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Nivel de Académico
Nombre de la materia / Semestre
GRUPO: A
07/12/2022
TECNOLOGÍA SUPERIOR EN BIOTECNOLOGÍA
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Nombre de la materia / Semestre
1. Objetivos
• Obtener órganos de los explantes usando una hoja de tomate de árbol, de manera
masiva
• Determinar el porcentaje y tiempo de crecimiento de explantes in vitro
• Identidicar las diferencias el medio MS y MS con fitohormonas
2. Introducción
El cultivo de tejidos vegetales es una técnica biotecnológica que permite el mantenimiento
de las plantas o componentes en condiciones estériles concentradas evitando así la
contaminación o enfermedades de las plantas, antes le dará no ha sido de gran ayuda en la
agricultura y la investigación vegetal.(Roca y Mroginski 2013)
El cultivo in vitro de las plantas va depende mucho del medio de cultivo y lo que se va a
sembrar de la planta como las hojas, semillas, tallo etc, para esto el medio de cultivo debe
contener nutrientes, reguladores de crecimiento, agua y fuente de carbono dependiendo de
las necesidades de las plantas. El cultivo in vitro es muy difícil de realizar porque cada
especie necesita nutrientes diferentes, de igual manera depende mucho de la adaptación para
el cremiento optimo, en esta práctica se trabajó con medio MS adicional Fitohormonas, este
medio se caracteriza por ser un medio basal y de fácil adaptación en las plantas gracias a las
concentraciones altas de macro y micronutrientes.(Francis Turner et al. 2019)
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3. Materiales
• Caja Petric: Se caracteriza por su forma redonda, hecho de vidrio o de plástico, se
usa común mente para poder observar diferentes tipos de muestras tanta
biológicas como químicas, también se usa para el cultivo de bacterias y otras
especies.(Anón 2020)
• Vaso precipitado : Un vaso precipitado tiene la forma cilíndrica y posee un fondo
plano, comúnmente son de vidrio y de plásticos , se usan principalmente para
contener líquidos o sustancias , también se usa para calentar , disolver o preparara
reacciones químicas (Ramírez Diaz 2016)
• Bisturí: El bisturí o conocido como escalpelo es un instrumento en forma de
cuchillo pequeño que se usan en procedimiento de cirugía , o en el laboratorio se
usan para cortar pequeñas fragmentos. (Ramírez Diaz 2016)
• Pinzas: las pinzas en el laboratorio se caracterizan por ser una herramienta que
permite mantener firmemente el objeto. (Ramírez Diaz 2016)
• Alcohol: El etanol es un compuesto químico conocido como alcohol, el cual en el
laboratorio nos va a permitir la desficción del área de trabajo o materiales previos
a usar o mantener una área estéril. (Ramírez Diaz 2016)
• Frascos boecos: esta botella redonda de diferentes volúmenes se puede utilizar
para almacenamiento, así como la mezcla o muestreo. (Ramírez Diaz 2016)
• Agar -Agar: El agar – agar es un gelificante natural que procede de algas rojas ,
este tiene que ser disuelto en agua caliente al menos de 80°C para la disolución y
añadir en los medios.(Alejos Cabrera et al. 2021)
• Medio MS: El medio Murashige y Skoog MS, se ha convertido en un medio más
común usados en los cultivos in vitro de tejidos vegetales , ya que se caracteriza
por tener macro y micronuentres necesarios en tejidos vegetales. (Alejos Cabrera
et al. 2021)
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Siembra de explantes
Una vez desinfectada el área de trabajo en un vidrio se procedió a cortar 15 pedazos pequeños
aproximadamente de 0,5 de las hojas del tomate de árbol como se evidencia en la figura 1
Todo es proceso que se describirá a continuación se llevó a cabo en cámara de flujo, se coloca
en un vaso precipitado los 15 pedazos de hoja durante 3minutos en alcohol al 70%, luego se lava
con agua destilada, una vez hecho eso se coloco en un vaso precipitados durante 15 – 20 minutos
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en hipoclorito de sodio 2.5% + 4 o 5 gotas de Tween 20, en este proceso se evidencia una
oxidación después se realiza 3- 4 lavados en agua destilada , después de la desafección del
explantes se procede a sembrar en el medio MS con Fitohormonas , para lo cual se va a flamear
las pinzas y se va a colocar 3 hojas por cada .
5. Resultados
En la práctica después de 4 días se puedo evidenciar una contaminación masiva como se
evidencia en las figuras 1, en todos los explantes, eso se debe a la falta de asepsia o a su ve la
planta está enferma, o mal realizado la esterilización del medio.
6. Discusión
Medio de cultivo
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de cremientos y otros componentes
que crean condiciones necesarias de manera aséptica para el desarrollo de microrganismo o
cultivo de tejidos. Componentes principales del medio son macronutrientes , micronutrientes ,
factores de cremiento .(Doménech y García 2014)
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Vitaminas Función
Ácido p-aminobenzoico Precursor del ácido fólico
Ácido fólico Metabolismo de compuestos de un carbono;
transferencia de grupos metilo
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• Medio de enriquecimiento.
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• Medio selectivo.
Medio MS
El medio Murashige and Skoog (MS), o abreviado MS0, fue inventado por los investigadores
Toshio Murashige y Folke K. Skoog en 1962 mientras estudiaban nuevos reguladores del
crecimiento vegetal y se ha convertido en el medio más utilizado para el cultivo de tejidos
vegetales in vitro. Como investigador postdoctoral en Skoog, Murashige inicialmente se centró
en encontrar hormonas de crecimiento en el jugo de tabaco, pero sin éxito. En cambio, el análisis
del jugo de tabaco reveló altas concentraciones de minerales específicos. Varios experimentos
posteriores demostraron que la variación de los niveles de estos nutrientes dio como resultado un
aumento significativo del crecimiento en comparación con las formulaciones existentes. En
particular, se encontró que el nitrógeno promueve el crecimiento del tejido del tabaco en
cultivo.(Rodríguez, Chacón, y Carrillo 2014)
Rodríguez, Chacón, y Carrillo (2014) Menciona que el medio Ms tiene diferentes componentes
como se mencionara a continuación
Componente de MS
Sales Mayores
• Nitrato de amonio 1650 mg/l
• Cloruro de calcio 440 mg/l
• Sulfato de magnesio 370 mg/l
• Fosfato monopotásico 170 mg/l
• Nitrato de Potasio 1900 mg/l.
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Fitohormonas
Las hormonas vegetales, u hormonas vegetales, son compuestos naturales producidos en las
plantas que determinan en gran medida el desarrollo. Se sintetizan en muy baja concentración (˂
1 ppm) en una determinada parte u órgano de la planta y actúan allí o se trasladan a otro lugar
donde regulan determinados eventos fisiológicos (estimulan, inhiben o modifican el desarrollo).
Los nutrientes están excluidos de este término porque las plantas no los producen, sino que los
absorben, así como los aminoácidos y las enzimas porque están presentes en concentraciones
más altas en las plantas. En general, las hormonas están presentes en todas las partes de la planta
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y en todo momento, aunque finalmente se concentran más donde más se necesitan.(Porta et al.
2020)
Las auxinas
Las auxinas son hormonas de crecimiento superiores debido a la división y elongación (raíces,
tallos, hojas, frutos, etc.), especialmente al inducir el enraizamiento (por ejemplo, cortar raíces).
Están involucrados en el tropismo de las plantas, inhiben el envejecimiento o la senescencia de
los tejidos, inhiben la germinación de las yemas laterales (axilares) y la abscisión de órganos.
Las auxinas se sintetizan a partir del aminoácido triptófano, de los cuales la auxina más
estrechamente relacionada en términos de cantidad y actividad es el ácido indolacético (IAA).
Algunos nutrientes, como el Zn y el B, están íntimamente relacionados con la auxina, ya que su
deficiencia provoca una disminución de la cantidad de auxina en los tejidos, lo que reduce el
proceso de división y elongación celular. Algunos cultivos se caracterizan por el acortamiento de
los entrenudos, en parte debido a la baja síntesis de auxinas.(Porta et al. 2020)
Las giberelinas
Las citocininas
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Las raíces son el principal órgano de síntesis de estas hormonas, aunque también se sintetizan
en cualquier tejido, especialmente en lugares de intensa división celular. Activan el crecimiento
de las yemas laterales, estimulan el crecimiento de los frutos, retrasan la senescencia de las hojas
y estimulan la movilización de nutrientes. Hay varias citoquininas naturales, las más importantes
son la zeatina, la benciladenina y la kinetina. Su movimiento es preferentemente al alza, aunque
también puede ser a la baja, pero depende totalmente de donde estén más demandados. El N es
uno de los principales elementos asociados a la presencia de esta hormona en los tejidos.(Porta
et al. 2020)
Explantes
Tipos
Se utilizarán como explantes segmentos de hoja obtenidos de la planta madre del tomate de
árbol, que crece en condiciones óptimas y estériles.(Roca y Mroginski 2013)
Elección, acondicionamiento
Para su acondicionamiento los explantes será tratados con los reactivos y procesos mencionados
anteriormente en la desafección de explantes, dentro de la adaptación se realizó en el cuarto de
cultivo, donde mantendrá el ambiente aséptico. (Roca y Mroginski 2013)
Árbol de tomate
Taxonomía
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Solanum betaceum fue descrita por Antonio José de Cavanilles y publicado en Historia
Natural.(Roca y Mroginski 1991)
Nombre común: Tomate de árbol
Reino : Plantae
División: Angiospermae
Clases: Magnoliopsida
Subclases: Asteridae
Familia:Solanales
Genero:Solanum
Subgénero: Cyphomandra
Sección: Pachyphylla
Especie: S. betaceum
Descripción
Tiene hojas enteras alternas con un pecíolo grueso de 4 a 8 cm de largo en los extremos de las
ramas. Las hojas son de 15-30 cm de largo, ovaladas, puntiagudas, de color verde oscuro,
ligeramente ásperas al tacto. Las hojas jóvenes tienen pelos finos en ambos lados. Las venas son
claras y visibles. Las flores son pequeñas, de 1,3-1,5 cm de diámetro, de color blanco rosado,
dispuestas en pequeños racimos terminales. Tienen 5 pétalos y 5 estambres amarillos. Florece de
mayo a junio. El fruto es una baya ovoide, de 4-8 cm x 3-5 cm, con un largo pedúnculo sobre el
que crece el cáliz. La piel madura es lisa, roja o anaranjada, con rayas brillantes. La pulpa es
jugosa, ligeramente agria, de color naranja a rojo y contiene muchas semillas. La fruta es
comestible, se come cruda o mezclada en ensaladas, o se cocina mejor y se convierte en jugo,
dulces y postres. Aportan hierro, potasio, magnesio, fósforo y vitaminas A, C y E.(Acosta 2019)
Crece en un clima típico de bosque húmedo montano con una temperatura de 13 a 24 ºC y una
precipitación anual de alrededor de 600 a 1500 mm; también a una altitud de 800 a 2800 m sobre
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el nivel del mar. Es muy sensible a las bajas temperaturas, los fuertes vientos y la sequía.
Requiere una marga que drene bien, sea rica en materia orgánica y se beneficie del
compost.(Acosta 2019)
Usos
En Colombia y Ecuador, su uso medicinal está relacionado con la garganta y la gripe. Use frutas
u hojas precalentadas durante la amigdalitis o la angina. En caso de gripe, comer fruta fresca en
ayunas. Se sabe que esta fruta tiene un alto contenido de ácido ascórbico. Otra propiedad se
encuentra en Jamaica y Bolivia como remedio para problemas hepáticos. Se puede utilizar
cocido o crudo. La salsa de chile a menudo se prepara de la misma manera con esta fruta. En
Colombia, la fruta se sirve en jugo o sorbete.(Acosta 2019)
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Cuarto de cultivo
Los cuartos de cultivos comúnmente requieren un espacio seguro, en un entorno consistente y un
esquema de mantenimiento y crecimiento de las plantas. Los cuartos de cultivos requieren un
espacio seguro, además las plantas logran adelantase con un impacto ambiental mínimo al
sacarse al exterior.(Sandoval 2013)
Características del cuarto de cultivo son las siguientes así lo menciona (Sandoval 2013) :
Aire 20%
Temperatura
Humedad
Contenido CO2
Luz 20%
Intensidad
Espectro
Fotoperioridad
Agua 20%
temperatura
pH (medida de acidez o alcalinidad)
EC (conductividad eléctrica)
contenido de O2
Nutrientes 20%
composición
pureza
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7. Conclusiones
• Se pudo obtener órganos de los explantes usando una hoja de tomate de árbol, de manera
masiva
• En la practica se determinó el porcentaje y tiempo de cremiento de los explantes de las
hojas del tomate de árbol
• Se identifico las diferencias entre el Medio MS y Ms con fitohormonas las cuales son que el
Ms no tiene todos los nutrientes necesarios para el crecimiento óptimo de la planta y el MS
con fitohormonas es un medio óptimo para el desarrollo del explante
8. Referencias Bibliográficas
Acosta, Belen. 2019. «Cultivo de Tomate de Árbol - Guía Práctica». ecologiaverde.com.
Recuperado 2 de enero de 2023 (https://www.ecologiaverde.com/cultivo-de-tomate-de-
arbol-2023.html).
Alejos Cabrera, Ruth, Gheraldine Ynga Huamán, Wilmer Gaspar Reyes, y Alexander Niño
Velásquez. 2021. «Manual de desinfección y esterilización del material de laboratorio de
alimento vivo: microalgas». Instituto del Mar del Perú - IMARPE.
Arcani Huanca, Juan José, y Luis Ramiro [tutor Velarde Chavez. 2018. «Equipos de laboratorio
clinico». Thesis.
Cando, Geraldo, Francys Braga, Rafaela Souza, y Claudinia Nudes. 2013. «- Biotecnología
vegetal y cultivo de plantas in vitro». - Biotecnología vegetal y cultivo de plantas in vitro.
Recuperado 2 de enero de 2023
(https://tecnal.com.br/es/blog/327_biotecnologia_vegetal_y_cultivo_de_plantas_in_vitro)
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Casas, Francesc Tresserra, Alameda Quitllet Francesc, Aneiros Fernández José, Añorbe Diaz
Loreto, Blavi Torres Judit, Bosch Pincep Ramón, Carrasco García Ángel Miquel, Català
Costa Isabel, Casajut Fibla Marta, Centeno Haro Macarena, Combalia Soriano Neus,
Corral Gayo Cesar, de la Villa Porras Isabel, Dinarès Fernández Carme M., Fabra Pañella
Gemma, Gallardo Campos Joana, González Miguez Clarisa, Gonzalez Moya Sara,
González Tormos Borja, Granados Carreño Rosario, Hernandez Salleras María, Jaén
Martínez Miguel Joaquin, Lerma Puertas Enrique, Lloveras Rubio Belen, Lozano
Figueras Abraham, Mancebo Marco Eva, Munné Bertran Isidre, Pallares Quixal Judith,
Pérez Ochoa Francisco, Sant Masoliver Francesc, Santacana Espasa Maria, Tarroch
Sarasa Xavier, Temprana Salvador Jordi, Tomás Arasa Bàrbara, Tresserra Casas
Francesc, Vasquez Dongo Carmen, y Vázquez de las Heras Ivonne. 2019. Guía de
Calidad en Citopatología: Societat Catalana de Citopatologia. Societat Catalana de
Citopatologia.
Francis Turner, Liliana, Librada Ramírez de Collazos, Fredy Arvey Rivera Páez, y Marco Fidel
Ávila Rodríguez. 2019. Protocolos de laboratorio. Biología celular. Ibagué : Sello
Editorial Universidad del Tolima, 2019.
Guaman Torres, María Micaela. 2022. «OPTIMIZACIÓN DEL ÁREA DE REACCIÓN 100 EN
EL PROCESO DEL HIDRÓGENO PARA LA OBTENCIÓN DE ÁCIDO
CLORHÍDRICO». Thesis.
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Porta, Helena, Gladys Jiménez-Nopala, Helena Porta, y Gladys Jiménez-Nopala. 2020. «Papel de
las hormonas vegetales en la regulación de la autofagia en plantas». TIP. Revista
especializada en ciencias químico-biológicas 22. doi:
10.22201/fesz.23958723e.2018.0.160.
Rodríguez, Mario, Manuel Chacón, y Rubén Carrillo. 2014. «Efecto de la concentración y de los
componentes del medio de cultivo MS sobre la germinación in vitro de Ugni molinae».
Bosque (Valdivia) 35(1):23-24. doi: 10.4067/S0717-92002014000100012.
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