Cultivo de Las Bacterias: Lic. Yadira Parra Gonz Ález, MSC

Cultivo de las Bacterias
Material elaborado por:

Lic. Yadira Parra González, MSc.
Campus Universitario
San Lorenzo, Paraguay
Universidad Nacional de Asunción
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Educación a Distancia
Índice
1. Medio de Cultivo .............................................................................................................................4

2. Generalidades..................................................................................................................................4
2.1. Tipos de Medios de Cultivos ....................................................................................................4
2.2. Exigencias Nutritivas ................................................................................................................5
2.3. El Agar ......................................................................................................................................6
2.4. Clasificación de Medios de Cultivos .........................................................................................6
2.4.1. Medios de Cultivos Selectivos .....................................................................................6
2.4.2. Medios de cultivo Diferenciales ...................................................................................7
2.4.3. Medios de cultivo Selectivo-Diferenciales ...................................................................7
2.4.4. Medios de cultivo de mantenimiento..........................................................................7
2.4.5. Medios de cultivo de Generales ..................................................................................7
2.4.6. Medios de cultivo de Enriquecimiento ........................................................................7
2.5. Preparación de Medios de Cultivo ...........................................................................................7
2.6. Mantenimiento y preservación de medios de cultivos y cultivos ............................................8
2.7. Condiciones necesarias para el crecimiento bacteriano .........................................................8
2.7.1. Generalidades ..............................................................................................................8
2.7.2. Temperatura ................................................................................................................8
2.8. Clasificación de las bacterias según la temperatura de crecimiento .......................................9
2.9. Necesidades de Solutos ...........................................................................................................9
2.10. Según la concentración de Azúcar y Sal .............................................................................10
2.11. Según la necesidad de Oxígeno .........................................................................................10
2.11.1. Aerobias ó Aeróbicas .................................................................................................11
2.11.2. Microaerófilos ...........................................................................................................11
2.11.3. Anaerobios.................................................................................................................11
2.12. Acidez y Alcalinidad ...........................................................................................................12
2.13. Exigencia del pH .................................................................................................................12
2.14. Elección de medios de Cultivo ...........................................................................................12
3. Métodos de Siembra .....................................................................................................................12
3.1. Generalidades........................................................................................................................12
3.2. Aislamiento de microorganismos en cultivos puros ..............................................................13
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3.3. Métodos de Siembra .............................................................................................................13

3.4. Métodos de Aislamiento .......................................................................................................13
3.4.1. Uso del Asa de siembra..............................................................................................14
3.4.2. Siembra por estría en Placas......................................................................................14
3.4.3. Tipos principales de aislamiento por agotamiento por estrías ..................................14
3.4.4. Técnica de los 4 cuadrantes .......................................................................................15
3.5. Vertido y extensión en Placa .................................................................................................15
3.6. Métodos de siembra en tubos ...............................................................................................15
3.6.1. Método de Siembra por diluciones seriadas en placas Petrifilm ...............................16
3.6.2. Método de Siembra por diluciones seriadas en placas a profundidad ......................16
3.6.3. Técnica de Filtración por membrana .........................................................................16
4. Características de las colonias Bacterianas ...................................................................................17
4.1. Generalidades........................................................................................................................17
4.2. Características .......................................................................................................................17
5. Crecimiento y reproducción Bacteriana ........................................................................................18
5.1. Generalidades........................................................................................................................18
5.2. Curva de proliferación Bacteriana .........................................................................................19
5.3. Curva de crecimiento.............................................................................................................19
5.3.1. La curva típica de proliferación posee 4 etapas.........................................................19
5.3.2. Etapa de Latencia.......................................................................................................19
5.3.3. Etapa Exponencial......................................................................................................20
5.3.4. Etapa Estacionaria .....................................................................................................20
5.3.5. Etapa de declinación o muerte ..................................................................................21
6. Recuento Bacteriano .....................................................................................................................22
6.1. Medidas directas del crecimiento bacteriano .......................................................................22
6.2. Medición del Número de células ...........................................................................................22
6.3. Recuento en placas Sembrados por Diluciones seriadas .......................................................22
Bibliografía ............................................................................................................................................22
1. Medio de Cultivo
Es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las
condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Uno de los componentes más
importantes para la identificación de los microorganismos es observar su crecimientoen
sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.
2. Generalidades
Para cada bacteria a ser cultivada para cualquier propósito, es necesario proveer el ambiente
bioquímico y biofísico apropiado. El ambiente bioquímico (nutricional) se hace disponible
como medio de cultivo.
Existe una gran variedad y tipos de medios de cultivo con diferentes propósitos y utilizaciones.
Estos medios de cultivo son empleados para el aislamiento y mantenimientode cultivos
puros de bacterias; también son utilizados para la identificación de las bacterias de acuerdo a
sus propiedades bioquímicas y fisiológicas. El modo en que las bacterias son cultivadas y el
propósito de los medios de cultivos varían ampliamente.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir
una serie de condiciones que son:
§ Temperatura
§ Grado de Humedad
§ Presión de oxígeno adecuada
§ Grado correcto de acidez y alcalinidad
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios,

además debe estar exento de todo tipo de microorganismos contaminantes.
2.1. Tipos de Medios de Cultivos
Los medios de cultivo se clasifican en dos:
§ Medios de cultivo Sólido
Se preparan también a partir de los medios líquidos, agregando a éstos Agar un agente
solidificante en una proporción mayor.
§ Medios de cultivo Líquido
Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio
líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de
carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de
una suspensión.
§ Medios de cultivo Semi-Sólido
Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos Agar un agente solidificante en
una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación
de la movilidad de las bacterias.
2.2. Exigencias Nutritivas
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en

composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios
de cultivo es una infusión de extractos de carne y peptona a las que se les añade otros
ingredientes.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento

como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se
adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y
para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos.
El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos

menos resistentes. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar
la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras.
2.3. El Agar
El Agar es un hidrocoloide derivado de algas rojas y por sus propiedades físicas únicas (no
puede ser metabolizado por las bacterias) es el agente gélido más utilizado para medios de
cultivo.
Por lo tanto, el agar es un medio relativamente inerte (geliza), mantiene los nutrientes que
se encuentran en la solución acuosa. Se licua completamente a la temperatura del agua
hirviendo y se solidifica al enfriarse (40°C).
2.4. Clasificación de Medios de Cultivos
Los medios de cultivo se utilizan para diferentes propósitos como Recuento o Enumeración,
aislamiento de ciertos tipos de bacterias, mantenimiento de los cultivos para uso posterior y
facilitar así el reconocimiento de algún tipo de bacteria en particular.
Una gran cantidad de medios se han desarrollado y se han clasificado en base a su uso o
función en:
§ Medios de cultivos generales

§ Medios de cultivos selectivos
§ Medios de cultivos diferenciales
§ Medios de cultivos selectivo-diferenciales
§ Medios de cultivos de mantenimiento
2.4.1. Medios de Cultivos Selectivos
Son utilizados cuando se requiere aislar algún tipo de bacteria en particular, para ello se
diseñaron medios que favorecen el crecimiento de bacterias de interés y que inhiben al resto.
Algunas de las sustancias para lograr esto son: antibióticos, concentraciones de sal o
agregando alguna determinada sustancia que solamente le permita crecer al tipo que se
quiera aislar. Ejemplos: Agar sal y Agar celulosa.
2.4.2. Medios de cultivo Diferenciales
Son los que permiten distinguir diferencias entre varias especies y hasta géneros bacterianos
a nivel metabólico. Para ello se agrega al medio de cultivo algunas sustancias que pueden ser
metabolizadas solamente por las bacterias que se quieran aislar. Ej.: la lactosa.
2.4.3. Medios de cultivo Selectivo-Diferenciales
Son medios que además de seleccionar tipos de bacterias, se logra también información sobre
las características metabólicas. Ejemplo: Agar Manitol –Sal + 1 colorante Rojo fenol.
2.4.4. Medios de cultivo de mantenimiento
Son de variada composición y permite mantener la viabilidad y características fisiológicas de

un determinado cultivo bacteriano.
2.4.5. Medios de cultivo de Generales
Son de variada composición y permite el crecimiento con características fisiológicas de una

gran cantidad de especies bacterianas. Son aquellos que poseen los componentes mínimos
para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos
especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que resulta
de la adición de agar al caldo nutritivo.
2.4.6. Medios de cultivo de Enriquecimiento
Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de
factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este
enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero,
leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores.
2.5. Preparación de Medios de Cultivo
Para la preparación de los medios de cultivos es necesario guiarse en la descripción del modo
de preparación del fabricante que viene en la etiqueta del medio de cultivo. Es
importante seguir específicamente la forma y condiciones de la preparación para lograr la

eficacia del medio de cultivo.
2.6. Mantenimiento y preservación de medios de cultivos y cultivos
Una vez preparado y esterilizados los medios de cultivos, pueden ser almacenados en
heladeras hasta un periodo de 3 meses a una temperatura constante de 4°C.
Para la preservación de cultivos bacterianos es recomendable mantenerlos en heladera a 4°C

por un periodo de no más de 7 días. En caso de que se requiera preservar el cultivo bacteriano
por un largo periodo de tiempo, es recomendable traspasar el cultivo en crioviales y
mantenerlos en Ultracongeladores a -40 hasta -80°C.
2.7. Condiciones necesarias para el crecimiento bacteriano
2.7.1. Generalidades
Las bacterias requieren de ciertas condiciones para su crecimiento. Sus actividades se ven
afectadas tanto por condiciones físicas y químicas, como la temperatura, la presencia o
ausencia de O2 y el pH. Estos factores son muy importantes al considerar el crecimiento de
la mayoría de las bacterias en cultivos in vitro.
2.7.2. Temperatura
Es uno de los factores de mayor influencia ya sea en el crecimiento como en la supervivencia

de los microorganismos. Cada especie bacteriana presenta una temperatura mínima, óptima
y máxima al crecimiento.
§ La mínima se refiere a la Tº mínima necesaria para que pueda crecer la bacteria;

§ La óptima es la Tº en la que crece más rápido.
§ La máxima es la que más allá de esa Tº le resulta difícil a la bacteria crecer.
2.8. Clasificación de las bacterias según la temperatura de crecimiento
Psicrófilas: Rango optimo +- 15 ºC (mínima menor de 0ºC y máxima +- 20ºC). Mar a grandes
profundidades y continentes con T º polares.
Sicotrópicas: También pueden crecer a T º bajas pero con un rango optimo +- 30 ºC. Suelo,
lagos y ríos con climas templados.
Mesófilas: Crecen mejor entre los 25 a 40 ºC (óptima); su T º máxima sería de 45 ºC. Son las
que más abundan en la naturaleza.
Termofílicas: Rango optimo superiores a 45 ºC. En fuentes termales y otros ambientes con T
º elevadas ej. Zonas volcánicas.
2.9. Necesidades de Solutos
Se refiere a la concentración de moléculas pequeñas como iones provenientes de azucares y

sales en el ambiente en que se encuentre la bacteria.
Aunque toleran cierta variación, cuando se los coloca en medios con presión osmótica
elevadas se inhiben debido a un fenómeno denominado Plasmólisis que es la perdida de agua
en la célula provocando daños irreversibles en la membrana celular.
La concentración de solutos está estrechamente relacionada con la cantidad de agua

disponible para el crecimiento debido a que las moléculas e iones fijan agua de la disolución
por lo que un aumento en la concentración de estas sustancias disueltas equivale a una
deshidratación.
2.10. Según la concentración de Azúcar y Sal
Existen organismos que pueden desarrollarse en medios de cultivo de alta osmolaridad y

pueden clasificarse en:
Osmófilos: que pueden crecer en soluciones concentradas de azucares
Halófilos: los que pueden tolerar altas concentraciones de sal.
Halófilas facultativas: toleran hasta un 2 % de sales
2.11. Según la necesidad de Oxígeno
Algunas bacterias requieren la presencia del O2, mientras otras pueden desarrollarse en
ausencia de este gas.
De acuerdo al comportamiento que presenten frente al O2 se pueden distinguir 4 grupos:
Aerobias o aeróbicas: que requieren del O2
Anaeróbicas: ausencia del O2
Facultativas: presencia/ausencia del O2
Microaerofílicas: presión parcial del O2, inferior a la del aire.
2.11.1. Aerobias ó Aeróbicas
Requieren oxígeno, aceptor final de hidrógeno. Son Aerobios estrictos: 21% de oxigeno
(Pseudomonas, Mycobacterium). Producen la formación de H2O y CO2. Realizan la producción
de enzima Catalasa: desdoblamiento del Peróxido de hidrógeno (H2O2) en H2O yoxígeno. Se
realiza la prueba de catalasa para diferenciar microorganismos (Staphylococcus de
Streptococcus)
2.11.2. Microaerófilos
Requieren bajas concentraciones 5 % de O2 para crecer (Campylobacter, Helycobacter).

Utilizan el O2 como fuente de energía pero a concentraciones < 15 %. La cavidad oral presenta
todas estas variantes. Las especies capnófilas (5-10 % CO2) aumentan en personas con
alteraciones periodontales.
2.11.3. Anaerobios
Viven en ausencia de oxígeno atmosférico. Aceptor final de hidrógeno: compuesto inorgánico

(NO3 o SO4). Fermentación: la fuente de carbono provee energía, el donador de hidrógeno y
el aceptor final (un compuesto orgánico como ácidos o alcoholes). Microorganismos orales
muy frecuentes.
Anaerobios obligados: no utilizan O2 (Fusobacterium, Clostridium).
Anaerobios moderados: toleran 2-8 % de O2.
Anaerobios aerotolerantes: 0,5 % de oxigeno (Actinomyces; Propionibacterium).
Anaerobios facultativos: crecen con o sin oxigeno (Streptococus; Enterobacterias).
Capnofilos: crecen con 5-10 % de CO2 (Neisseria, Haemophilus).
2.12. Acidez y Alcalinidad
La mayoría de las bacterias toleran variaciones de pH entre 5-9 aunque se han encontrado
casos en que pueden soportar un pH de 11. La regulación del pH en los medios de cultivos se
realiza con Buffers. NaOH 1N para levantar el pH y HCl 1N para bajar el pH.
§ La mayoría crece entre el pH 4 y 9 (ÓPTIMO 7)

§ Los Hongos a pH 4,5 – 6
§ Bacterias acidófilas (Thiobacillus)
§ Bacterias alcalófilas (Bacillus)
2.13. Exigencia del pH
Aunque presenten un rango de tolerancias para las variaciones del pH, los productos de su
metabolismo pueden alterar el pH de manera tal de que inhiba el desarrollo del cultivo. De
hecho algunas bacterias producen sustancias alcalinas y muchas otras producen ácidos como
para poder modificar el nivel del pH. El pH regula el desarrollo bacteriano, y las bacterias se
desarrollan con ciertas preferencias en medios neutros o ligeramente alcalinos (6,5-7,5 de pH).
2.14. Elección de medios de Cultivo
Los microorganismos presentan diferentes rangos de tolerancia hacia la concentración de los

nutrientes, el pH, oxigeno, sales, azucares, temperatura, etc. Al momento de la elección del
medio de cultivo es recomendable consultar las Normativas existentes donde especifican que
tipo de medio de cultivo es el óptimo para la detección y reproducción de cada especie de
microorganismos.
3. Métodos de Siembra
3.1. Generalidades
Las muestras habitualmente contienen poblaciones mixtas, por lo que es muy difícil encontrar
muestras contaminadas con un solo tipo de microorganismos. Para poder identificar las
características morfológicas y fisiológicas, los microorganismos deben ser separados de otras
especies.
El cultivo PURO o AXÉNICO es aquel que contiene un solo tipo de microorganismo.
3.2. Aislamiento de microorganismos en cultivos puros
A fin de estudiar las propiedades de un microorganismo dado, es necesario manipularlos en

cultivos puros sin otros tipos de microorganismos. Para llevar a cabo esto, debe aislarse una
sola células de todas las demás y cultivarse de forma tal que su progenie permanezcaaislada.
Los dos métodos más frecuentes de inoculación para obtener un cultivo puro son:
§ Aislamiento por agotamiento por estriación.

§ Aislamiento por disolución en placa.
3.3. Métodos de Siembra
En términos microbiológicos se entiende por SIEMBRA como el proceso mediante el cual se

lleva una porción de una población de microorganismos (inóculo) a un medio de cultivo para
su crecimiento.
Siembra en tubos de ensayos:
§ En medios líquidos (caldos).

§ En medios sólidos.
Siembra en Placa de Petri:
§ En medio sólido.
3.4. Métodos de Aislamiento
El cultivo donde crece una sola especie bacteriana se denomina cultivo puro. El proceso que
se sigue para conseguir un cultivo puro se llama aislamiento
El aislamiento se puede realizar de tres formas:
§ por agotamiento en la superficie de una placa de agar

§ por traspaso de una colonia pura, sin contaminarla con las colonias vecinas, a otra
placa de agar
§ por siembra en cultivo selectivo
3.4.1. Uso del Asa de siembra
Las asas deben esterilizarse antes de utilizarlas y debe enfriarse sobre el agar o el material de
vidrio (en zonas estériles) antes de tomar la muestra de microorganismos, para no destruirlos
con el calor. Después de utilizarlas, las asas se vuelven a esterilizar en todo su perímetro. Las
bocas de los tubos y matraces de vidrio se flamean ligeramente una vez destapadas, antes y
después de la inoculación.
Durante la inoculación, los tapones se mantienen en la mano sujetándolos por la parte que no
entra en contacto con tubos y matraces. Los tubos abiertos deben mantenerse en posición
inclinada hacia el frente para que el riesgo de contaminación sea mínimo. Las tapas de las
placas Petri no deben colocarse nunca sobre la mesa de trabajo boca arriba trabajando con
bacterias
3.4.2. Siembra por estría en Placas
Es el método más fácil y utilizado para obtener cultivos axénicos o puros. Para ello, con un asa
de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre
la superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri.
Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en
la superficie del medio menos microorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en
la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma
técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún.
Objetivo: obtener, a partir de un elevado número de bacterias, obtener un número reducido

de ellas, distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa.
3.4.3. Tipos principales de aislamiento por agotamiento por estrías
Estría Simple: el método consiste en tomar el material que se desea sembrar con el asa
bacteriológica y realizar estrías en toda la superficie del medio de cultivo.
Estría cruzada: Con este método se siembra con el asa bacteriológica el 1/3 o el 1/5 de la
superficie del medio extendido en la placa de Preti. Luego con el asa estéril se inicia un nuevo
trayecto de estría cruzando una sola vez la estría anterior y cubriendo nuevamente otro 1/3
de la superficie restante del medio de cultivo no sembrado. Con el asa estéril se repite otra
vez la misma operación iniciando el arrastre en la segunda estriación y cubriendo con estrías
el 1/3 restante no sembrado.
3.4.4. Técnica de los 4 cuadrantes
Se divide la placa en cuatro cuadrantes. Se toma el inóculo y se siembra consecutivamente en

1-2-3-4.Incubar. En el cuarto cuadrante, al menos, obtendríamos colonias aisladas.
3.5. Vertido y extensión en Placa
En estos métodos, las suspensiones de células microbianas se diluyen antes de su siembra en

placa. Se siguen estas técnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos, que la
dilución no se puede realizar en una sola etapa. Por tanto, se realizan diluciones seriadas. En
el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten
en placa.
3.6. Métodos de siembra en tubos
Para la siembra de las bacterias en los medios sólidos en tubos se utilizan los siguientes
procedimientos:
• Puntura: Para ello se atraviesa el agar parado con el asa o alambre bacteriológico
cargado de gérmenes hasta alcanzar el fondo del tubo.
• Toque: se usa para siembra en tubos de agar inclinado o en placas de Petri. Con el
asa portando gérmenes se tocan uno o varios puntos de la superficie del medio de
cultivo.
• Difusión: se mezcla el material a sembrar con el medio de cultivo licuado (tibio) y luego
se lo deja solidificar.
• Inundación: los medios con superficie sólida se inundan con el líquido que contiene los
gérmenes, retirándose posteriormente el exceso del mismo.
• Hisopado: se siembra en forma continua y confluente, con hisopos cargados con el

material que se desea sembrar, frotando toda la superficie del medio de cultivo.
3.6.1. Método de Siembra por diluciones seriadas en placas Petrifilm
Es un método microbiológico que consiste en una familia de placas listas para usarse,
diseñadas para ofrecer ahorro de tiempo, espacio, incremento de productividad, fiabilidad y
eficiencia. Su diseño tiene una película rehidratable cubierta con nutrientes y agentes
gelidificantes.Proporciona resultados en tres pasos: inoculación, incubación y recuento.
3.6.2. Método de Siembra por diluciones seriadas en placas a profundidad
La metodología de recuento en placa por diluciones seriadas a profundidad es una

metodología ampliamente utilizada, consiste en realizar diluciones seriadas 1:10 y extender
1000 -100µl de cada dilución en una placa; las placas se incuban hasta que las colonias son
apreciables para su recuento. Esta metodología tiene la ventaja de tener un buen límite de
detección.
3.6.3. Técnica de Filtración por membrana
Para la detección de coliformes totales, coliformes fecales y E.coli, es utilizado el método de

filtración por membrana, el cual es un método altamente reproducible. Puede usarse para
analizar volúmenes de muestra relativamente grande y se obtienen resultados en menor
tiempo que con el NMP. Sin embargo, no puede aplicarse a cualquier tipo de muestra y tiene
sus limitaciones.
La muestra líquida se hace pasar mediante vacío por un filtro de celulosa con tamaño de
poro de 0.45 micras, para que queden retenidas en él las bacterias de tipo coliformes y las
mesofilas. El filtro es colocado en un medio de cultivo específico para lo que se desea
determinar en la muestra (coliformes totales, coliformes fecales y microorganismos
mesófilos), incubando de 37 a 45°C dependiendo de la especie bacteriana durante 18 a 24
horas.
4. Características de las colonias Bacterianas
4.1. Generalidades
Una colonia es una agrupación de bacterias formada a partir de la reproducción de una Unidad
Formadora de Colonia (UFC) sobre un medio sólido. Una UFC puede ser un solo
microorganismo o bien un grupo de microorganismos de una misma especie como en el caso
de bacterias que tienen tendencia a permanecer unidas.
Las colonias bacterianas tienen una medida, forma, textura y color característicos, que aunque
puede variar de acuerdo al medio en que se encuentren, es constante bajo condiciones
controladas y depende de la especie bacteriana que la forme.
Debido a que las características de las colonias ocurren en varios grados y combinaciones
dependiendo de las bacterias y son a menudo muy uniformes, sirven para identificar bacterias
en cultivos mezclados.
La morfología colonial es comparable a una estadística ya que se deriva de una célulaindividual

pero es la característica de la masa celular.
4.2. Características
Tamaño de las colonias: ésta característica es constante dentro de las especies y puede ir
desde colonias muy diminutas hasta un diámetro de varios milímetros.
Forma: Está determinada por su borde y su espesor
Consistencia y textura: Puede variar desde una colonia seca que puede moverse sobre el agar
con el asa, hasta una colonia viscosa que se pega al asa y forma filamentos.
Superficie: puede ser uniformemente brillante y suave o estriada con muescas concéntricas
o quebradas.
Pigmentación: es muy diverso, debido a la elaboración de algún tipo de pigmento, a la

formación de alguna sustancia por parte de la bacteria, o, por la utilización de algún sustrato
que acidifique o alcalinice el medio.
En los medios sólidos en tubos hay que observar las características de las colonias bacterianas
en lo que se refiere:
§ Forma (redonda, ovalada, irregular),

§ Tamaño (grande, mediano, pequeño),
§ Superficie (plana, acuminada, umbilicada, cerebriforme, convexa, planoconvexa,
etc.),
§ Borde (redondeado, lobulado, ondulado, filamentoso, especulado, etc.)
§ color (variable) y ,
§ aspecto (liso, rugoso, húmedo, seco, etc).
5. Crecimiento y reproducción Bacteriana
5.1. Generalidades
El crecimiento es el aumento ordenado en la suma de todos los componentes de un

microorganismo. Por lo tanto, el aumento en el tamaño como resultado de la captación de
agua por parte de la célula o el depósito de lípidos o polisacáridos no constituye un desarrollo
verdadero. La multiplicación celular es consecuencia del desarrollo, en los organismos
unicelulares el desarrollo provoca incremento en el número de individuos que constituyen una
población o cultivo.
5.2. Curva de proliferación Bacteriana
Cuando un volumen fijo de medio liquido es inoculado con células microbianas obtenidas a
partir de un cultivo que fue colonizado hasta la saturación y se mide periódicamente el
número de células viables por mililitro para obtener una gráfica. Las etapas de la curva de
proliferación bacteriana reflejan los acontecimientos en una población de células, no en cada
célula. Este tipo de cultivo se lo denomina cultivo semicontinuo.
5.3. Curva de crecimiento
Es la tasa de crecimiento de una población analizada en un sistema cerrado, monofásico,

medida como el logaritmo del número de células vs. el tiempo de incubación.
5.3.1. La curva típica de proliferación posee 4 etapas
§ Etapa de latencia.
§ Etapa exponencial.
§ Etapa estacionaria.
§ Etapa de declinación (muerte).
5.3.2. Etapa de Latencia
Es el periodo durante el cual las células, ya sin metabolitos ni enzimas a causa del ambiente
desfavorable, al final del cultivo se adaptan al ambiente nuevo. Se forman y acumulan enzimas
y sustancias intermedias hasta que su concentración es tal que permite la reanudación del
desarrollo.
Cuando las células se obtienen a partir de un medio completamente distinto, a menudo son
genéticamente incapaces de crecer en el medio nuevo. En estos casos la etapa latente es
prolongada y representa el periodo necesario para que unas cuantas células mutantes en el
inóculo se multipliquen lo suficiente como para generar un aumento neto evidente en el
número de células.
Características:
§ El número de microorganismos no varía.

§ Adaptación al medio, producción de enzimas.
§ Tiempo variable: entre una hora a días.
§ Tamaño relativo aumentado por división.
5.3.3. Etapa Exponencial
Las células se encuentran en estado constante. Sintetizan material celular nuevo a una
velocidad constante, este material nuevo es catalítico y la masa aumenta en forma
exponencial.
Esto persiste hasta que sucede una de dos cosas: se agota uno o más nutrientes en el medio
o bien se acumulan productos metabólicos nocivos que inhiben la proliferación. Para los
aerobios, el nutriente que se limita es casi siempre el oxígeno.
Características:
§ Relación casi lineal entre el tiempo y el número de elementos.

§ Actividad metabólica incrementada
§ Depende del tiempo de generación de cada bacteria
§ Los antimicrobianos son más activos
§ Puede haber variaciones entre el crecimiento in vitro e in vivo.
5.3.4. Etapa Estacionaria
Finalmente, el agotamiento de nutrientes o la acumulación de productos nocivos provocan

que la proliferación se detenga por completo. Sin embargo, en la mayor parte de los casos,
durante esta etapa se lleva a cabo un recambio celular: se pierden lentamente células que
mueren pero esto se contrarresta por la formación de células nuevas a través del desarrollo
y la división. Cuando esto ocurre, la cuenta celular total aumenta lentamente, aunque la
cuenta viable permanece constante.
Características:
§ En un determinado punto el crecimiento disminuye.

§ La población no aumenta.
§ Células nuevas reemplazan a las células muertas.
§ La actividad metabólica es más lenta.
§ Células en animación suspendida.
§ Producción de metabolitos secundarios: Antibióticos y Toxinas
§ Fase de esporogénesis para las especies productoras de esporas.
5.3.5. Etapa de declinación o muerte
Después de un tiempo en etapa estacionaria, que varía según el tipo de microorganismo y

las circunstancias del cultivo, el índice de muerte se eleva hasta alcanzar un nivel estable. En
la mayor parte de los casos, la tasa de muerte celular es mucho lenta que la de proliferación
exponencial. Con frecuencia una vez que muere la mayor parte de las células, la tasa
disminuye de manera que persiste un pequeño número de supervivientes durante varios
meses o incluso años.
Características:
§ El recuento de células disminuye sensiblemente.

§ El número de células muertas supera al número de células vivas
§ Acumulación de productos tóxicos
§ Disminución de nutrientes
§ Aparición rápida : auto limitar diseminación infecciones
6. Recuento Bacteriano
6.1. Medidas directas del crecimiento bacteriano
§ Recuento de células totales: por microscopia

§ Recuento de células viables: por recuento de colonias
6.2. Medición del Número de células
Se utiliza una cámara de recuento especial que se observa al microscopio óptico para estimar
el número total de células en el cultivo.
6.3. Recuento en placas Sembrados por Diluciones seriadas
El recuento en placa determina el número de células capaz de generar colonias sobre la

superficie de un medio sólido. Hay dos formas, por siembra en superficie: se siembra 0.1 ml
de muestra y se extiende por la superficie con una barra de vidrio o metal. O bien, por siembra
en profundidad: se siembra de 0.1 a 1.0 ml en la placa de Petri y se agrega el medio sólido
fundido (40 ° C) y se incuba. Por este método se pueden usar volúmenes más grandes.Hay que
tener en cuenta que el organismo a ser contado resista temperaturas de 40 a 45° C. El número
de colonias que puede ser contado oscila entre 30-300 colonias.
Cuando el cultivo es denso se usa el método de diluciones. Se usan diluciones seriadas en base
10: 1.0ml de muestra en 9.0ml de diluyente o bien, 0.5ml muestra en 4.5ml de diluyente. El
número de colonias depende del inóculo, medio de cultivo y las condiciones de incubación
(medio de cultivo, temperatura y tiempo de incubación). La expresión del resultado será como
unidades formadoras de colonias por mililitro (ufc/ml) ya que la ufc puede contener más de
una célula.
Bibliografía
Prescott- Harley- Klein.(2002). Microbiología. Quinta Edición. España. Editorial. Mc Graw Hill.
Interamericano.
Madigan, M.T. Martink, J.M., Parket, J. Brock.(1998). Biología de los Microorganismos. 8º

Edicion. España. Prentice Hall.
Canese, A. (2005). Manual de Microbiología y Parasitología Médica. 6º Edición. Paraguay.
Pelczar, M. J., Chan, E.C.S.(1988). Elementos de Microbiología. 2º Edición. México Mc Graw

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Alonso Urmeneta, V.Aragon, et-al. (1995). Manual Práctico de Microbiología. España.

Editorial Masson S.A.
Koneman E.W.et al. (1999). Diagnostico Microbiológico 5ta. Edición. Argentina. Editorial
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Wistreich George, Lechtman Max. (1989). Prácticas de Laboratorio en Microbiología 2da.

México. Edición. Editorial Limusa S.A.

Cultivo de Las Bacterias: Lic. Yadira Parra Gonz Ález, MSC

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Cultivo de las Bacterias

Material elaborado por:

1. Medio de Cultivo .............................................................................................................................4

3.3. Métodos de Siembra .............................................................................................................13

Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios,

2.1. Tipos de Medios de Cultivos

Los medios de cultivo se clasifican en dos:

§ Medios de cultivo Sólido

§ Medios de cultivo Líquido

§ Medios de cultivo Semi-Sólido

2.2. Exigencias Nutritivas

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento

El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos

2.4. Clasificación de Medios de Cultivos

§ Medios de cultivos generales

2.4.1. Medios de Cultivos Selectivos

2.4.2. Medios de cultivo Diferenciales

2.4.3. Medios de cultivo Selectivo-Diferenciales

2.4.4. Medios de cultivo de mantenimiento

Son de variada composición y permite mantener la viabilidad y características fisiológicas de

2.4.5. Medios de cultivo de Generales

Son de variada composición y permite el crecimiento con características fisiológicas de una

2.4.6. Medios de cultivo de Enriquecimiento

2.5. Preparación de Medios de Cultivo

importante seguir específicamente la forma y condiciones de la preparación para lograr la

2.6. Mantenimiento y preservación de medios de cultivos y cultivos

Para la preservación de cultivos bacterianos es recomendable mantenerlos en heladera a 4°C

2.7. Condiciones necesarias para el crecimiento bacteriano

Es uno de los factores de mayor influencia ya sea en el crecimiento como en la supervivencia

§ La mínima se refiere a la Tº mínima necesaria para que pueda crecer la bacteria;

2.8. Clasificación de las bacterias según la temperatura de crecimiento

2.9. Necesidades de Solutos

Se refiere a la concentración de moléculas pequeñas como iones provenientes de azucares y

La concentración de solutos está estrechamente relacionada con la cantidad de agua

2.10. Según la concentración de Azúcar y Sal

Existen organismos que pueden desarrollarse en medios de cultivo de alta osmolaridad y

Osmófilos: que pueden crecer en soluciones concentradas de azucares

Halófilos: los que pueden tolerar altas concentraciones de sal.

Halófilas facultativas: toleran hasta un 2 % de sales

2.11. Según la necesidad de Oxígeno

De acuerdo al comportamiento que presenten frente al O2 se pueden distinguir 4 grupos:

Aerobias o aeróbicas: que requieren del O2

Anaeróbicas: ausencia del O2

Facultativas: presencia/ausencia del O2

Microaerofílicas: presión parcial del O2, inferior a la del aire.

2.11.1. Aerobias ó Aeróbicas

Requieren bajas concentraciones 5 % de O2 para crecer (Campylobacter, Helycobacter).

Viven en ausencia de oxígeno atmosférico. Aceptor final de hidrógeno: compuesto inorgánico

Anaerobios obligados: no utilizan O2 (Fusobacterium, Clostridium).

Anaerobios moderados: toleran 2-8 % de O2.

Anaerobios aerotolerantes: 0,5 % de oxigeno (Actinomyces; Propionibacterium).

Anaerobios facultativos: crecen con o sin oxigeno (Streptococus; Enterobacterias).

Capnofilos: crecen con 5-10 % de CO2 (Neisseria, Haemophilus).

2.12. Acidez y Alcalinidad

§ La mayoría crece entre el pH 4 y 9 (ÓPTIMO 7)

2.13. Exigencia del pH

2.14. Elección de medios de Cultivo

Los microorganismos presentan diferentes rangos de tolerancia hacia la concentración de los

El cultivo PURO o AXÉNICO es aquel que contiene un solo tipo de microorganismo.

3.2. Aislamiento de microorganismos en cultivos puros

A fin de estudiar las propiedades de un microorganismo dado, es necesario manipularlos en