PRACTICA DE LABORATORIO # 2 “BIOTECNOLOGÍA VEGETAL”

"PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO"

Preparado por: Alina K. Sigarroa Rieche. Profesor Biotecnología Vegetal.

OBJETIVOS

Conocer todo el proceso de preparación del medio de cultivo para la ejecución de los trabajos
de cultivo de tejidos vegetales

MATERIAL A TRAER AL LABORATORIO

Bata de Laboratorio
Cuaderno de laboratorio
1 rollo de papel aluminio (Todo el grupo)
Cinta tirro (de enmascarar) o marcador permanente para vidrio

INTRODUCCION

Ya se encuentran preparadas soluciones stock ó madres para la elaboración, de manera más

fácil y rápida, del medio basal más comúnmente utilizado en los trabajos de cultivo de tejidos
vegetales: el medio MS (Murashige y Skoog, 1962). Este medio de cultivo, desarrollado por
los investigadores que le dan nombre, se da a conocer a la comunidad científica en 1962 en
trabajos de cultivo de explantes de tabaco; sin embargo, por su eficacia probada en la mayoría
de las especies vegetales se extiende su uso, como medio basal, en una gran variedad de
cultivos, especialmente cuando se trabaja en la micropropagación de especies ornamentales.
Otros medios de cultivo basales se han desarrollado y son aplicados en algunos casos, algunos
de los más conocidos son: B5 de Gamborg, White, Morel and Muller, Gautheret y Eriksson,
entre otros.

Adicionalmente al medio de cultivo final se le deberá añadir:

-Vitaminas
-Fuente de Carbono (generalmente, Sacarosa)
-Agente Solidificante (generalmente, Agar)*
-Cantidades y Combinaciones requeridas de Reguladores del crecimiento.

* Para medios de cultivo sólidos y semisólidos

Nota: También en algunos casos se le añaden otras sustancias orgánicas, que contribuyen al
mejor establecimiento y/o multiplicación del material vegetal.

El agua es el solvente por excelencia y el cultivo de tejidos no escapa a tal uso, por lo tanto
todos los componentes del medio serán disueltos en ésta.

Otro aspecto a tener en cuenta en este proceso es el ajuste del pH, este parámetro es de
especial importancia y se debe efectuar el ajuste antes de añadir el agar y las hormonas; el
rango varía con la especie, coincidiendo con el valor óptimo para la vida de las células
PRACTICA DE LABORATORIO # 2 “BIOTECNOLOGÍA VEGETAL”
"PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO" Hoja 2 de 3

vegetales en cada caso; también es importante tener en cuenta que valores de pH errados
pueden taer problemas en la solidificación del medio.

En todo caso es importante tener en cuenta que en la literatura existen una gran cantidad de
medios de cultivo y de combinaciones para cada especie, incluso pueden encontrarse varios
medios y combinaciones para una misma especie vegetal, por tanto será necesario hacer una
búsqueda exhaustiva en cada caso y ajustar algunos parámetros específicos, según el cultivo
propagado y las condiciones específicas de cultivo "in vitro".

BASE TEORICA

Puede encontrarse más bibliografía sobre el tema en:

• Hurtado M, D.V y María Eugenia Merino. El Cultivo de Tejidos Vegetales. Ed.

TRILLAS. México. p. 35-43; 67-85. 1994.
• Gloria Jaimes de Lindarte. El cultivo de tejidos vegetales y aplicaciones. Universidad
Francisco de Paula Santander. Facultad de Ciencias Agrarias y del Ambiente. Cúcuta. p.
30-39. 1998
Las mismas podrán ubicarse en la biblioteca de la U.F.P.S.

DESARROLLO DE LA PRACTICA

EJERCICIO PRÁCTICO "PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO

PROCEDIMIENTO
1. Lavar perfectamente los frascos de cultivo, preferiblemente poner a esterilizar en estufa
(horno) por 2 horas a 155 0C
2. Preparar el medio de cultivo, según se indica a continuación:

Disolvente: Agua Destilada

Macronutrientes 25 ml/l
Micronutrientes 1 ml/l
CaCl2 3 ml/l Sales de M.S al 100 %
IK 1 ml/l
EDTA-Fe 10 ml/l

Preparado por: Alina K. Sigarroa Rieche. Profesor Biotecnología Vegetal

PRACTICA DE LABORATORIO # 2 “BIOTECNOLOGÍA VEGETAL”
"PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO" Hoja 3 de 3

suplementado con:
Vitaminas MS 2 ml/l
Azúcar 30 gr/l
AJUSTAR pH 6.0
Agar 6 gr/l
2,4 D 0.5 mg/l

El agar se debe añadir una vez que se ajuste el pH, para hacerlo siga las indicaciones del
profesor o asistente de laboratorio.

3. Distribuya el medio en los frascos, tapar y rotular

4. Ponga a esterilizar en el autoclave por 20 minutos a 121 0C (1.5 atm)

5. Guardar en el área trampa a temperatura ambiente o refrigerar si va a dejar por más de

cuatro días.

CUESTIONARIO:

1. Realice un diagrama de flujo del proceso de preparación del medio de cultivo.

2. Por qué se le añade al medio el 2,4 D? A qué grupo hormonal pertenece y que función
realizará en el medio de cultivo? Este medio de cultivo será para obtener plantas completas?
Justifique su respuesta.

3. Qué tipo de formación deberá esperar a partir de este medio de cultivo? Justifique su
respuesta.

Preparado por: Alina K. Sigarroa Rieche. Profesor Biotecnología Vegetal