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Empezamos utilizando enzimas de restricción EcoRI y HindIII para digerir el plásmido y observar a
través de electroforesis en gel de agarosa los cortes realizados. Una vez observado los cortes y se
preparó medio de cultivo LB para tener stock para los procedimientos posteriores.
Luego se inició la transformación de bacterias competentes Escherichia Coli-K12, para este
procedimiento se utilizaron reactivos como el cloruro de calcio para facilitar la adsorción del ADN
en la membrana permitiendo a través del shock térmico la entrada del plásmido al citoplasma.
La detección de clones positivos se logró con cultivos en medio LB con ampicilina y con ampicilina-
arabinosa, la arabinosa permite que la GFP recombinante se exprese para identificar los clones
positivos, también se realizaron MINIPREPS con el fin de purificar y guardar stock de pGLO para
próximos practicantes, siempre se realizaron electroforesis para ir visualizando la presencia del
vector, el siguiente paso fue purificar la proteína GFP, se realizó a través de columnas de
cromatografía de adsorción-desorción ( kit Bio-Rad).
También realizamos SDS-PAGE con pesos moleculares con el fin de comprender la técnica, es
importante mencionar que se repitieron varios de los procedimientos mencionados para
dominarlos bien, la última técnica realizada fue la de PCR en la cual usamos genes de ratón, se
obtuvieron resultados óptimos y se pudieron visualizar las bandas correspondientes a los genes
utilizados.
CARRERA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA VIDA
UNIVERSIDAD ANDRES BELLO
Si lo considera pertinente, puede agregar a su evaluación comentarios en cada uno de los ítemes
considerados.
Las evaluaciones en un caso es respuesta afirmativa o negativa, en los otros se indica una escala de
logro de los objetivos y expectativas expresada en los siguientes niveles:
C. Retroalimentación:
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Firma del Evaluador.- Fecha