos los métodos de esterilización.

Estos parámetros son están asociados al producto y al proceso

Parámetros asociados al Producto:

• Biocarga: grado de contaminación con microorganismos y residuos orgánicos

• Biorresistencia: factores como la sensibilidad al calor y/o humedad y la estabilidad del


producto

• Biostato: fase nutricional, física y /o de reproductividad de los microorganismos.

• Bioproteccion: características de los materiales de empaquetado.

• Densidad: factores que afectan a la penetración y evacuación del agente

Parámetros asociados al Proceso:

• Temperatura

• Humedad

• Tiempo

• Pureza del agente, el aire y efectos residuales

• Saturación o penetración

• Capacidad del esterilizador y posición de los objetos dentro de la cámara.

CICLO DE ESTERILIZACION

Etapas del Proceso:

• Calentamiento y/o penetración del agente

• Tiempo de eliminación (es decir de exposición al agente)


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• Factor de seguridad para la biocarga

• Evacuación o dispersión del agente.

5. METODOLOGÍA (MATERIALES Y MÉTODOS)

Pipetas

● Cajas petri

● Tubos de ensayo

● Tapas plásticas autoclavables

● Frascos para medios de cultivo (autoclavables)

● Autoclave

● Balanza

● Espátulas

● Folia de aluminio

● Erlenmeyer

● Medios de cultivo

● Agua destilada

PROCEDIMIENTO

⮚ PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

1. Preparar los medios de cultivo deshidratados, siguiendo estrictamente las indicaciones del

fabricante:

- Pesar e hidratar con la mayor exactitud posible


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- Durante la disolución, cubrir la boca del matraz con papel aluminio (evita la formación de

espuma y el derrame del medio) y hacer un agujero pequeño (para dejar salida al vapor)

- Disolver completamente el medio, evitar quemar la parte inferior del recipiente.

- Colocar la tapa del frasco autoclavable

2. Esterilizar en autoclave.

- Preparación y Esterilización de medios de cultivo: Se pesaron medios de cultivos selectivo y

deshidratado (Agar MacConkey) con una característica de color beige rosado, se pesó

exactamente 5,155g previamente colocados en una caja improvisada de aluminio para no

contaminar el agar y no tener un error en la medición necesaria, esta cantidad es colocada en

100ml de agua destilada dentro de una botella, esta cantidad nos ayudara para ser vertido en 4

cajas Petri, luego la cerramos y la colocamos encima del soporte y la malla para ser calentada

con ayuda del mechero hasta que se logre obtener una solución homogénea.

⮚ DISTRIBUCIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

1. Preparar un área estéril (mesa, alcohol, mechero ó usar cámara de flujo laminar).

2. Marcar las cajas petri (en la base) y tubos de cultivo. Indicaciones generales: medio de

cultivo, grupo de trabajo, fecha.

3. Distribuir suavemente el medio de cultivo, a temperatura óptima (45°C):

a. Cajas petri: 15-20 ml aproximadamente


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b. Tubos de cultivo:

i. Medios líquidos: 2-3 ml

ii. Medios semilíquidos: 2-3 ml

iii. Medios sólidos: 6-10 ml

iv. Los tubos con medio de cultivo agar se deberán colocar en una superficie inclinada de tal

forma que el medio se solidifique a una distancia de 1-2cm de la boca del tubo.

4. Una vez solidificados, proteger de la humedad cubriéndolos con folias de aluminio

debidamente rotuladas:

a. Cajas petri de vidrio: colocar una sobre otra en grupos de 4-6 cajas.

b. Tubos de cultivo: en latas de metal cubiertas por folia de aluminio y rotuladas.

5. Almacenar en refrigeración.

- Distribución del Agar MacConkey: Se preparó un área estéril (Limpieza con alcohol de la

mesa, mechero o flujo laminar), luego se tomó las 4 cajas Petri y se colocó una encima de

otra, para mejor manipulación se colocó solo dos una encima de otra y lo mismo con el resto

de las cajas Petri, en estas se vertió hasta la mitad para lograr tener el medio de cultivo

requerido, exactamente teniendo en cada caja Petri una cantidad de 25ml a una temperatura de

45°C, antes de llevar a la refrigeración los etiquetamos con el grupo de trabajo, fecha.
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⮚ PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL

1. Tubos de ensayo: con su debido tapón de algodón y gasa en frascos, o con tapa

autoclavable, en una lata y cubiertos con folia de aluminio (rotular)

2. Pipetas: envolver con folia de aluminio (señalar la ubicación de la punta) ó usar tubos

esterilizadores para pipetas.

3. Cajas Petri de vidrio: envolver con papel kraff o folia de aluminio (puede usarse también

papel reciclado)

4. Cajas Petri desechables: envolver en folia de aluminio

5. Hisopos: poner en botella de vidrio con tapa

6. Bajalenguas: cubrir con folia de aluminio.

7. Frascos de medio de cultivo: sin cubrir, únicamente tapados, rotulados con marcador en las

paredes del frasco.

8. Agua destilada: en botella de vidrio con tapa.

Colocar en la autoclave (programar para que alcance 121ºC y mantener a esta temperatura

durante 15-20 minutos a 1,2 atmósferas de presión). Al término de este proceso el material se

encuentra listo para utilizar, no obstante, hay que tomar varias precauciones para evitar su

posterior contaminación.
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- Para evitar que haya microorganismo que alteren al medio de cultivo todo este proceso

debe hacerlo junto al mechero, en cada una de las cajas Petri se las coloca en orden

con su debida tapa sin tener mayor manipulación y no contaminar el área. Colocar en

la autoclave (todo esto a un alcance de 121°C de temperatura durante 15-20 min a 1,2

atmosferas de presión). A la finalización de este proceso el material se encuentra para

ser utilizado nuevamente, eso sí teniendo en cuenta las precauciones debidas para no

contaminar y para obtener el agar requerido.

6.- CUESTIONARIO

1. El fabricante de un medio de cultivo líquido, da como instructivo de preparación "disolver


74.6 g de medio EMB en 900 ml de agua destilada". ¿Cuánto se debe pesar del medio, si se
desea preparar 50 cajas Petri con 20 ml cada una?
50 cajas Petri * 20ml = 1000ml
Realización regla de tres:
74,6 g 900 ml
x 1000 ml
(74,6 * 1000) / 900
Total = 82,888 g
Respuesta: Se deberá pesar 82,888 g del medio para obtener 50 cajas Petri con 20 ml cada
una.
2. Para la realización de pruebas bioquímicas se requiere preparar 100 tubos cada uno con 6
ml de agar TSI. Conociendo que para un litro se requiere de 60 gramos de dicho medio
¿Cuánto se debe pesar del medio?
(Fajardo, 2013)Realización regla de tres:

60 g 1000 ml
X 600 ml
(60 * 600) / 1000
Total = 36 g
Respuesta: Se deberá pesar 36g del agar TSI.
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3. ¿Cuáles son los métodos de esterilización más utilizados en microbiología? ¿En qué tipo de
materiales se aplica cada uno?
TABLA 1
Métodos de Esterilización
FÍSICOS QUÍMICOS
Calor seco: Utilizado en la estufa. Óxidos de etileno: Utilizado en productos
termolábiles como plástico, equipamiento
electrónico, etc.
Calor Húmedo: Utilizado en autoclave. Plasma de peróxido de hidrógeno.
Radiaciones ionizantes: Gamma, beta y Pastillas de formol.
ultravioleta.
Filtración. Soluciones químicas:
Ebullición. Glutaraldehído
Flameo. Formal

NOTA: Clasificación de los métodos de esterilización y en donde se puede utilizar (Lopez,

2013)

4.- Completa la siguiente tabla. MINIMO 3 EJEMPLOS POR TIPO DE MEDIO


TABLA 2
Medios de Cultivo
TIPO DE MEDIO EJEMPLOS USO
SÓLIDO Agar-Agar, Agar Común, Se obtienen agregando agar
Agar SS, Agar Cerebro (sustancia de tipo
Corazón, Agar Saboureaud polisacárido que se obtiene
de algas marinas) a un
medio liquido determinado.
Al tener un medio sólido,
nos facilita obtener colonias
bacterianas aisladas.
SEMISOLIDO Agar MIO, Agar SIM, Agar Similares a los medios
de Hugh-Leiffson sólidos, la única diferencia
es que a estos se les
disminuye la cantidad de
agar, lo que permite
conservar cepas bacterianas
y la observación y registro
de bacterias móviles.
LÍQUIDO Agua peptonada, Caldo Contienen nutrientes a los
común, Caldo Cerebro cuales se les adicionan
Corazón, Caldo Saboureaud sustancias con la capacidad
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de mantener estables un pH

Nota: Tipos de medios de cultivo (EduLabC, 2019)

7.- RESULTADOS Y DISCUSIONES

Se pudo observar que hubo un pequeño error al momento de calcular los pesos en la balanza

se pudo deducir que talvez la balanza estuvo mal o talvez no se encero bien y que por esa

razón no salió bien el peso del agar y no salió como fue esperado el color, la textura dentro ya

de la caja Petri, entonces se volvió a repetir para saber cómo en realidad es el agar McConkey.

En lo que se observo en el error de la preparación fue su color que fue medio rosado pálido y

su textura era muy liquida para que se pueda solidificar.

8.- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

- Se pudo observar que cada medio de cultivo tiene su técnica de preparación y que es muy

importante saber la teoría ya que con ello nos podemos ayudar a manejarla mejor, cada

técnica tiene su proceso uno más demoroso que otro.

- La técnica más común que se diría es de echar alcohol por toda la zona que se va a trabajar,

pero sobre todo es mantener el trabajo que se está realizando cerca del mechero para que así

no se contamine el cultivo.
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- Una de las recomendaciones seria verificar siempre que la balanza este bien encerada para

tener buenos resultados, ya que si no hay la cantidad exacta o necesaria de agar para la mezcla

con el agua destilada pues esta no se podrá utilizar porque no servirá para nada.

- La asepsia asegura la ausencia de todas las bacterias y de todas las formas de resistencia a la

mismas, inhibiendo la participación bacteriana y su colonización. La desinfección es el

resultado de una correcta asepsia.

9.- EVIDENCIA DE TRABAJO

Imagen 1

NOTA: Materiales para realizar el medio de cultivo

Imagen 2
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NOTA: Preparación del medio de cultivo

Imagen 3

NOTA: Proceso del medio de cultivo

Imagen 4
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NOTA: Medio de cultivo realizado

10.- BIBLIOGRAFIA

Fajardo, M. (19 de Septiembre de 2013). Universidad virtual de salud. Recuperado el 21 de


Febrero de 2023, de Universidad virtual de salud: http://uvsfajardo.sld.cu/tema-7-
metodos-de-esterilizacion

CES. (27 de Febrero de 2019). Reglamento de Régimen Académico . RRA. Quito, Pichincha,
Ecuador.

EduLabC. (17 de Julio de 2019). EduLabC. Obtenido de https://edulabc.com.mx/medios-de-


cultivo/

Lopez, Z. (19 de Septiembre de 2013). Universidad Virtual de Salud . Obtenido de


http://uvsfajardo.sld.cu/tema-7-metodos-de-esterilizacion

Gil, M. (2019, 22 noviembre). Medios de cultivo: historia, función, tipos, preparación.

Lifeder. https://www.lifeder.com/medios-de-cultivo/

Mdmadmin, M. (2018, 1 febrero). ¿Para qué sirve un agar microbiología? Mdm Científica.

https://mdmcientifica.com/agar-microbiologia/
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(s. f.). METODOS DE ESTERILIZACION. Equipos y laboratorio de

Colombia. https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/metodos-de-

esterilizacion

Miguel, J. (2023, 19 enero). Métodos de estudio de los microorganismos: esterilización y

pasteurización. EspacioCiencia.com. https://espaciociencia.com/esterilizacion-y-

pasteurizacion/

Prácticas de Microbiología - 1. Preparación de Medios de Cultivo. (s. f.).

https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/preparacion-de-

medios-de-cultivo

Equipo editorial. (2022, 17 marzo). Preparación de medios de cultivo. Lifeder.

https://www.lifeder.com/preparacion-medios-cultivo/

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