Genética I: Genética molecular duplicación.

EXPERIMENTOS:

Griffith (1928)

Avery, MacLeod y McCarty (1944)

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Hershey y Chase (1952)

DUPLICACIÓN DEL ADN:

Meselson y Stahl (1957)

Tres hipótesis:

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SÍNTESIS DE ADN IN VITRO: Arthur Kornberg (1956)

El ADN polimerasa se encuentra asilado de la bacteria Eschericha coli. Es capaz de sintetizar

ADN in vitro mediante:

- Desoxirribonucleótidos-5-trifosfato (A, T,
C y G)
- Iones Mg 2+
- Fragmento de ADN (retirado de una de
las hebras. La cadena entera se toma
como patrón y el extremo 3´de la cadena
cortada se utiliza como cebador.

Son utilizados 1000 aa, y el ADN polimerasa se

encuentra en el núcleo, mitocondrias y
cloroplastos.

Existen tres lugares donde pueden fijarse los

sustratos:

- ADN patrón.
- ADN cebador.
- Nucleótido.

Añadió 1000 nucleótidos/min.

Incapaz de sintetizar una cadena de novo.

SÍNTESIS DE ADN IN VIVO: John Cartis (1963)

El ADN bacteriano queda marcado con timidina tritiada (TH3)

Creo muestras cada dos o tres minutos para obtener autorradiografías.

- Imágenes iniciales en forma de V (HORQUILLAS DE REPLICACIÓN)

- Imágenes intermedias en forma de media luna (BURBUJA DE REPLICACIÓN)
- Imágenes finales con forma de círculos más o menos aplastados (ADN CIRCULAR)

Su experimento confirmó la hipótesis semiconservativa.

Dio evidencia de la existencia de un punto iniciación en la replicación: el ADN bacteriano

circular.

Se planteó las siguientes incógnitas:

- ¿ADN polimerasa actuaba sin cebador?

- ¿Crecimiento en paralelo de las dos hebras de ADN?

Los fragmentos de Okazaki: estaban formados por ARN (50 nucleótidos) y ADN (1000-2000
nucleótidos). Estos fragmentos se sintetizaron en diferentes regiones utilizando la hebra
patrón:

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 1. Por ARN polimerasa.
2. Continuados por ADN polimerasa.
3. Dirección 5´-3´

Pierden su porción de ARN que sustituyen por ADN y se unen entre su constituyendo una
hebra de ADN que crece en sentido 3´-5´.

DUPLICACIÓN DE ADN EN PROCARIOTAS:

Fase de iniciación: es el origen de la replicación (secuencia de nucleótidos que actúa como

señal de inicio).

La helicasa es una enzima que separa las dos hebras complementarias (rompe puentes de
hidrógeno).

Las topoisomerasas eliminan tensiones y desenrollan las dos hélices (cortan hebras y las
vuelven a unir) (ej: GIRASA de las bacterias)

Las proteínas estabilizadoras (SSB) mantienen las dos hebras separadas.

Se produce la formación de horquilla de replicación (proceso bidireccional)(una helicasa en

cada sentido y dos horquillas enfrentadas: BURBUJA U OJO DE REPLICACIÓN)

Fase de elongación: además de las enzimas anteriores.

En una hebra de ADN existen:

1. ARN polimerasas (primasa sintetiza

fragmento de unos 10 nucleótidos (primer)
cebador).
2. ADN polimerasas (ADN polimerasa III parte
del primer y sintetiza una nueva hebra de

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 ADN sentido 5´-3´de crecimiento continuo (hebra conductora o adelantada).

En una hebra antiparalela:

1. ARN polimerasa sintetiza un ARN (40 nucleótidos) a unos mil nucleótidos de la señal de
iniciación.
2. ADN polimerasa III sintetiza unos mil nucleótidos de ADN (FRAGMENTO DE OKAZAKI):
el proceso se repite según se van separando las hebras patrón.
3. ADN polimerasa I (acción exonucleasa): retira el ARN y añade nucleótidos de ADN en su
lugar.
4. ADN ligasa une los fragmentos de ADN (hebra retardada, crecimiento discontinuo).

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DUPLICACIÓN ADN EN CÉLULAS EUCARIOTAS:

Presenta diferencias con las procariotas:

Las histonas asociadas al ADN formando nucleosomas: Al formarse la

horquilla de replicación:

- La hebra patrón de la hebra conductora se queda con las histonas

y ambas se enrollan sobre octámeros primitivos.
- La hebra retardada y su patrón se enrollan sobre nuevos
octámeros de histonas.

La longitud del ADN:

- El cromosoma eucariota es más largo que el procariota (50

mm/1mm)
- Más lento el proceso (50 nucleótidos frente a 500) por la presencia de histonas.

La replicación posee varios orígenes:

- Unas 100 burbujas repartidas irregularmente.

- Activadas de forma coordinada y constituyen
los REPLICONES.

Los fragmentos de Okazaki son más pequeños (100-200

nucleótidos)

En el periodo S de la interfase y dura de 6-8 h.