Determinación de las fases de crecimiento en cultivos bacterianos

Daniela Araujo, Camilo Bernal, Yanyna Escorcia, Lenin Sánchez, Leobani Tafur
Estudiantes del Programa De Química, Facultad De Ciencias Básicas,
Universidad del Atlántico Km 7 Antigua vía de Puerto Colombia
dgaraujo@mail.uniatlantico.edu.co,cbernal@mail.uniatlantico.edu.co,ylescorcia@mail
uniatlantico.edu.co,leninasanchez@mail.unitlantico.edu.co,
ljtafur@mail.uniatlantico.edu.co

RESUMEN
El crecimiento celular es la característica única de todos los organismos vivos. El objetivo
de este experimento se basa en estudiar las diferentes fases del crecimiento microbiano
en los cultivos bacterianos: Staphylococcus aureus y Escherichia Coli, lo cual se requirió
de ciertos parámetros para su generación de energía y biosíntesis celular. Se inocularon
en un caldo estéril, posteriormente se incubaron en condiciones óptimas (pH, temperatura,
presión, cantidad de fosforo, carbono, nitrógeno y azufre), trayendo como resultado el
aumento de tamaño y masa celular en los microrganismos. Finalmente se logró realizar
las gráficas de tiempo que se necesita para la regeneración de bacterias en cada una de las
fases de interés: fase latencia y fase exponencial de ambas bacterias.

Palabras clave: Densidad óptica (DO), Crecimiento Bacteriano, Curva de

Crecimiento, Staphylococcus aureus, Escherichia Coli.

ABSTRACT

Cell growth is the unique characteristic of all living organisms. The objective of this
experiment is based on studying the different phases of microbial growth in bacterial
cultures: Staphylococcus aureus and Escherichia Coli, which require certain parameters
for their energy generation and cell biosynthesis. They were inoculated in a sterile broth,
then incubated under optimal conditions (pH, temperature, pressure, amount of
phosphorus, carbon, nitrogen and sulfur), resulting in an increase in cell size and mass of
the microorganisms. Finally, it was possible to make graphs of the time needed for the
regeneration of bacteria in each of the phases of interest: latency phase and exponential
phase of both bacteria.

Keywords: Optical Density (OD), Bacterial Growth, Growth Curve, Staphylococcus

aureus, Escherichia Coli.
INTRODUCCIÓN.
Las bacterias son organismos procariotas
unicelulares, que se encuentran en casi
todas las partes del planeta puesto que
son vitales para los ecosistemas que
existen [1]. Las bacterias pueden tener
distintas formas: esféricas, alargadas o
espirales [2]. Algunas especies pueden
vivir en condiciones realmente extremas
de temperatura y presión dependiendo de
su estructura, tiempo y desarrollo [3]. El
crecimiento microbiano se entiende
como el aumento del número de
población de microorganismos a medida
que pasa un determinado tiempo. La
mayoría de los microorganismos
procariotas crecen por fisión binaria, el
cual, consiste en la autoduplicación del
material hereditario seguido de la
repartición en las dos células hijas, las
que se separan por estrangulamiento de
la membrana celular y formación de la
pared celular (ver figura 1) [4].
Figura 1: Transformación por fisión binaria.
fuente: (binary fission | cell division, s. f.)
Para realizar el debido proceso de
cultivo de microorganismo en el
laboratorio es necesario suministrarle
aquellos nutrientes que harán efectivo su
crecimiento. Los diferentes organismos
necesitan nutrientes distintos y
cantidades atípicas. Existen dos tipos:
macronutrientes y micronutrientes. Estos
nutrientes están formados a partir de
elementos químicos como: hidrógeno,
oxígeno, carbono, nitrógeno, fósforo,
azufre y selenio, entre otros. Una vez
preparado un medio de cultivo y
esterilizarlo para eliminar cualquier
forma de vida en él, se pueden inocular
organismos e incubar el cultivo en
condiciones que propicien el crecimiento
[5] (ver figura 2).
Figura 2: Cultivos de Estafilococos áureas
(izquierda) y Escherichia Colí (derecha).
Fuente: (Fundación iO, 2020), (Infecciones
por Escherichia coli, s. f.)
La velocidad de crecimiento es el
incremento en el número de células o en
la masa celular por unidad de tiempo. La
velocidad específica de crecimiento es
característica para cada tipo de
microorganismo y medio de cultivo
(sustrato). El tiempo de generación es el
tiempo requerido para que, a partir de
una célula, se forman dos células, es
decir, es el tiempo que tarda una
población microbiana en duplicarse. Este
tiempo varía considerablemente con los
microorganismos y las condiciones
ambientales como la temperatura.[6] Las
curvas de crecimiento son distintas
según el tipo de microorganismo y según
variemos las condiciones del cultivo,
pero, a pesar de ello, todas ellas tienen en
común una serie de fases (ver figura 2).

Fase de lag o fase de latencia: En esta

fase no hay incremento en el número de
células, pero hay gran actividad
metabólica, aumento en el tamaño
individual de las células, en el contenido
proteico, ADN y peso seco de las células.
Fase logarítmica o exponencial: es la
fase en la cual los microorganismos se
multiplican con rapidez. Durante cada
intervalo de duplicación se producen Figura 3: fases del crecimiento microbiano
tantas nuevas células como se habían
Nota: Esta figura muestra todas las fases
producido anteriormente de manera
presentes en un cultivo microbiano
acumulada. La fase continúa mientras no
realizada el 31 de enero de 2008 por:
existan factores limitantes del
Gonn. (2008).
crecimiento. Fase estacionaria: la
población no puede crecer Este estudio explora las diferentes fases
indefinidamente en forma exponencial del crecimiento bacteriano trazando
en la cual no varía el número de curvas de crecimiento estándar para
microorganismos por el agotamiento Staphylococcus aureus y Escherichia
total de los nutrientes. Fase de muerte en Colí y posteriormente determinar el
la cual el número de microorganismos tiempo de generación de las bacterias.
comienza a disminuir progresivamente
en el número de células viables.[7]
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
RESULTADOS Y DISCUSIONES
El espectrofotómetro en el cual se
observó en la metodología, mide el
aumento de la masa celular del
organismo utilizado. Pero en este caso no
solo se basa en esa medición, podemos
medir la turbidez o densidad óptica. El
cultivo que se encuentra directamente
relacionado con el numero de
microorganismos lo llamamos turbidez
[8]. Es un mecanismo que permite medir
el crecimiento celular de un organismo.
Es decir que la turbidez del medio de
cultivo enseña el aumento de masa de las
bacterias.
- Gráficas sobre la curva de
crecimiento utilizando el
simulador AMRITA.
Figura 4. Curva de crecimiento bacteriano
dada mediante el simulador S.A
Figura 5. Curva de crecimiento dada por
mediante el simulador E. Coli.
En estas gráficas tomadas del simulador,
logramos observar dos fases (adaptación
y exponencial), el cual se analizó en cada
intervalo el crecimiento que pudo
presentar nuestro objeto de estudio.
debido a que es un cultivo de crecimiento
continuo, es decir, el medio se mantiene
en constante cuidado de nutrientes y
enzimas inhibidoras. La primera fase se
puede observar hasta la línea roja, donde
esta fase las bacterias se adaptan al
medio. Esta fase llamada fase de latencia
se caracteriza por la actividad celular
pero no por el crecimiento, donde
pequeño grupo de células se coloca en un
medio rico en nutrientes que les permite
sintetizar proteínas y otras moléculas
necesarias para la replicación [9]. Por
tanto, las células aumentan de tamaño,
pero no se produce división celular en la
fase, es decir, no aumenta la masa
celular.
Posteriormente ocurre el aumento
exponencial donde se puede observar
que hay duplicación de biomasa en el
medio durante intervalos regulares
durante un tiempo determinado. Este es
el momento en que las células se dividen
por fisión binaria y se duplican en
número después de cada generación. La
actividad metabólica es alta ya que el
ADN, el ARN, los componentes de la
pared celular y otras sustancias
necesarias para el crecimiento se generan
para la división [10]. Es en esta fase que
los antibióticos y desinfectantes son más
Figura 6. Datos presentados que reflejan
efectivos según estudios, ya que estas parte del ciclo de crecimiento planteadas en
sustancias generalmente atacan las Excel.
paredes celulares de las bacterias o los
procesos de síntesis de proteínas a través
de la transcripción del ADN y la Tabla 2. Datos de tiempo vs número de
traducción del ARN. células para la E. coli.

- Se obtuvieron los siguientes

Tiempo en Numero de
datos para el microorganismo minutos Celulas
Staphylococcus Aureus y E.
coli: 0 4.00E+03
20 1.00E+04
Tabla 1. Datos de tiempo vs número de
células para el Staphylococcus Aureus. 40 2.00E+04
60 4.00E+04
Tiempo en Numero de 80 8.00E+04
minutos Células
100 1.60E+05
0 5.0E+04
30 1.0E+05 120 3.20E+05
60 2.0E+05 140 6.40E+05
90 4.0E+05 160 1.28E+06
120 8.0E+05
150 1.6E+06
180 3.2E+06
210 6.4E+06
240 1.3E+07
 caso de la bacteria Staphylococcus
aureus es de 30 minutos y su velocidad
de crecimiento es mucho más rápido, se
puede relacionar con su capacidad de
absorbancia. Por otra parte, el tiempo de
regeneración de E. coli es de 20 minutos.

Figura 7. Datos presentados que reflejan
parte del ciclo de crecimiento planteadas en
Excel.
CONCLUSIONES
Se logró verificar que el crecimiento celular
en las bacterias es exponencial debido a que
cumple la función 𝑁 = 𝑁0 2𝑛 .
El Staphylococcus aureus presentó un mayor
desarrollo a lo largo del tiempo por lo cual
se concluyó que tiene una mayor capacidad
de sobrevivencia que la Escherichia coli.

En el medio se mantiene en constante

vivo siempre y cuando este en constante
cuidado de sus nutrientes y enzimas las
cuales permitan su crecimiento continuo.

Figura 8. Comparación de las bacterias

estudiadas.

Durante el incremento exponencial, el

número de células inicialmente es
bastante lento (figura 6 y 7), pero
aumenta a una velocidad cada vez mayor
obedeciendo a la función de crecimiento
celular, que está dada por la expresión
𝑁 = 𝑁0 2𝑛 : donde N es el número de
células finales, 𝑁0 es el número de
células iniciales, y n es el número de
generaciones durante el período
evolución [11].
Observando la figura 8 podemos
comparar el tiempo que tardan las
bacterias en duplicar su número durante
un intervalo de tiempo específico se
conoce como tiempo de generación, en el
Bibliografía
[1] Liliana Caycedo Lozano, Lucía
Constanza Corrales Ramírez, Diana
Marcela Trujillo Suárez. (2020, 30 junio). Bacteria, nutrition and growth: a look from
chemistry. Scielo. Recuperado 12 de diciembre de 2020, de
http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v19n36/1794-2470-nova-19-36-49.pdf
[2] Bacteria | NHGRI. (s. f.). Genome.gov. Recuperado 2 de octubre de 2022, de
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Bacteria
[3] CRECIMIENTO MICROBIANO. (2020, 24 diciembre). Hacia una nueva

Biología. Recuperado 2 de octubre de 2022, de

https://esalvucci.wordpress.com/crecimiento-microbiano/
[4] binary fission | cell division. (s. f.). Encyclopedia Britannica. Recuperado 2 de
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[5] Brock . Biología de los Microorganismos. 12a (2009) o 10a (2004) Ed. Prentice Hall-
Pearson Education.
[6] Crecimiento bacteriano. Modelos predictivos de ComBase. (s. f.). Recuperado 2 de
octubre de 2022, de
http://coli.usal.es/web/demos/demo_alteracion/FactoresCrecimiento/FactoresCrecimie
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[7] Pappas, S. & Vidyasagar, A. (2021, 14 octubre). What are bacteria? livescience.com.
Recuperado 2 de octubre de 2022, de https://www.livescience.com/51641-bacteria.html
[8] Kenneth Todar, M. (no date) The Bacterial Growth Curve, Growth of bacterial
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October 7, 2022).
[9] Bailey, Regina. "Fases de la curva de crecimiento bacteriano". ThoughtCo, 17 de
febrero
de 2021, Thoughtco.com/bacterial-growth-curve-phases-417 2692.
[10] Kenneth Todar, M. The Bacterial Growth Curve, Growth of bacterial populations.
Available at: http://textbookofbacteriology.net/growth_3.html (Accessed: October 7,
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[11] Brock. Biología de los Microorganismos. 12a (2009) o 10a (2004) Ed. Prentice