ESTUDIOS

CITOGENÉTICOS
❖ Cariotipo con Bandeo G
❖ Cariotipo de Alta Resolución
❖ FISH (Hibridación in situ fluorescente)
¿ Qué es la Citogenética?

La Citogenética es la rama de la
Genética que estudia los cromosomas.
El estudio cromosómico permite detectar
anomalías:

- Numéricas: ganancia y/o pérdida de uno o

varios cromosomas.
- Estructurales: deleciones, duplicaciones,
inversiones, translocaciones, y otras de uno o
varios cromosomas .
Los estudios Enfermedades genéticas
citogenéticos - Retardo mental
brindan - Retraso en el crecimiento
información - Malformaciones
- Abortos espontáneos
- Infertilidad

Procesos oncohematológicos
El análisis cromosómico puede realizarse con técnicas de:

1. Citogenética convencional:

- Cariotipo de resolución estándar ( Bandeo G): Detecta

alteraciones estructurales > 6 - 8 Mb. 450 -500 bandas
- Cariotipo de alta resolución (AR): Detecta alteraciones
estructurales > 4 - 5 Mb. 800 - 1000 bandas

2. Citogenética molecular:

- Hibridación in situ fluorescente (FISH): Detecta alteraciones

estructurales > 20 Kb.
- Hibridación in situ fluorescente multicolor (M-FISH o SKY).
- Hibridación genómica comparada (CGH).
 CARIOTIPO CON BANDEO G

Cariotipo

Diversas técnicas Diferentes

de Bandeo tejidos

Bandeo G Linfocitos

De elección
 La estructura y morfología de los cromosomas

eucarióticos se visualiza y define cuando la cromatina

presenta máximo grado de compactación y el ADN se

encuentra duplicado formando 2 cromátides, ésto

ocurre en la Metafase o Prometafase de la división

mitótica.
Mitosis
Método Cariotipo
1- Toma de la muestra con heparina.
2- Cultivo de la muestra con productos mitógenos.
3- Se incuba por 72 – 96 hs en estufa a 37º C.
4- Se agrega colchicina para detener la mitosis en
metafase.
5- Se coloca todo en un tubo de centrífuga.
6- Se centrifuga y se elimina el sobrenadante.
8- Se agrega solución hipotónica.
9- Se centrifuga y se elimina el sobrenadante.
10- Se añade un fijador que rompe las membranas
citoplasmáticas y fija los cromosoma.
11- Se colocan las células sobre portaobjetos.
12- Se tiñe y se examinan al microscopio.
13- Se toman imágenes de los núcleos de mejor calidad.
➢ Se observan y se cuentan entre 15 y 20 células en metafase, con un
análisis completo de al menos 5 de ellas.

➢ Durante un análisis completo, cada cromosoma se compara

críticamente banda por banda con su homólogo.

➢ Es necesario examinar tantas células para poder detectar un

mosaicismo.

➢ Tras el análisis al microscopio, se toman imágenes de aquellas células

en metafase que tengan mejor calidad, bien mediante fotografía o
por digitalización de imagen computarizada.

➢ Los cromosomas pueden entonces disponerse en pares de acuerdo

con su tamaño y su patrón de bandas, constituyendo así un cariotipo.
El estudio de los cariotipos es posible debido a la tinción.

Tinción

Bandas alternantes de mayor y menor tinción

formando un patrón estable

y característico de cada cromosoma

facilitando la identificación de los mismos.

 El patrón de bandeo varía

según el estado de

elongación de los cromosomas.

 Cromosomas más acortados

propios de la metafase

se observan aproximadamente 400 bandas.

CARIOTIPO DE RESOLUCIÓN ESTÁNDAR

“ CARIOTIPO CON BANDEO G “

 Cromosomas más elongados

propios de la prometafase

se observan aproximadamente 800 - 1000 bandas.

CARIOTIPO DE ALTA RESOLUCIÓN

Cariotipo de rutina 46, XY Cariotipo de alta resolución 46, XY
CARIOTIPO DE ALTA RESOLUCIÓN

★ Se observan células en prometafase.

★ Se utiliza metotrexato junto a la colchicina para detener la

mitosis en prometafase.

★ Permite detectar anomalías, que con las bandas convencionales no

suelen apreciarse.

★ Significó un considerable progreso para la detección de

alteraciones estructurales de tamaños más pequeños.
★ Es importante aclarar que alteraciones muy pequeñas pueden no
ser detectadas.

★ Además, toda alteración detectada en el cariotipo debe ser

confirmada por FISH (utilizando sondas específicas para esa
región) u otra técnica de citogenética molecular.

★ Organismos Internacionales como la ACMG (American College of

Medical Genetics and Genomics), ECA ( European Cytogeneticists
Association), CAP (College of American Pathologists) entre otros,
recomiendan que el Cariotipo de Alta Resolución se debe reservar
para cuando un síndrome en particular o un rearreglo específico
es considerado, para el cual se requiere una resolución de bandas
superior a 550 bandas.
Indicaciones para realizar un cariotipo:

Periodo prenatal

- Oligoamnios - polihidramnios.
- Retraso de crecimiento intrauterino (CIR).
- Arteria umbilical única.
- Sospecha ecográfica de cromosomopatía.
- Antecedentes de cromosomopatía balanceada
en un progenitor.
Indicaciones para realizar un cariotipo:

Periodo neonatal
- Malformaciones mayores aisladas.
- Presencia de 3 o más defectos congénitos
menores.
- Recién nacido con rasgos dismórficos.
- Recién nacido con genitales ambiguos.
- Parto con producto muerto de causa
inexplicable.
- Muerte neonatal de causa inexplicada.
Indicaciones para realizar un cariotipo:

Periodo de lactancia

- Trastornos del crecimiento.

- Niños con rasgos dismórficos.
- Niños con retraso psicomotor.
Indicaciones para realizar un cariotipo:

Periodo preescolar-escolar

- Niños con dificultades para el aprendizaje.

-Trastornos del crecimiento.
- Retraso psicomotor.
- Rasgos dismórficos.
Indicaciones para realizar un cariotipo:

Periodo de adolescencia

- Ginecomastia.
- Falta de desarrollo puberal.
- Amenorrea primaria o secundaria.
- Retraso mental.
- Rasgos dismórficos.
Indicaciones para realizar un cariotipo:

Periodo del adulto

- Infertilidad inexplicable.
- Diagnóstico prenatal (líquido amniótico y
biopsia de corion).
- Padres de niños con anomalías cromosómicas
estructurales.
- Abortos a repetición.
Indicaciones para realizar un cariotipo:

En todas las edades

- Procesos malignos.
- Control de transplantes de médula ósea.
HIBRIDACIÓN FLUORESCENTE IN SITU
(FISH)
Es una técnica que permite detectar y localizar una secuencia
específica de ADN en un cromosoma.

Se basa en exponer los cromosomas a una pequeña

secuencia de ADN llamada sonda que tiene una molécula
fluorescente pegada a ella. La secuencia de la sonda se une a
su secuencia correspondiente en el cromosoma.
Técnica Fish
1- Desnaturalización del ADN para separar
la doble hélice.

2-Se le añade la sonda de interés

(fragmento de ADN marcado fluorescentemente).

3- Las sondas hibridan a las regiones específicas.

4- Se tiñen los núcleos con un color de contraste.

5- Se visualiza la muestra preparada bajo

un microscopio de fluorescencia.
★ Su principal ventaja es que puede aplicarse tanto sobre células en
metafase como en interfase, células que no se dividen y facilita
su análisis sobre un mayor número de células.

★ Es una técnica más sensible y específica.

★ Es una herramienta clave para confirmar el resultado de un

cariotipo o muchas veces definir un diagnóstico.

★ No proporciona análisis de todo el genoma y debe estar dirigido a

regiones genómicas seleccionadas que se consideran de interés en
un caso dado.
 Aplicaciones de la técnica FISH

➢ Se ha convertido en la técnica de elección cuando se sospecha un

síndrome por microdeleción / duplicación.
Síndrome Velocardiofacial
Síndrome de Prader-Willi
Síndrome de Angelman,
Síndrome de Williams

➢ Permite detectar anomalías numéricas (aneuploidías) y es una

herramienta importante para confirmar reordenamientos
cromosómicos.

➢ Otra área de aplicación muy importante es en el

diagnóstico, pronóstico y seguimiento de
neoplasias hematológicas.
 CARIOTIPO
• Requiere células en división.
• Requiere tejido fresco.
• Permite detectar
alteraciones de todo el
genoma.
• Bajo coste económico.
FISH
• No requiere células en
división.
• Permite estudiar material
parafinado o congelado.
• Solo aporta información de
la sonda que se utiliza.
• Moderado coste económico.
Muchas gracias!!