Práctica 1

Curvas Estándar y Concentración

Una curva estándar o curva patrón es una curva de referencia construida por
cantidades conocidas de una determinada sustancia y se utiliza para determinar la
cantidad de esa misma sustancia presente en una alícuota. Tiene dos aplicaciones:

 Conocer la confiabilidad de nuestras mediciones

 Utilizarla como referencia para interpolar valores de nuevas determinaciones

Objetivos:

 Aprender a realizar y utilizar curvas estándar para determinar concentraciones

específicas de soluciones desconocidas
 Conocer y utilizar las diferentes formas de calcular concentraciones

Materiales:

 Micropipeta de 100 µl
 Micropipeta de 1 ml o jeringa de insulina
 Espectrofotómetro y celdas de 1ml
 Piseta con etanol
 12 Tubos de 1.5 ml
 Gradilla
 Vortex

Nota: Cada equipo deberá llevar su jeringa de insulina.

Reactivos (por grupo):

 500 µl de solución de albúmina sérica bovina 0.2 mg/ml

 500 µl de solución A (proteína de concentración desconocida)
 1 ml de solución B (proteína de concentración desconocida)
 70 ml de Reactivo Bradford (guardar en frasco ámbar).

Método:

Curva de Proteína por el método de Bradford

 Preparar los siguientes tubos. Para la curva estándar (tubos 1 al 7) se utiliza una
solución de 0.2 mg / ml de albúmina sérica bovina (BSA). Para los tubos problema
(8 al 11) se utilizan las soluciones de concentración desconocida (A y B).
 Tubo µl de BSA µl de H2O A595
1 0 100
2 12.5 87.5
3 25 75
4 37.5 62.5
5 50 50
6 62.5 37.5
7 75 25

Tubo µl de Sol. Problema µl de H2O A595

8 Problema A 50 50
9 Problema A 25 75
10 Problema B 80 20
11 Problema B 60 40

 Mezclar bien todos los tubos

 Adicionar a cada tubo 1ml de reactivo Bradford y mezclar inmediatamente
 Esperar al menos 5 minutos pero menos de 1 hora
 Leer la A595 y anotar los datos

 Para lavar las celdas y los tubos, eliminar los residuos de reactivo Bradford con
etanol al 96%.

Análisis de datos:

 Calcular los µg de (BSA) albúmina adicionados en cada tubo de la curva estándar.

 Graficar la curva estándar (µg de proteína en el eje X y A540 en el Y) y obtener la
ecuación de la recta.
 Calcular la cantidad de proteína en las muestras problema (tubos 7, 8, 9 y 10).
 Calcular la concentración de proteína en las soluciones problema (A y B).
 Completar la siguiente tabla

Tubo ml sol A ml sol B mg Proteína mg Proteína/ml

7
8
9
10
 ¿Cuál es la concentración de proteína en la solución A y en la B?

**Nota: el reporte debe incluir todos los cálculos, tanto del análisis de resultados como
del cuestionario.

Cuestionario:

1. Definir los siguientes conceptos: Concentración, mol, molaridad, porcentaje (como

forma de medir concentración), número de Avogadro
2. ¿Cuál es la diferencia entre un mol y uno molar?
3. ¿Qué significa que una solución esté a una concentración 2M? ¿y 2% w/v?
4. Completar la siguiente tabla con las equivalencias correspondientes:

M mM μM nM pM
1M = 1
1mM = 1
1μM = 1
1nM = 1
1pM = 1

5. ¿Para qué sirve una curva estándar?

6. ¿Cuánto debes poner de soluto y de disolvente para preparar 50ml de cada una de
las siguientes diluciones?
a. 1:2
b. 1:5
c. 2:5
7. Si tienes una solución de glucosa 1M y la diluyes1:2
a. ¿A qué molaridad queda?
b. Si diluyes 1:3 la dilución anterior ¿A qué dilución final queda?
c. ¿Qué molaridad tiene esta última solución?
d. ¿Cuál es la concentración final en %?
8. ¿Cuántos gramos debes pesar para preparar 250ml de (NH4)SO4 (sulfato de
amonio) 2M? ¿A cuánto equivale en %?
9. ¿Cuánto debes medir para preparar 50ml de HCl 0.4%? ¿A qué molaridad queda?
10. Calcule la molaridad de una solución que contiene 26g de fructosa (C6H12O6)
diluidos en 300ml de H2O ¿y a qué porcentaje queda?
11. En agua el NaCl se disocia y forma iones Na+ y Cl-. Si preparas 50 ml de solución de
NaCl 0.5M, suponiendo que todo el NaCl quedó disociado, ¿A qué molaridad
quedan los iones Na+? ¿y los Cl-?