Guia de Practicas Análisis Biológico 2023 v1

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN DE AREQUIPA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
GUÍA DE PRÁCTICAS
“ANÁLISIS BIOLÓGICO”
Dr. Blgo. EDGAR QUISPE CHIPANA

Blga. MAIDA BERNEDO GUILLÉN
Mg. Blgo. ADOLFO RAMOS PAREDES
PERTENECE A: ………………………………………………………………
GRUPO DE PRÁCTICAS: ……………………………………………………
AREQUIPA - PERÚ
2023
GUÍA DE ANÁLISIS BIOLÓGICO – 2023 E. Quispe C., M. Bernedo G. y A. Ramos P.
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PRÓLOGO
Análisis Biológico es el campo dedicado al estudio de los fluidos corporales desde los puntos
de vista estructural, funcional y patológico. Los fluidos corporales cumplen múltiples funciones
en todo el cuerpo, por lo que una anomalía puede tener consecuencias graves en el sistema
inmunitario, en el transporte de oxígeno, en el suministro de nutrientes a los órganos y en el
proceso de la coagulación. La forma más común de estudiar los fluidos corporales es a través de
la cuantificación de los diversos componentes presentes y la observación extrayendo una pequeña
cantidad de muestra.
El propósito de esta Guía de Prácticas de Análisis Biológico es proporcionar a los estudiantes
de Biología información sobre las técnicas utilizadas para su estudio y su fundamento. Los cambios
ocurridos en los últimos años con la automatización en el área de Laboratorio Clínico han
permitido comprender mejor los procesos fisiológicos normales y la fisiopatología de las
enfermedades. El avance tecnológico es un reto y nos obliga a conocer los nuevos procedimientos
diagnósticos, debido a que se han desarrollado nuevas técnicas cualitativas y cuantitativas de los
componentes de los fluidos corporales. Por lo que, en un futuro cercano la práctica de Análisis
Biológico será muy diferente respecto de lo que conocemos ahora.
La práctica y el estudio del Análisis Biológico constituyen una parte indispensable en la labor
profesional del egresado de la carrera de Biología, ya que le permitirá desempañarse con mucha
confianza en su centro laboral. Los experimentos han sido diseñados para los estudiantes que están
orientados al área de la Salud y para todos los que deseen reproducir las técnicas fundamentales
de esta disciplina. Se recomienda a los estudiantes realizar personalmente los experimentos para
desarrollar su manualidad. Así mismo es indispensable que aprenda a observar, razonar y
reflexionar sobre la aplicación del método científico en sus experimentos. Además, es importante
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que el estudiante pueda revisar previamente los temas a ensayar en el laboratorio de Análisis
Biológico.
LOS AUTORES
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CRITERIOS DE EVALUACIÓN
La Evaluación en el Laboratorio de Análisis Biológico de la Carrera de Biología consta de las
siguientes partes:
- Asistencia mínima del 80 %
- Trabajo grupal
- Desarrollo experimental
- Informe de resultados de laboratorio
- Exámenes de laboratorio
Trabajo grupal
Para el desarrollo del trabajo grupal los alumnos del laboratorio de Análisis Biológico son
agrupados en equipos de trabajo de dos a tres personas. Consistirá de la exposición oral por parte
del grupo, para presentar el tema de la Práctica correspondiente ante el resto de los grupos. Las
exposiciones se presentarán en el tiempo requerido con apoyo de un cañón, y se contemplara los
siguientes puntos:
- Título de la Práctica
- Introducción
- Fundamento del método
- Procedimiento detallado
- Precauciones del trabajo
- Valores de Referencia
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Para que la presentación sea clara deberá realizar el procedimiento esquematizado con dibujos
y flechas.
Desarrollo Experimental
El desarrollo experimental se realiza de manera individual, para los cual se tomarán en cuenta
los siguientes puntos considerando las Buenas prácticas de Laboratorio.
1. Usar siempre el mandil abotonada durante el desarrollo las prácticas.
2. Formar grupos de 2 o 3 personas.
3. Contar con el material por grupos para la adecuada realización de las prácticas.
4. Contar con el material completo previo a las prácticas.
5. Rotular todas las soluciones y disoluciones.
6. Estar siempre activo y pendiente de la práctica que se está realizando en grupo para
disminuir los errores de trabajo.
7. Cuidar los materiales, reactivos e instrumentos empleados.
8. Mantener limpia su área de trabajo, así como el resto de las áreas utilizadas durante y al
final del trabajo.
9. Permanecer en el laboratorio durante toda la realización del trabajo experimental y llevar a
buen término la práctica. No está permitido salirse del Laboratorio sin previo aviso durante el
desarrollo de las prácticas.
Informe de Resultados de Laboratorio
Para poder entregar el informe y ser recepcionado deberá cumplir con los siguientes puntos.
1. Entregar de manera individual y personalmente antes de la siguiente práctica, después de
ese tiempo, ya no se recibirán informes.
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2. Los informes de resultados no entregados o no recibidos, según sea el caso tendrán la
calificación de cero.
3. Los informes de resultados de laboratorio tienen un formato para llenarse por práctica.
Exámenes de Laboratorio
1. Los exámenes de laboratorio constará del desarrollo experimental con todas las
consideraciones para su realización desde fundamento hasta la interpretación de los resultados.
Constará de 3 exámenes prácticos antes de la semana de exámenes teóricos. Para promediarse
deberán de tener todos los exámenes una calificación aprobatoria.
2. Los exámenes prácticos no tiene recuperación ni sustitutorio.
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REGLAMENTO PARA EL LABORATORIO DE ANÁLISIS BIOLÓGICO
1. Es obligación usar mandil abotonado durante el desarrollo de las prácticas.
2. Contar con su guía de prácticas y apuntes, exclusivo para el laboratorio.
3. Prohibido fumar y prohibido ingerir alimentos.
4. Guardar los objetos personales y/o mantenerlos alejados de las mesas de trabajo.
5. Mantener el área de trabajo libre de objetos extraños y material que no sea el adecuado para
cada práctica.
6. Al término de cada práctica limpiar todo el equipo instrumental utilizado y guardarlo en el
área asignada para ello.
7. Limpiar el área de la mesa de trabajo antes de cada práctica, mantenerla así durante la
misma y al finalizar.
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TABLA DE CONTENIDO
PRÓLOGO ..................................................................................................................................... iii
CRITERIOS DE EVALUACIÓN .................................................................................................. v
REGLAMENTO PARA EL LABORATORIO DE ANÁLISIS BIOLÓGICO .......................... viii
PRÁCTICA 1: ................................................................................................................................. 1
FUNDAMENTOS DE EQUIPOS DE LABORATORIO, ANALISIS Y ESPECIFICACIONES
TÉCNICAS DE REACTIVOS ....................................................................................................... 1
PRÁCTICA 2: ............................................................................................................................... 17
CONTROL DE CALIDAD Y SEGURIDAD EN EL LABORATORIO .................................... 17
PRÁCTICA 3: ............................................................................... ¡Error! Marcador no definido.
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA Y CURVA DE TOLERANCIA¡Error! Marcador no
definido.
PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA ................................... ¡Error! Marcador no definido.
COLESTEROL TOTAL, TRIGLICERIDOS Y LIPOPROTEINAS¡Error! Marcador no
definido.
METODO COLORIMETRICO PARA LA DETERMINACION DE CALCIO Y HIERRO EN
SUERO ......................................................................................... ¡Error! Marcador no definido.
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DETERMINACION DE UREA, ACIDO URICO Y CREATININA¡Error! Marcador no
definido.
DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y TRANSAMINASAS¡Error! Marcador no
definido.
ANÁLISIS HEMATOLÓGICO ................................................... ¡Error! Marcador no definido.
PRÁCTICA 10: ............................................................................. ¡Error! Marcador no definido.
ANÁLISIS INMUNOLÓGICOS.................................................. ¡Error! Marcador no definido.
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO ................................................ ¡Error! Marcador no definido.
UROANALISIS ............................................................................ ¡Error! Marcador no definido.
COPROLOGÍA ............................................................................. ¡Error! Marcador no definido.
BIBLIOGRAFÍA .......................................................................... ¡Error! Marcador no definido.
ANEXO......................................................................................... ¡Error! Marcador no definido.
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PRÁCTICA 1:
FUNDAMENTOS DE EQUIPOS DE LABORATORIO, ANALISIS Y
ESPECIFICACIONES TÉCNICAS DE REACTIVOS
COMPETENCIAS
Comprende los fundamentos incorporados en los equipos de laboratorio
Reconoce la importancia de las diversa técnicas y matrices utilizados para los diferentes análisis.
Opera correctamente un espectrofotómetro UV-VIS de un solo haz.
Verifica que el espectrofotómetro opera adecuadamente determinando la linealidad y la exactitud
espectrofotométricas.
Realiza una correcta interpretación de los insertos de los reactivos de trabajo.
INTRODUCCION
El proceso de análisis de sustancias se inicia siempre definiendo cuál es el problema,
determinación o información que estamos buscando. Esta es una de las etapas fundamentales ya
que condicionara la selección del método a utilizar y la confiabilidad de la información obtenida.
En esta etapa se debe considerar el analito y la matriz donde se encuentra. Es importante tomar en
cuenta el método y la matriz donde se encuentra el analito ya que se pueden producir interferencias
en el proceso de medida, por tanto, resultados sesgados o erróneos. La toma de muestra y
preparación de esta son etapas críticas en el proceso de medida, ya que no pueden analizarse
directamente, sino que hay que prepararlas para adecuarlas la técnica y al método a aplicar.
También se debe decidir con que exactitud, precisión e incertidumbre se determinar el analito.
Para obtener resultados exactos se tiene que utilizar técnicas de gran sensibilidad y aplicar
procedimientos analíticos muy rigurosos, mientras que, para obtener resultados menos exactos o
aproximados, el rigor puede ser menor. La elección de una u otra técnica dependerá de la exactitud
e incertidumbre con que se quiera determinar el analito.
FUNDAMENTO
El fundamento principal incorporado en un espectrofotómetro se basa en la absorción de luz por
parte de una muestra y la medición de esta absorción para determinar la concentración de una
sustancia en la muestra. El espectrofotómetro es una herramienta analítica que se utiliza
comúnmente en química, bioquímica y otras disciplinas científicas para cuantificar la
concentración de sustancias químicas en solución.
El principio fundamental detrás del espectrofotómetro se basa en la Ley de Beer-Lambert, que
establece que la absorción de luz por una solución es directamente proporcional a la concentración
de la sustancia absorbente y al camino óptico a través de la muestra. Matemáticamente, esta
relación se expresa de la siguiente manera:
A=ε*c*l
Donde:
A es la absorbancia de la muestra.
ε (epsilon) es el coeficiente de extinción molar, que es una constante característica de la sustancia
absorbente a una longitud de onda específica.
c es la concentración de la sustancia en la muestra.
l es el camino óptico a través de la muestra (generalmente la longitud de la celda de cuarzo a través
de la cual pasa la luz).
El espectrofotómetro emite luz a través de una muestra y luego mide la cantidad de luz que se
absorbe en una longitud de onda específica. Al comparar la absorbancia medida con una curva de
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calibración que relaciona la absorbancia con la concentración conocida de la sustancia de interés,
es posible determinar la concentración desconocida de esa sustancia en la muestra.
Las técnicas analíticas miden normalmente una propiedad química y/o física del analito de interés,
propiedad que puede relacionarse con su concentración o en general con cualquier otro parámetro
a determinar. Así, en las técnicas volumétricas o titulaciones se mide el volumen de solución
valorante que reacciona con el analito, en las técnicas electroquímicas las diferencias de potencial
como las del pH o medidas de conductividad del medio en las conductivimetrías. En los métodos
espectrofotométricos se mide la absorción o la emisión de radiación con un dispositivo detector
que nos proporciona una respuesta en forma de señal eléctrica. Para transformar esta medida
instrumental en información química se procede a lo que se denomina calibración que es el proceso
mediante el que se establece la relación entre la propiedad medida y la concentración del analito.
CALIBRACIÓN
Todas las técnicas analíticas requieren un proceso de calibración que se efectúa mediante la
utilización de un compuesto químico patrón o estándar. En volumetría la calibración se efectúa
determinando la concentración de la solución valorante empleada para valorar un patrón químico.
Se establece la relación por cálculo matemático ya que los parámetros que intervienen, como la
estequiometria de la reacción volumétrica y el peso molecular del analito, son valores constantes.
En la mayoría de los métodos instrumentales la relación entre la propiedad medida y la
concentración del analito se debe hallar experimentalmente, ya que dicha relación se encuentra
muy influenciada por las condiciones de trabajo. La calibración se efectúa preparando una serie de
soluciones patrón del analito de las que se mide la propiedad correspondiente en unas condiciones
experimentales concretas. La representación gráfica de los datos permite obtener por lo general
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una recta de calibrado o de manera general la curva de calibrado como se la conocen, lo cual es
representada en la siguiente figura tomado de Alonso F., J. 2021.
No siempre la relación será lineal, sino que en algunas ocasiones la relación entre la propiedad
medida y la concentración no será lineal donde se obtiene una curva de calibrado, pero
normalmente por transformaciones matemáticas se consigue una relación lineal. En general no se
suele realizar con más de 6 puntos o medidas y se debe realizar repeticiones de las mediciones de
las concentraciones más bajas y las más altas del analito. De la recta de calibrado se pueden obtener
diferentes informaciones de gran interés analítico. En primer lugar, la sensibilidad de la técnica,
expresada por la pendiente de la recta S = ΔR/ΔC, que por definición es la capacidad de la técnica
para diferenciar entre concentraciones parecidas o también la capacidad para determinar pequeñas
concentraciones del analito. En la figura obtenida se observará que, cuanto mayor sea la pendiente,
mayor será la sensibilidad, ya que una misma concentración nos proporcionará mayor respuesta
instrumental. Además, se puede observar que, al disminuir la concentración, disminuye la
respuesta, llegándose a un valor mínimo de concentración por debajo del cual la respuesta es
siempre la misma. Esta concentración es el límite de detección (LD), ya que el instrumento
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proporciona una respuesta que ya no depende de la concentración. A partir de este dato se puede
determinar el límite de cuantificación (LC), que es la concentración mínima que se puede
determinar con garantía en cuanto a su exactitud. A partir de este valor se establece el intervalo
lineal donde se puede trabajar cuantitativamente con la técnica correspondiente. La metodología
de calibración se conoce como el método del patrón externo y es el más utilizado, pero no siempre
es posible obtener rectas de calibrado con este método. A veces la matriz de la muestra puede
influir en la respuesta instrumental (efecto matriz) y en este caso se debe utilizar el método de las
adiciones estándar, con patrones preparados con la misma cantidad de muestra a las que se
adicionan concentraciones conocidas del analito de interés. En otros casos, la respuesta
instrumental es poco reproducible por estar influida por unas condiciones experimentales no
controlables totalmente. Para solucionar este problema se puede utilizar el método del patrón
interno, en el que se utiliza un segundo compuesto patrón que con su relación minimiza la
variabilidad de la respuesta, muy utilizado en cromatografía líquida y de gases. Finalmente se debe
tener presente que una recta de calibrado y las medidas de las muestras deben efectuarse en las
mismas condiciones experimentales y que de forma general, no puede utilizarse una recta de
calibrado obtenida en otro momento o con otros reactivos o de distinta calidad o con otro equipo
ya que esto aumentaría el error de medida.
MEDIDA QUÍMICA
Una vez que se tiene la recta de calibrado se procede a la medida de la variable. La respuesta
instrumental obtenida se interpola en la recta de calibrado para hallar la concentración en la
alícuota de que se trate, luego habría que referirlo al peso o volumen de sustancia muestreada. Esto
será posible siempre que dicha concentración se halle dentro del intervalo lineal definido en la
calibración. Si se halla entre los límites de detección y de cuantificación podremos detectarla, pero
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no cuantificarla con la exactitud requerida. Si se halla por debajo del límite de detección significa
que no se puede detectar, aunque en ningún caso se puede asegurar que la concentración sea nula,
sino que el método utilizado no es suficientemente sensible para determinar la concentración del
analito en la muestra. En caso contrario, si la concentración se halla por encima del intervalo
establecido nunca se puede extrapolar fuera de este intervalo, sino que se debe diluir la muestra o
tomar una muestra menor o emplear pasos de celda más finos o incluso cambiar de método
analítico.
El fundamento incorporado en un analizador hematológico se basa en el análisis de las
características de la sangre, específicamente de los componentes celulares de la sangre, como los
glóbulos rojos, los glóbulos blancos y las plaquetas. El analizador hematológico es una herramienta
clínica utilizada para realizar un recuento completo de células sanguíneas y evaluar sus
características, lo que proporciona información importante sobre la salud del paciente. Aquí te
presento un resumen del fundamento principal de un analizador hematológico:
Recuento de células sanguíneas:
Glóbulos rojos (eritrocitos): El analizador hematológico utiliza un método que permite contar la
cantidad de glóbulos rojos presentes en una muestra de sangre. Esto es fundamental para evaluar
la capacidad del organismo para transportar oxígeno.
Glóbulos blancos (leucocitos): El analizador determina la cantidad de glóbulos blancos en la
sangre, lo que es crucial para evaluar el sistema inmunológico y detectar infecciones o trastornos
del sistema inmunológico.
Plaquetas (trombocitos): El analizador mide el número de plaquetas en la sangre, que son
esenciales para la coagulación sanguínea y la prevención de hemorragias excesivas.
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Medición de parámetros celulares:
Hemoglobina: El analizador mide la concentración de hemoglobina en los glóbulos rojos, lo que
proporciona información sobre la capacidad de transporte de oxígeno de la sangre.
Hematocrito: Este parámetro indica la proporción de glóbulos rojos en la sangre y se utiliza para
evaluar la viscosidad de la sangre y la concentración celular.
Volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentración de
hemoglobina corpuscular media (CHCM): Estos parámetros proporcionan información sobre el
tamaño y la concentración de hemoglobina en los glóbulos rojos, lo que puede ayudar a
diagnosticar diferentes tipos de anemia.
Evaluación morfológica:
Algunos analizadores hematológicos también pueden realizar una evaluación morfológica de las
células sanguíneas, identificando anomalías en su forma o tamaño. Esto puede ayudar a detectar
afecciones como anemia drepanocítica y trastornos de las células sanguíneas.
El citómetro de flujo es una herramienta analítica utilizada en biología y ciencias biomédicas para
analizar y clasificar células individuales o partículas en suspensión. Su fundamento se basa en la
medición de propiedades ópticas y físicas de las células o partículas a medida que pasan a través
de un flujo laminar en un tubo de cuarzo. A continuación, se describen los fundamentos principales
de un citómetro de flujo:
Detección de partículas:
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El citómetro de flujo hace pasar una muestra de células o partículas a través de una corriente líquida
continua en un tubo estrecho (también conocido como una celda de flujo). Las partículas
individuales en la muestra atraviesan un punto de enfoque donde se iluminan con un láser de alta
intensidad. La luz dispersada y absorbida por cada partícula se recoge y se convierte en señales
eléctricas.
Dispersión de luz:
El citómetro de flujo mide la dispersión de la luz en diferentes ángulos para obtener información
sobre el tamaño y la forma de las partículas.
La dispersión de luz hacia adelante (Forward Scatter, FSC) está relacionada con el tamaño de la
partícula.
La dispersión de luz lateral (Side Scatter, SSC) está relacionada con la composición interna y la
estructura de la partícula.
Fluorescencia:
Muchos citómetros de flujo también incorporan la capacidad de detectar la fluorescencia emitida
por las partículas marcadas con fluorocromos específicos.
Las partículas fluorescentes se excitan mediante un láser de longitud de onda adecuada, y la luz
fluorescente emitida se recoge en diferentes canales de detección según su longitud de onda.
Análisis de datos:
Los datos generados por el citómetro de flujo se recopilan y se analizan mediante software
especializado.
Las señales de dispersión de luz y fluorescencia se utilizan para determinar el tamaño, la
morfología, la complejidad y la expresión de marcadores específicos en las partículas analizadas.
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El análisis de datos permite clasificar y separar las partículas en diferentes poblaciones basadas en
sus propiedades físicas y ópticas.
EVALUACIÓN DE LOS RESULTADOS
En la evaluación de los resultados que se obtiene no es únicamente un valor, sino que lleva
asociado una incertidumbre. Esto resulta evidente por el hecho de que todas las técnicas de
medición empleadas tienen un margen de error y eso se puede mostrar al efectuar tres réplicas de
una misma muestra se obtiene tres resultados más o menos parecidos, pero no idénticos. Por ello
el resultado se expresa con un valor numérico obtenido normalmente a partir de la media de los
resultados (xm) y la incertidumbre que se calcula a partir de la desviación estándar de los resultados
(s) y de funciones de distribución estadísticas en función del número de replicados (N). Así se
obtiene el intervalo o los límites de confianza.
Resultado = Valor medio ± incertidumbre
µ = xm ± t · s / √N
Este intervalo de confianza nos indica con una probabilidad establecida por la distribución
estadística t (normalmente un 95%) que el resultado verdadero (µ) se halla dentro de él.
Lamentablemente, no se puede determinar el valor verdadero sino una buena aproximación con
más o menos incertidumbre lo cual es suficiente en la mayor parte de las situaciones. También se
debe tener en cuenta tiempo, costes de material referencia, réplicas, rigurosidad de la medida, etc.
para trabajar con más o menos incertidumbre. En las comparaciones de resultados en la mayoría
de casos se utilizan los valores sin tener en cuenta la incertidumbre asociada, pudiendo, con ello,
cometerse graves errores. Si dos valores diferentes tienen intervalos de confianza que se solapan,
hay cierta posibilidad de que no se trate de dos valores diferentes y pueda considerarse como el
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mismo valor. Todo esto se valora con el tratamiento estadístico de resultados. Sin embargo, para
no encarecer análisis y evitar gasto innecesario de tiempo se suelen realizar tres determinaciones
en la muestra.
Al aplicar un método analítico siempre surge la duda de si los resultados obtenidos pueden estar
sesgados por un error del método que no se controla, malas rutinas, materiales de referencia no
idóneos, deficiente mantenimiento o calibración de equipos, etc. Para ello existen ensayos
interlaboratorios que permiten determinar estos posibles errores y ver cómo se esta trabajando.
Para un determinado analito pueden existir diferentes métodos de referencia junto con una gran
cantidad de métodos de rutina y de cribado.
PROPIEDADES DE LOS MÉTODOS DE ANÁLISIS
Las propiedades más importantes de los métodos de análisis son:
Exactitud: Es el grado de concordancia o de cercanía entre el resultado obtenido y el valor aceptado
como verdadero. Las diferencias observadas son el error o sesgo. Esta propiedad está relacionada
con la trazabilidad de un resultado.
Precisión: Es el grado de concordancia entre los resultados obtenidos de forma repetitiva en una
misma muestra. Si las repeticiones se efectúan en las mismas condiciones (mismo laboratorio,
mismo equipo, mismo personal, etc.) se la conoce como repetibilidad y si las condiciones son
diferentes (distintos laboratorios) como reproducibilidad. Es una medida de la dispersión de los
valores y se expresa en forma de desviación estándar o de varianza. Esta propiedad está relacionada
con la incertidumbre del resultado.
Sensibilidad: Es la capacidad para discriminar entre resultados muy parecidos o también, como la
capacidad para determinar valores muy pequeños. Se obtiene a partir de la relación entre la
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respuesta analítica y la concentración (calibración). De esta propiedad se derivan los límites de
detección y de cuantificación del método. El primero es la concentración mínima de analito que
puede diferenciarse estadísticamente de un ensayo en blanco, mientras que la segunda es la
concentración mínima que puede ser determinada con una incertidumbre prefijada.
Selectividad: capacidad de un método para obtener resultados que dependan exclusivamente de la
concentración del analito. La selectividad de un método viene condicionada por la presencia de
interferencias. La máxima selectividad, sin interferencia alguna, da lugar a métodos específicos.
Robustez: capacidad de un método para aportar resultados poco influidos por pequeñas variaciones
de las condiciones experimentales. Está relacionado con la fiabilidad que es la capacidad de un
método para mantener la exactitud y la precisión a lo largo del tiempo.
VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS DE ANÁLISIS
En la validación de un método de análisis se realiza la caracterización del método a partir de la
determinación de sus propiedades analíticas principales: exactitud (trazabilidad), precisión
(incertidumbre), selectividad, intervalo de aplicación, linealidad, sensibilidad, límites de detección
y cuantificación, robustez y otras características propias. El proceso de validación de un método
consiste en establecer y verificar las prestaciones del método para obtener la información requerida
y la veracidad de esa información.
Por lo que, para la validación de un método se debe comprobar los siguientes aspectos:
Especificidad: verificación de la capacidad del método de estimar de forma unívoca los analitos
en presencia de los demás componentes.
Linealidad: verificación de la capacidad del método de obtener resultados, dentro de un rango
predefinido, que sean directamente proporcionales a la concentración del analito en la muestra.
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Exactitud: estimación de la proximidad entre los resultados obtenidos con el método aplicado y el
valor verdadero.
Precisión: expresión del grado de comparabilidad entre resultados individuales cuando el método
se lleva a cabo en las mismas condiciones experimentales.
Repetibilidad: verificación de las variaciones que se pueden generar en el interior de un mismo
laboratorio por un operador diferente y por una nueva sesión analítica efectuada en un día diferente.
Reproducibilidad: verificación de las variaciones de resultados generadas por varios laboratorios
distintos empleando un mismo método en condiciones diversas.
Robustez: medida de la capacidad del método de producir resultados estadísticamente invariables
después de pequeñas variaciones deliberadas aplicadas al método.
MATERIALES Y REACTIVOS
Material
 Gradillas
 Tubos de ensayo
 Micropipetas
 Pipeta de 5mL
 Pizeta
 Papel toalla
 Un vaso de precipitados de 250 ml
Reactivos
 Solución patrón o estándar
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 Agua destilada
Equipos
 Espectrofotómetro UV-VIS.
 Celdas de cuarzo, vidrio y plástico visible y UV
DESARROLLO
Procedimiento
A. FUNDAMENTOS DE EQUIPOS DE LABOARATORIO
El estudiante consultará sobre los fundamentos de los equipos de laboratorio de Análisis
Biológico. Procederá en dos etapas: primero identificará las características y los controles del
mismo y después procederá a realizar el análisis de los fundamentos incorporados en el equipo
para su funcionamiento.
B. USO DEL INSTRUMENTO
El estudiante consultará el manual o instructivo de operación del instrumento y procederá en
dos etapas: primero identificará los controles del mismo y después procederá a aplicar los pasos
para la puesta en marcha del instrumento.
Identificación de los controles
Procedimiento de operación
Con blanco de aire, procederá a registrar los espectros de absorción de las diferentes celdas
C. ANÁLISIS DE LAS ESPECIFICACIONES TÉCNICAS DE REACTIVOS
Inserto para la determinación de glucosa
Inserto para la determinación de colesterol
Inserto para la determinación de triglicéridos
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Inserto para la determinación de lipoproteínas
Inserto para la determinación de creatinina
Inserto para la determinación de bilirrubina total y directa
Inserto para la determinación de transaminasas
C. LINEARIDAD Y EXACTITUD ESPECTROFOTOMÉTRICAS
Linearidad espectrofotométrica:
1. Acondicionar la solución patrón o estándar a utilizar
2. Determinar las diluciones a trabajar y realizar los cálculos respectivos
3. Preparar las diluciones a partir de la solución patrón o estándar
4. Leer en el espectrofotómetro a la longitud de onda indicada.
5. Con los datos obtenidos elaborar una gráfica absorbancia contra concentración. Se debe
obtener linearidad.
Exactitud espectrofotométrica:
Con los valores de concentración de las soluciones anteriores, la absortividad de la sustancia
y el camino óptico de 1 cm, construir una tabla para calcular la absorbancia real para cada
solución y restar este valor a la lectura obtenida, para visualizar las desviaciones existentes.
D. ELABORACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN
Paso 1: Preparación de los patrones
A partir de la solución estándar se prepara por dilución con agua destilada una serie de
soluciones del analito que cubran un intervalo adecuado de concentraciones, y se mide la
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señal analítica proporcionada por los mismos. Las disoluciones del analito son
concentraciones conocidas y crecientes.
Paso 2: Obtención de la relación señal-concentración
Se traza un gráfico con las señales frente a la concentración de analito y se calcula la recta
que "mejor" se ajusta a los datos mediante un ajuste por mínimos cuadrados. De esta forma
se obtiene la pendiente (b) y la ordenada (a) en el origen que definen la recta.
En la actualidad las calculadoras científicas realizan el ajuste por mínimos cuadrados y
también los programas informáticos como Excel.
Paso 3: Uso de la curva de calibrado
Se mide la señal analítica para las muestras desconocidas y se interpola en la recta de
calibrado para obtener valores de concentración de analito.
RESULTADOS
CONCLUSIÓN
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CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son los métodos y técnicas empleadas en el análisis clínico de los analitos de interés?
2. ¿Cuáles son los fundamentos en los que se basan los equipos de análisis utilizados en análisis
biológico
3. ¿Qué se necesita para la validación de un método de análisis?
4. Realice el esquema de funcionamiento de un espectrofotómetro UV-Visible.
5. Que es un material de referencia
6. ¿Cuáles son las características de un material de referencia certificado?
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PRÁCTICA 2:
CONTROL DE CALIDAD Y SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
COMPETENCIAS
Comprende la importancia del control de calidad y la seguridad en el laboratorio.
Interpreta las diversas normas técnicas nacionales e internacionales para la calidad y la seguridad
en el laboratorio.
INTRODUCCION
El Laboratorio de análisis proporciona datos cualitativos y cuantitativos sobre especímenes
biológicos como ayuda a la prevención, diagnóstico y tratamiento de enfermedades humanas. El
aseguramiento de la calidad de las investigaciones del laboratorio implica todo un conjunto de
medidas encaminadas a lograr una adecuada confiabilidad de los resultados. Todos los laboratorios
clínicos deben disponer de un sistema para el aseguramiento de la calidad. El Sistema para el
control de la calidad interna de los laboratorios clínicos, refleja objetivamente las variaciones en
los resultados de las determinaciones, permite conocer realmente como está funcionando el
laboratorio y posibilita tomar decisiones oportunas.
FUNDAMENTO
2.1 CARACTERISTICAS PRINCIPALES
 Contribuir a aumentar la calidad de las determinaciones realizadas.
 Aplicar criterios de calidad en cada sección para que satisfagan la demanda de la calidad
de los procedimientos.
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 Facilitar la toma de decisiones mediante la aplicación de las multi-reglas de Westgard para
el control interno de la calidad.
 Posibilita el procesamiento del control de calidad interno en todas las secciones o
dependencias de su laboratorio, aplicando controles de repetibilidad y/o reproducibilidad
en cada una de las determinaciones.
 Permite procesar varios controladores para cada una de las determinaciones, decidiendo el
usuario que procesamiento gráfico realizar (Levey-Jennings, CUSUM, etc.), además le
alerta de acuerdo a las Multireglas de Westgard durante la captura de los datos.
El control de calidad se divide en: control de calidad interno y control de calidad externo.
2.2. CONTROL INTERNO (intralaboratorio). Actuaciones encaminadas a evaluar diariamente la
fiabilidad de las determinaciones analíticas rutinarias.
Tres fases:
2.2.1 Fase preanalítica
 Correcto mantenimiento de los aparatos.
 Métodos analíticos adecuados (revisión y puesta al día).
 Protocolos Normalizados de Trabajo:
 Buena gestión: Planificación y establecimiento de normas de decisión.
2.2.2 Fase analítica
 Uso de líquidos de referencia
1) Pool de sueros o plasmas elaborados por el propio laboratorio:
 Valores de analitos dentro de la normalidad, pero de concentración desconocida.
 Útiles para valorar la precisión de los resultados
2) Controles comerciales: Tratados de forma que se conocen sus concentraciones (ej. Seriscan).
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 Pueden ser normales o patológicos.
 Se intercalan diariamente con las muestras
 Sirven para verificar la precisión y la exactitud.
 Realización de gráficas de control
3) Calibradores
 Sueros o plasmas o líquidos de viscosidad y características similares al plasma con
concentración conocida de algún/os analitos.
 Se usan para realizar curvas de calibración o para calibrar aparatos de medida.
4) Patrones o Estándares
 Un analito disuelto en agua o tampón, en concentración conocida.
 Uso por ejemplo en espectrofotometría de punto final (uno para cada técnica).
2.2.3 Fase postanalítica
 Evaluación de los resultados
 Corrección y archivo de los resultados.
2.3 CONTROL EXTERNO (Inter laboratorios)
2.3.1 Participación en pruebas de Inter comparación.
 Contrastar los valores obtenidos en un laboratorio con los de otros laboratorios o uno de
referencia.
 Una entidad proporciona un control igual a todos los laboratorios participantes (pruebas
ciegas) y contrasta luego los resultados mediante procesamiento estadístico.
1.3.2 Certificación y acreditación.
 Una organización independiente garantiza por escrito que un laboratorio posee un sistema
interno de gestión de calidad.
19
 Reconocimiento por escrito de que un laboratorio es competente para realizar determinados
tipos de análisis.
 Es temporal y se debe renovar periódicamente.
 En el Perú la entidad de acreditación es el INACAL(Instituto Nacional de Calidad).
4.1 BIOSEGURIDAD
Son todos los procedimientos y acciones que garantizan una mejor calidad de vida, tanto del
profesional, del paciente y del medio ambiente.
4.2 CONSIDERACIONES PARA SU PROTECCIÓN PERSONAL
1. Todas las muestras de especímenes biológicos deben considerarse potencialmente
infecciosas.
2. Vacunarse contra los principales agentes infecciosos.
3. Procurar no producir "salpicaduras" con la muestra obtenida. Debe limpiarse y desinfectarse
cualquier superficie contaminada por algún espécimen biológico.
4. Lavarse las manos correctamente, después de haber tenido contacto con cada paciente y al
concluir cualquier procedimiento.
5. No deben ingerirse comidas, bebidas, goma de mascar o fumar durante los diferentes
procedimientos en el Laboratorio.
6. Vigile que los elementos de trabajo estén en perfectas condiciones físicas. Algún elemento en
mal estado, podría causarle una herida.
4.3 ESTERILIZACIÓN
Proceso mediante el cual se eliminan todas las formas de vida de los microorganismos de un objeto
o de una sustancia para evitar su reproducción.
ASEPSIA: Libre de microorganismos.
20
4.3.1 MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN
Comprende todos los procedimientos físicos, mecánicos y preferentemente químicos, que se
emplean para destruir gérmenes patógenos. A través de esta, los materiales quirúrgicos y la piel
del enfermo alcanzan un estado de desinfección que evita la contaminación operatoria. Hay varias
formas de esterilizar como:
a) MÉTODOS QUÍMICOS
Estos métodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.
Hipoclorito de Sodio: Es el más utilizado por su fácil adquisición y por su efectividad en la
desinfección. Vida media 20 minutos.
Óxido de etileno: Destruye todos los microorganismos incluso virus.
Aldehídos: Son agentes alquilantes que actúan sobre las proteínas. Estos compuestos destruyen las
esporas.
Glutaraldehído: Este método tiene la ventaja de ser rápido y ser el único esterilizante efectivo frío.
Formaldehído: Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 horas.
Gas-plasma de Peróxido de Hidrógeno: Es proceso de esterilización a baja temperatura la cual
consta en la transmisión de peróxido de hidrógeno en fase plasma.
Alcohol: Esteriliza superficies, pero se evapora fácilmente.
b) MÉTODOS FÍSICOS
Calor: La utilización de este método y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposición
y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción del
calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de las membranas
y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.
21
Calor Húmedo: El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas.
Autoclave
Se realiza la esterilización por el vapor de agua a presión. El modelo más usado es el de
Chamberland. Esteriliza a 121º C, 15Lb de presión, por 20 minutos.
Calor seco: El calor seco produce desecación de la célula, es esto tóxico por niveles elevados de
electrolitos, fusión de membranas.
Estufas-Hornos Doble cámara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad
principal y por el espacio entre ambas cámaras, a temperatura de 170º C para el instrumental
metálico y a 140º C para el contenido de los tambores.
Radiaciones: Su acción depende de:
 El tipo de radiación
 El tiempo de exposición
 La dosis
Rayos Ultravioletas: Afectan a las moléculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente
penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilización en quirófanos.
Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energía atómica.
Filtración: Se usan membranas filtrantes con poros de un tamaño determinado. El tamaño del poro
dependerá del uso al que se va a someter la muestra.
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Toda muestra de sangre y cualquier otro tipo de muestra biológica debe manipularse con extremo
cuidado para evitar la contaminación del analista y del área de trabajo. Por lo cual, se deben
emplear guantes durante todo el proceso y algún otro tipo de protección como, gafas o gabinetes
22
de seguridad cuando el proceso lo requiera; así como seguir en todo momento las normas de
seguridad del laboratorio.
1. Vestimenta externa personal adecuada: bata. Esta debe de ser de material impermeable,
tener mangas largas y permanecer abotonada en todo momento.
2. Los guantes deben utilizarse cuando exista la posibilidad de contacto con sangre o
líquidos corporales y cuando se lleva a cabo una venopunción o una punción del dedo.
3. Los protectores de los ojos deben utilizarse cuando haya posibilidades de lloviznas de
aerosol, salpicaduras o pulverizaciones en las mucosas (boca, ojos y nariz). Ejemplos:
eliminación de la tapa de los tubos de muestra, trabajos en el contador celular y
centrifugado de las muestras.
4. Cuando los equipos utilizados para procesar las muestras se presentan con contaminación
visible, deben desinfectarse.
5. El material punzocortante contaminado generado durante las extracciones de sangre
(incluyen, pero no están limitados a agujas, hojas de bisturí, lancetas, pipetas, jeringas
con agujas, portaobjetos), deben colocarse en recipientes resistentes a la perforación que
se rotula de manera adecuada con el símbolo universal Biopeligrosos o un recipiente rojo
que se adhiera a las normas. El recipiente debe ser hermético.
6. Para el manejo de material contaminado: aplicadores, palillos contaminados, torundas,
sangre total, coágulos, plasma, sueros, microhematocrito. Inactivar en frasco de boca
ancha con solución de Hipoclorito de sodio al 1 % al menos por 30 minutos. Decantar y
desechar los elementos sólidos en bolsa roja. Para el manejo de material contaminado:
tubos, pipetas y material de vidrio. Inactivar con Hipoclorito de sodio al 1 % al menos
23
30n minutos. Esterilizar en la autoclave a 121°C por 30 minutos. Lavar con solución
jabonosa y enjuagar.
7. Para el manejo de material contaminado: hematocrito, cámara de Neubauer, pipetas de
blancos, rojos y hemoglobina. Inactivar con Hipoclorito de sodio al 1 % al menos 30
minutos. Lavar y enjuagar muy bien.
8. Para el manejo de material contaminado: gorros, guantes y tapabocas. Desechar en bolsa
roja, llevar al sitio de almacenamiento intermedio.
Nota: Los puntos de Bioseguridad en el Laboratorio se deben de seguir de manera sistemática
en cada una de las prácticas que se realizarán en Hematología y que siempre deberán de
seguirse aquí y en el futuro de sus procedimientos de Laboratorio.
CONTROL DE CALIDAD DE LOS ANÁLISIS BIOLÓGICOS
CONTROL DE CALIDAD EN QUÍMICA CLÍNICA
- Llevar un registro diario del control de temperatura de las refrigeradoras, baños de María y otros.
- Realizar la calibración del espectrofotómetro cada vez que se cambie la fuente de luz, reactivos
y establecer los tiempos por lo menos cada mes.
- Realizar el registro diario de todas las lecturas de estándares y sueros controles internos, que se
llevaran en cada corrida.
24
- La separación del suero o plasma de los elementos formes no debe ser mayor de dos horas una
vez obtenida la muestra. Si el suero o plasma no se procesan inmediatamente una vez separados
deben refrigerarse.
- Observar de manera diaria los reactivos en busca de turbidez o cambio de color, ya que estos
indican deterioro y se recomienda no utilizar.
- Los laboratorios de acuerdo a su nivel de atención deben participar en el control de calidad
externo de química clínica que le envíe el nivel superior cada año.
CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGÍA
- Evaluar los resultados de hemoglobina cuando estas no se correlacionen con el valor del
hematocrito.
- Determinar los tiempos de coloración de los frotis con los diferentes colorantes utilizados,
siempre que se cambie el lote de colorante.
externo de hematología que le envíe el nivel superior cada año.
CONTROL DE CALIDAD EN INMUNOLOGÍA
- Seguir rigurosamente las instrucciones del fabricante para la preparación de los reactivos.
- Acondicionar para que las muestras y reactivos lleguen a temperatura ambiente antes de iniciar
los procedimientos.
- Evitar la combinación de reactivos de diferentes Kits.
- Llevar un registro diario del control de temperatura de las refrigeradoras, baños de María y otros.
- Procesar los controles de los fabricantes comerciales y el control interno en cada análisis de
muestras. Elaborar un protocolo de trabajo por cada tiraje de muestras.
25
externo de inmunología que le envíe el nivel superior cada año.
CONTROL DE CALIDAD EN MICROBIOLOGÍA
Consideraciones en la toma de muestra que se deben controlar:
- Tomar la muestra representativa del sitio de proceso infeccioso.
- Evitar la contaminara la muestra.
- Coleccionar el volumen adecuado de la muestra y en el frasco apropiado.
En la coloración se deben controlar los siguientes aspectos:
- El control de calidad de los colorantes se debe realizar con cada nuevo lote (control de calidad
ejercido por el Laboratorio de nivel superior).
- Tener especial cuidado con el alcohol – acetona, pues de este depende que la coloración sea
excesiva o débil.
- Controlar la no contaminación de colorantes como la safranina o fucsina básica, los cuales se
pueden contaminar fácilmente.
- Controlar la fijación de la preparación pues el exceso de calor produce daño en la pared celular
de las bacterias que pueden afectar, la retención de los colorantes.
CONTROL DE CALIDAD EN COPROLOGÍA
- El tiempo transcurrido entre la toma de la muestra y la observación microscópica no debe ser
mayor a tres horas para observar formas activas.
- Utilizar frascos transparentes que sean adecuados y limpios.
- Efectuar el control de calidad del lugol y solución salina 0.9%.
- Todos los laboratorios deben enviar al laboratorio de nivel superior para control de calidad el
10% de láminas realizadas.
26
externo que le envíe el nivel superior cada año.
4.2 CONTROL DE CALIDAD EN URIANÁLISIS
- Correlacionar de lo observado en el examen químico y microscópico de los siguientes
parámetros:
a) Nitritos positivos con bacterias presentes en el sedimento.
b) Leucocitos por µL con leucocitos presentes en el sedimento.
- Correlacionar la presencia de leucocitos con la presencia de bacterias observadas en el sedimento
urinario.
- El tiempo transcurrido entre la toma de la muestra y el procesamiento de la misma debe ser
idealmente no mayor de dos horas.
ANALISIS DE NORMAS TECNICAS DE LABORATORIO
Las normas técnicas que se analizaran se encuentra en el anexo de la guía de prácticas.
 SISTEMAS DE GESTIÓN DE LA CALIDAD — REQUISITOS ISO 9001
 NORMA TÉCNICA NTP-ISO/IEC 17025 PERUANA 2017
 LABORATORIOS CLÍNICOS REQUISITOS PARTICULARES PARA LA CALIDAD
Y LA COMPETENCIA (ISO 15189:2012)
 GUÍA DE IMPLEMENTACIÓN DE SISTEMAS DE GESTIÓN DE CALIDAD EN
PRODUCTOS SANITARIOS ISO 13485:2016
CUESTIONARIO
1. Que significa reproductibilidad, exactitud, precisión ponga ejemplos
27
2. Qué diferencia hay entre calibrador, multicalibrador y control, poner ejemplos
3. Porque los controles de hematología se tienen que refrigerar y solo tienen vigencia un mes
28

Guia de Practicas Análisis Biológico 2023 v1

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN DE AREQUIPA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. Blgo. EDGAR QUISPE CHIPANA

GRUPO DE PRÁCTICAS: ……………………………………………………

inmunitario, en el transporte de oxígeno, en el suministro de nutrientes a los órganos y en el

la cuantificación de los diversos componentes presentes y la observación extrayendo una pequeña

El propósito de esta Guía de Prácticas de Análisis Biológico es proporcionar a los estudiantes

permitido comprender mejor los procesos fisiológicos normales y la fisiopatología de las

Biológico será muy diferente respecto de lo que conocemos ahora.

desarrollar su manualidad. Así mismo es indispensable que aprenda a observar, razonar y

La Evaluación en el Laboratorio de Análisis Biológico de la Carrera de Biología consta de las

- Asistencia mínima del 80 %

- Informe de resultados de laboratorio

exposiciones se presentarán en el tiempo requerido con apoyo de un cañón, y se contemplara los

- Fundamento del método

- Precauciones del trabajo

los siguientes puntos considerando las Buenas prácticas de Laboratorio.

1. Usar siempre el mandil abotonada durante el desarrollo las prácticas.

2. Formar grupos de 2 o 3 personas.

4. Contar con el material completo previo a las prácticas.

5. Rotular todas las soluciones y disoluciones.

disminuir los errores de trabajo.

7. Cuidar los materiales, reactivos e instrumentos empleados.

final del trabajo.

9. Permanecer en el laboratorio durante toda la realización del trabajo experimental y llevar a

desarrollo de las prácticas.

Informe de Resultados de Laboratorio

1. Entregar de manera individual y personalmente antes de la siguiente práctica, después de

ese tiempo, ya no se recibirán informes.

2. Los informes de resultados no entregados o no recibidos, según sea el caso tendrán la

consideraciones para su realización desde fundamento hasta la interpretación de los resultados.

Constará de 3 exámenes prácticos antes de la semana de exámenes teóricos. Para promediarse

deberán de tener todos los exámenes una calificación aprobatoria.

2. Los exámenes prácticos no tiene recuperación ni sustitutorio.

REGLAMENTO PARA EL LABORATORIO DE ANÁLISIS BIOLÓGICO

1. Es obligación usar mandil abotonado durante el desarrollo de las prácticas.

2. Contar con su guía de prácticas y apuntes, exclusivo para el laboratorio.

3. Prohibido fumar y prohibido ingerir alimentos.

6. Al término de cada práctica limpiar todo el equipo instrumental utilizado y guardarlo en el

área asignada para ello.

CRITERIOS DE EVALUACIÓN .................................................................................................. v

REGLAMENTO PARA EL LABORATORIO DE ANÁLISIS BIOLÓGICO .......................... viii

FUNDAMENTOS DE EQUIPOS DE LABORATORIO, ANALISIS Y ESPECIFICACIONES

TÉCNICAS DE REACTIVOS ....................................................................................................... 1

CONTROL DE CALIDAD Y SEGURIDAD EN EL LABORATORIO .................................... 17

PRÁCTICA 3: ............................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

DETERMINACIÓN DE GLUCOSA Y CURVA DE TOLERANCIA¡Error! Marcador no

PRÁCTICA 4: ............................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA ................................... ¡Error! Marcador no definido.

PRÁCTICA 5: ............................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

COLESTEROL TOTAL, TRIGLICERIDOS Y LIPOPROTEINAS¡Error! Marcador no

PRÁCTICA 6: ............................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

METODO COLORIMETRICO PARA LA DETERMINACION DE CALCIO Y HIERRO EN

SUERO ......................................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

PRÁCTICA 7: ............................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

DETERMINACION DE UREA, ACIDO URICO Y CREATININA¡Error! Marcador no

PRÁCTICA 8: ............................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y TRANSAMINASAS¡Error! Marcador no

PRÁCTICA 9: ............................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

ANÁLISIS HEMATOLÓGICO ................................................... ¡Error! Marcador no definido.

PRÁCTICA 10: ............................................................................. ¡Error! Marcador no definido.

ANÁLISIS INMUNOLÓGICOS.................................................. ¡Error! Marcador no definido.

PRÁCTICA 11: ............................................................................. ¡Error! Marcador no definido.