Preparación de Soluciones en

Técnicas Instrumentales

Rectas de Calibrado

Dr. Alfredo Cruz Monzón

Determinar los gramos de reactivo a tomar para preparar :

1. 500 mL de Solución de 1000 ppm Pb a partir de Pb(NO3)2 que

es 98,8 % pureza.

2. 200 mL de una solución de 620 ppm Cu a partir de Cu

electrolítico de pureza 99,98 %.

3. 1000 mL de una solución de 500 ppm Zn, a partir de ZnSO4 de

pureza 99,3%.

4. 800 mL de una solución de 250 ppm Ag, a partir de AgNO3 de

pureza 99,5 %
Recalculo de las concentraciones reales:

1. Si se pesaron 0,8094 g de Pb(NO3)2 de pureza 98,8% y

se le disolvió con HNO3 al 1% hasta 500 mL.

2. Si se pesaron 0,1258 g de Cu metal de pureza 99,98%

y se le disolvió con HNO3 al 1% hasta 200 mL.

3. Si se pesaron 1,4598 g de Zn(NO3)2 de pureza 99,3%

y se le disolvió con HNO3 al 1% hasta 500 mL.

4. Si se pesaron 0,3288 g de AgNO3 de pureza 99,5% y

se le disolvió con HNO3 al 1% hasta 500 mL.
 METODOS DE CALIBRADO
En muchos análisis químicos se mide la respuesta(señal), de
un instrumento cuando se le someten a él cantidades
conocidas de analito (patrones o estándares), para luego
interpretar la respuesta de una muestra que contiene
cantidades desconocidas de analito.

Es común entonces la construcción de curvas de calibrado:

grafico que representa la respuesta de un método analítico
(absorbancia, área, emisión, etc), en función de cantidades
conocidas de analito.
Disoluciones Patrón: Contiene una cantidad perfectamente conocida de
un analito particular .(casa comercial reconocida, por ejemplo Merck,
Omega, etc).

Disoluciones Standard: Contiene una cantidad conocida de analito por

preparación directa en un laboratorio de ensayos químicos.

Las disoluciones patrón sirven para evaluar (a través de un

instrumento adecuado y calibrado), la veracidad, precisión y
exactitud con que se han preparado las disoluciones
estándar.

Disolución Blanco: Contienen todos los reactivos y disolventes usados,

pero sin muestra. Miden la respuesta del instrumento a las impurezas o
especies interferentes de los reactivos.
 CONSTRUCCION DE LAS RECTAS DE CALIBRADO
1. Preparar estándares que cubran el intervalo adecuado de la Ley Beer .
2. Calibrar con el blanco, para corregir la señal debida a la presencia de
algún contaminante.
3. Graficar las respuestas del instrumento frente a la concentración del
analito determinado.
4. Determinar la mejor recta que ajusta dichos datos (incluyendo el
blanco), que se encuentran comprendidos en la zona lineal.
5. Determinar la pendiente y ordenada en el origen con sus respectivas
incertidumbres (en trabajos detallados cada estándar de lee mínimo 5
veces).
6. Obtener la ecuación de regresión lineal que ajusta dichos datos, la cual
tiene la forma:

Respuesta Método Analítico = A + B X

Y = A + BX
Intervalo lineal de un Método Analítico: Zona de la recta donde la
respuesta del instrumento es proporcional a su concentración.

El intervalo dinámico : Zona de la recta donde hay una respuesta

del instrumento (debido al analito), aun cuando no sea lineal.

La construcción de la recta de calibrado requiere leer una serie de

replicas para cada estándar para asegurar la validez de la misma.

La precisión entre las replicas de un mismo estándar se evalúa

verificando que su % C. V. no sobrepase el 1%.

No es fiable extrapolar la recta de calibrado para señales analiticas

que están fuera de ella, porque existe posibilidad de desviaciones
tanto positivas como negativas de la ley de Beer.
Se debe medir solamente en el intervalo lineal!!!
En caso de estar fuera de la linealidad, realizar diluciones.
 METODO DE CURVA DE ESTANDARES EXTERNOS
Ejemplo: Para cuantificar los nitritos (NO2-), de un residuo sólido, se usaron
fiolas de 50 mL para preparar las s sgtes disoluciones estándar:

Estándar ppm NO2- Absorbancia

1 0,00 0,000
2 0,20 0,022
3 0,40 0,043
4 0,60 0,067
5 0,80 0,088
6 1,00 0,111

Si se toman 5,1244 g de una muestra solida y se extrae los nitritos hacia una
fiola de 100 mL y de allí se colocan 5 mL de muestra y se le trabaja
exactamente como los estándares (aforando finalmente a la marca con agua
destilada), entonces se obtiene una absorbancia de 0,024. Determinar las
ppm en la muestra solida analizada
 Determinacion de Nitritos por Espectrofotometria Molecular
0.12

0.1 y = 0.111x - 0.0003

R² = 0.9998
0.08
Absorbancia

0.06

0.04

0.02

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

-0.02
Concentración Nitritos (ppm NO2-)
 METODO DE ADICION DE ESTANDARD
Especialmente útil en análisis de muestras complejas, en donde es
considerable el efecto de la matriz.
Se puede aplicar de diferentes formas, siendo la mas habitual, la sgte:
1. Depositar en una serie de fiolas una mismo volumen de muestra “Vx”
2. Añadir volúmenes crecientes de una disolución estándar (de
concentración “Cs”), a cada una de las fiolas.
3. Aforar a la marca con los reactivos y disolvente (“Vt”).
4. Leer en el instrumento correspondiente la señal analítica “S”.
5. Es posible también hacer adiciones sucesivas de la disolución estándar a
un mismo volumen fijo de muestra, con lo cual las medidas se van
haciendo en la muestra original y después de cada adición de estándar
sobre la muestra.
Resumiendo:
Vx = volumen de muestra (alicuota), tomada.
CX = concentración del analito en la muestra problema
Vs = voluemn de estandar añadido.
Cs = concentración del analito en la solucion estándar.
S = señal analitica del instrumento

Si la respuestadel instrumento es lineal, entonces:

S α Vs Cs + Vx Cx S = K ( Vs Cs + Vx Cx)
Vt Vt

S = K Vs Cs + K Vx Cx S = K VX CX + (K CS) Vs
Vt Vt Vt Vt
Al comparar con la ecuacion: Y = A + BX

B = KCs/Vt A = KVx Cx / Vt
En donde los valores de “A” y “B”, se pueden determinar de la acuación de
ña recta ajustada por los mínimos cuadrados. El valor de Cx
(concentración del analito en la muestra), se puede obtener simplemente
relacionando:

A = ( K Vx Cx )/Vt = Vx Cx
B (K Cs ) / Vt Cs
De donde:
Cx = A * Cs
B * Vx

Ejemplo:
En 05 fiolas de 50 mL se depositan exactamente 10 mL de una muestra
de agua mineral, y se les adicionan secuencialmente 0 ; 5 ; 10 ; 15 y 20
mL de una disolución patrón que contiene 0,50 ppm Fe3+.
Si se les reduce a cada una de ellas para finalmente hacer reaccionar el
Fe2+ con fenantrolina, entonces se desarrolla el color rojo característico. Si
el fotómetro reporta los sgtes valores
 Estándar Vs (mL S. Patron) Absorbancia
1 0,00 0,240
2 5,00 0,437
3 10,00 0,621
4 15,00 0,809
5 20,00 1,009

Calcular las ppm Fe total presente en la muestra analizada.

Determinacion de Fe por Espectrofotometria -
Adicion de Estándar
1.2
y = 0.0382x + 0.2412
1
R² = 0.9998
0.8
Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0
-10 -5 0 5 10 15 20 25
-0.2
Volumen de estandar añadido (mL)
Es posible también, (por cuestiones de ahorro de tiempo y volumen de
muestra) , el uso de sólo 02 fiolas, para lo cual se hará solamente una
única adición de estándar (Vs) a una de las 02 muestras, con lo cual:

S1 = señal analítica de la muestra diluida.

S2 = señal analítica de la muestra y el estándar añadido.

Donde:
S1 = K Vx Cx / Vt S2 = K (Vx Cx + Vs Cs ) / Vt

Dividiendo y despejando Cx (concentración desconocida), nos queda:

Cx = __S1 Cs Vs___
( S2 – S1) Vx
Ejemplo:
Se tienen 02 fiolas de 50 mL en los cuales se depositan
exactamente 25 mL de una muestra de agua residual filtrada y
clarificada. Se adiciona a una de ellas 2 mL de una disolución
patrón de 2,50 ppm Cu.
Se aforan ambas fiolas hasta la marca con una solución de HNO3
al 1%, y se lleva a lectura en un equipo de Absorción Atómica (AAS),
con lo cual se obtienen absorbancias de 0,80 y 1,40
respectivamente.
Determinar las ppm Cu, presente en la muestra problema.
 METODO DEL PATRON INTERNO
Un patrón interno es una cantidad conocida de un compuesto (diferente al
analito de interés), que se añade a las muestras (o estándares), problema.
Muy útil cuando:
- La cantidad de muestra analizada (o la respuesta del instrumento), varía algo
cada vez que se utilizan por razones difíciles de controlar.
- Cuando suceden perdidas de muestra durante los pasos de preparación
previo al análisis.
Consiste en añadir una cantidad medida de patrón interno a la muestra
problema, para posteriormente y medir la relación (patrón interno/analito),
Verificando su constancia de variación, por cuanto se pierde la misma
fracción de ambos en cualquier operación.
Para usar un patrón interno se prepara primero la mezcla
conocida tanto del patrón interno como del analito, y luego se
mide la respuesta relativa del detector a las 2 especies.

La señal de respuesta a graficar en el eje “Y”, no es la del analito,

sino el cociente (señal analito/señal patrón interno), mientras que
en el eje “X” se ubican siempre las concentraciones del analito en
los estándares:
Ejemplo:
Se tienen 05 estándares cuyas concentraciones en Sodio son: 0,10 ;
0,50 ; 1,00 ; 5,00 ; 10 ppm Na; a la vez que son de 1000 ppm Li.
(Fiolas de 100 mL)
Al leer en un equipo de AES (emisión atómica), se obtuvieron los sgtes
datos experimentales:

Estándar ppm Na+ Emision Na+ Emision Li

1 0,10 0,11 86,00
2 0,50 0,52 80,00
3 1,00 1,80 128,00
4 5,00 5,90 91,00
5 10,00 9,50 73,00

Muestra 4,4 95
Si en una fiola idéntica se colocan 20 mL de muestra y una cantidad de Li
suficiente para que al aforar a la marca tenga también 1000 ppm Li.
Al leerla se obtiene una intensidad de emisión de 4,4 para el sodio y una
intensidad de 95 para el Litio. Calcular las ppm Na en la muestra
problema.

Estándar ppm Na+ Emision Na+ Emision Li (Emis Na+/Emis Li)

1 0,10 0,11 86,00 0,00128
2 0,50 0,52 80,00 0,0065
3 1,00 1,80 128,00 0,01406
4 5,00 5,90 91,00 0,06484
5 10,00 9,50 73,00 0,13014

Muestra 4,4 95 0,04632

 Determinacion de Sodio por Emision Atomica - Patron Interno
0.14

0.12 y = 0,013x + 0,0003

R² = 0,9999
(Emision Na+/Emision Li)

0.1

0.08

0.06

0.04

0.02

0
0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00
Concentración Sodio (ppm Na+)