Giselle Alejandra Ramírez Saavedra

Análisis cuantitativo de Proteínas

Reactivos a utilizar
Reactivo para Biuret (100 mL por equipo), Disolución de Cloruro de Sodio 0.15 M (100 mL),
Disolución Patrón de Albúmina de Suero Bovino de 10.00 mg/mL
A. Determinación Cuantitativa de Proteína con Biuret
Curva de calibración de Biuret
Identificar cada tubo de ensayo por contenido de proteína en mg/mL (0, 2, 4, 6, 8, 10).
Agregar a cada tubo los µL de disolución patrón de 10,00 g/mL de proteína (0, 200, 400,
600, 800, 1000).

Agregar a c/tubo los siguientes µL de

cloruro de sodio 0.15M y mezclar en
Vortex (1000, 800, 600, 400, 200, 0).

Agregar a cada tubo 4.00 mL de

Biuret y mezcle bien en el Vortex.
Dejar en reposo 20 min.

Para las curvas de calibración de proteínas totales, absorbancia se lee a 550 nm. Usar tubo
“0” y apuntar su absorbancia de proteína: 0 Repetir con cada tubo y el duplicado.

Realizar gráfico
absorbancia
vs.concentración.
Determinacar
ecuación de recta y
coeficiente de
correlación lineal
(R2)
 B. Muestras de proteínas entregadas por el profesor
Análisis de las dos muestras extraídas
Preparar dos muestras (1g) de la proteína dada por el docente: P1 y P2. Colocar en balón
aforado de 25.0 mL (uno por muestra) y preparar dilución 1:10 (D1), 1:100 (D2) y 1:1000 (D3)
para cada muestra.

Usar ocho tubos de ensayo:

P1, P1 (D1), P1 (D2) y P1
(D3); así como P2, P2 (D1),
P2 (D2) y P2 (D3). Adicionar
un tubo extra como “blanco”
con 1.00 mL de NaCl 0.15 M.
Dispensar 1.00 mL de
dilución correspondiente en
c/tubo excepto en el blanco.

Tratamiento

Agregar a c/tubo 4.00 mL de Reactivo para Biuret. Mezclar en vortex. Reposo 20 min.

La asbosarbancia se lee a 550 nm.

Calcular concentración de c/extracto y diluciones con curva de calibración.