PRÁCTICA N° 9.

DETERMINACIÓN DE UREA Y CREATININA SÉRICA

I. OBJETIVOS

- Evaluar la concentración sérica de urea por el método de la ureasa.

- Evaluar la concentración sérica de creatinina por el método de la reacción de Jaffé.

II. MATERIALES

Tubos de ensayo, pipetas milimétricas, gradillas,

Guantes, alcohol, algodón, agujas N° 20, jeringas x 5cc.( POR MESA Y ALUMNO)

Centrífuga, micropipetas x 10 ul 1 POR LABORATORIO, baño maría, espectrofotómetro.

Kit para Úrea Wiener Lab.

Sol. Estándar: solución de urea = 0.60 g/l (28.04 mg/dl de BUN).

Reactivo A: Solución conteniendo buffer fosfatos 200 mmol/l, ácido salicílico 750 mmmol/l.
nitroprusiato de sodio 20 mmol/l y EDTA 10 mmol/l.

Reactivo B: solución concentrada de hipoclorito de sodio 10 mmol/l en hidróxido de sodio 0.1

mol/l

Reactivo C: ureasa ≥ 75 U/ml en solución glicerada.

Kit para Creatinina Wiener Lab.

Sol. Estándar: solución de creatinina = 20 mg/l.

Reactivo A: Ácido pícrico 41.4 mmol/l.

Reactivo B: Buffer glicina/NaOH 1mol/l.

III. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Determinación de Urea sérica.

La secuencia de reacciones que se emplean en esta determinación es la siguiente:

Ureasa
Urea CO2 + NH3;
pH
NH3 + Salicilato + Hipoclorito Indofenol (verde)
Alcalino
 1) Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de
sangre de la flexura del codo con jeringa hipodérmica de 5 cc y aguja N° 20, de un
paciente en ayunas.

2) Una vez obtenida la muestra, colocarla en un tubo de ensayo y dejarlas reposar

durante 10 minutos.

3) Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a

3000 RPM durante 10 minutos.

4) Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.

5) Para la determinación de úrea: En 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S

(estándar) y D (Desconocido), se debe colocar:

COMPONENTES TUBOS DE ENSAYO

B S D

Muestra (suero / ul) -- -- 10

Estándar (ul) -- 10 --

Reactivo A + C (ml) 1.0 1.0 1.0

Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 10 minutos a temperatura ambiente

(18 a 25 °C). Luego agregar:

Reactivo B (ml) 1.0 1.0 1.0

Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 10 minutos a temperatura ambiente

(18 a 25 °C). Leer en espectrofotómetro a 570 nm. dentro del plazo de una hora.

6) Cálculos de resultados:

Cálculo del factor:

𝟎. 𝟔𝟎 𝒈/𝒍
𝑭=
𝑺
Cálculo de la concentración de Urea.

Urea (g/l) = D x F

7) Interpretación de los resultados.

Valores Referenciales: 0.10 – 0.50 g/l

Determinación de Creatinina sérica.

La creatinina en medio alcalino reacciona con el ácido pícrico produciendo un cromógeno de

picrato de creatinina de color rojo (Reacción de Jaffé). La determinación se realiza en un
filtrado de proteínas obtenido a partir del suero (desproteinizado).
 1) Para la determinación de creatinina: En 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S
(estándar) y D (Desconocido), se debe realizar lo siguiente:

Desproteinización del suero: Colocar en un tubo 0.4 ml de suero y agregar 2 ml

de Reactivo A. Mezclar por inversión. Dejar en reposo durante 10 minutos y
luego centrifugar a 3000 rpm por cinco minutos. Transcurrido el tiempo armar
el siguiente sistema:

COMPONENTES TUBOS DE ENSAYO

B S D

Desproteinizado (ml) -- -- 1.5

Estándar (ml) -- 0.25 --

Agua Destilada (ml) 0.5 0.25 --

Reactivo A (ml) 1.0 1.0 --

Reactivo B (ml) 0.25 0.25 0.25

Mezclar por inversión. Incubar 20 minutos a temperatura ambiente. Luego leer

en espectrofotómetro a 510 nm, llevando a cero el aparato con agua destilada.

2) Cálculos de resultados: Corregir las lecturas S y D restándoles el blanco (B).

Cálculo del factor:

𝟐𝟎 𝒎𝒈/𝒍
𝑭=
𝑺
Cálculo de la concentración de Creatinina.

Creatinina (mg/l) = D x F

3) Interpretación de los resultados.

Valores Referenciales:

● Suero = 8 a 14 mg/l

IV. CONCLUSIONES

El estudiante debe plantear las conclusiones, en base al análisis de los resultados obtenidos en
el desarrollo de la práctica de laboratorio.

La conclusión es una afirmación en respuesta a los objetivos.