Genes, genomas y

ADN
ADN no codificante
• El numero de genes abarca entre 500 a 50,000 y el numero de bp
de 0.5 millones a 50 mil millones. Esta discrepancia se da sobre
todo en organismos superiores (eucarites) con gran ADN.
• Esto se da gracias a las regiones del ADN no codificantes .
• Además el ADN además de contener genes que codifican
proteínas y ARN , las moléculas de ADN también tienen regiones
reguladoras. .
• Aunque las bacterias tienen relativamente poco ADN no
codificante, los eucariotas tienen cantidades.
ADN no
codificante
• En los procariotas, casi todo el ADN no codificante
se encuentra entre genes como intergénico ADN.
ADN no
codificante
• En eucariotas, la situación es más complicada.
• El ADN no codificante esta esparcido en los cromosomas eucariotas
entre los genes.
• Los propios genes reales a menudo se interrumpen con ADN no
codificante.
• Estos interviniendo se conocen como intrones.
• Las regiones del ADN que contienen la información de codificación se
conoce como exones.
• La mayoría de los genes eucariotas constan de exones que se alternan
con intrones.
• En eucariotas unicelulares inferiores, como la levadura, los intrones son
relativamente raros y a menudo bastante corto.
• Por el contrario, en eucariotas superiores, la mayoría de los genes
tienen intrones y, a menudo, son más largos que los exones.
• Por ejemplo, se descubrió que el gen mutado que causa la fibrosis
quística tienen 24 exones, El resto consiste de secuencias intermedias:
23 intrones.
 • Para sintetizar la proteína codificada por un
gen interrumpido, los intrones deben ser
eliminado en algún momento.
• El empalme de intrones se logra después de
la transcripción en la etapa de ARNm dentro
del núcleo.
• Cuando se expresa un gen, primero se
transcribe el ADN para dar una molécula de
ARN larga, conocida como transcripción
primaria, que incluye los intrones.
• Luego, la transcripción primaria se procesa
para eliminar los intrones, lo que produce el
ARNm

ADN no codificante
El ADN codificante puede estar presente
dentro del ADN no codificante

• Los intrones lleva la complejidad un paso más allá,

ya que hay una secuencia codificante de una
proteína puede estar separada localizada
completamente dentro del intrón
• Esta proteína se ocupa de la supervivencia del
intrón.
• En los raros casos en los que se interrumpen los
genes cromosómicos de procariotas, los genes a
menudo codifican moléculas de ARN en lugar de
proteínas.
• Ambos genes de ARNt y ARNr se han encontrado
con intrones tanto en las eubacterias como en las
arqueobacterias
Las secuencias repetidas son una característica
del ADN en Organismos Superiores

• La mayoría de los genes están presentes solo como copias únicas.

• Tales secuencias únicas explican casi todo el ADN bacteriano.

• Sin embargo, en organismos superiores, las secuencias únicas

pueden comprender como el 20 por ciento del ADN total.

• La secuencia repetida es una secuencias de ADN que se repiten

muchas veces a lo largo del genoma.

• En algunos casos, las secuencias repetidas se encuentran

directamente, en tándem

• Otras se distribuyen por separado alrededor del genoma, secuencias

dispersas. Algunas secuencias repetidas son genes genuinos, pero la
mayoría consisten en ADN no codificante

• Aproximadamente el 25 por ciento del ADN humano cae en esta

categoría. Esto incluye múltiples copias de genes muy utilizados,
como los de ARNr, así como tramos no funcionales de ADN que se
repiten muchas veces.
Las secuencias repetidas dispersas:

1) Secuencias moderadamente repetidas

- Elementos dispersos largos (L INE) “Long INterspersed Elements.”
1) Secuencias altamente repetidas
- Elementos dispersos cortos (SINE) “Short INterspersed Elements.”
Las secuencias repetidas en
tandem:

1) Secuencias cortas repetidas

- ADN mini-satélite o VNTRs (Variable Number of
Tandem Repeats)
• Los VNTR son comunes y están dispersos por el
genoma, aunque tienden a encuentrase cerca de los
telómeros.
• Debido al cruce desigual, el número de repeticiones
en un VNTR dado varía entre individuos
• Algunos VNTR hipervariables pueden tener hasta 1000
alelos diferentes y dar patrones únicos para casi todas
las personas. Esta variación cuantitativa se puede
utilizar para la identificación de individuos mediante
huellas dactilares de ADN.
El superenrollamiento es
necesario para el envasado
de ADN bacteriano

• Una sola molécula de ADN necesaria para

transportar los 4.000 genes de una célula
bacteriana es aproximadamente un
milímetro! Por lo tanto, un cromosoma
bacteriano estirado es mil veces más largo
que una célula bacteriana.
• El ADN de doble hélice dentro de una
célula debe ser superenrollado para
hacerse mas compacto
• ¿Cómo?
El superenrollamiento es
necesario para el envasado
de ADN bacteriano

¿Cómo?

• La doble hélice original tiene un giro a la

derecha, pero las “superbobinas” girar en
el sentido opuesto; es decir, son
superenrollamientos zurdos o "negativos".
• El ADN eucariota también esta
superenrollado (negativo) pero el
mecanismo es bastante diferente e implica
enrollarlo alrededor proteínas histonas
como se describe a continuación.
Topoisomerasas
y ADN girasa
• La misma molécula de ADN circular puede tener
diferentes números de superenrollamientos.
• Las formas se conocen como isómeros topológicos
o topoisómeros.
• Las enzimas que insertan o eliminar
superenrollamientos se denominan, por tanto,
topoisomerasas.
• Las topoisomerasas tipo I se rompen sólo una
hebra de ADN, que cambia el número de enlace en
pasos de uno.
• Las topoisomerasas de tipo II (incluidas las ADN
girasas) rompen ambas hebras del ADN y pasa la
otra parte de la doble hélice a través del espacio.
Topoisomerasas y ADN girasa

• La ADN girasa, una topoisomerasa de tipo II, introduce

superenrollamientos negativos en moléculas circulares de ADN,
como plásmidos o el cromosoma bacteriano.

• La girasa funciona cortando ambas hebras del ADN, introduciendo un

supertwist y volviendo a unir el hebras de ADN.

• La girasa puede generar 1.000 superenrollamientos por minuto.

• Como cada supertwist es introducido, la girasa cambia de

conformación a una forma inactiva.

• La reactivación requiere energía, proporcionada por la

descomposición de ATP.

• La ADN girasa también puede eliminar las superenrollamientos

negativos (pero no positivos) sin usar ATP, pero esto ocurre diez
veces más lentamente.
Antibióticos &
ADN girasa
• La ADN girasa es un tetrámero de dos
subunidades diferentes. La subunidad GyrA
corta y vuelve a unir el ADN y la subunidad GyrB
es responsable de proporcionar energía por
hidrólisis de ATP
• La ADN girasa es inhibida por antibióticos
quinolónicos, como el ácido nalidíxico y sus
derivados fluorados como norfloxacina y
ciprofloxacina, que se unen a la Proteína GyrA.
• La novobiocina también inhibe la girasa al
unirse a la proteína GyrB y prevenir que se una al
ATP.
Topoisomerasas
y ADN girasa
• Las moléculas circulares de ADN pueden
entrelazarse durante la replicación o
recombinación.
• Estas estructuras se denominan catenanos.
• Los círculos pueden ser liberados por ciertos
topoisomerasas de tipo II, como la topoisomerasa IV
• Las moléculas circulares de ADN también pueden
formar nudos.
• Las topoisomerasas de tipo II pueden ambos crean
y desatan nudos.
Separación de topoisómeros
por electroforesis

• Las moléculas de ADN de diferentes tamaños se separan de forma rutinaria mediante

electroforesis en geles de agarosa
• La movilidad de una molécula de ADN en un gel de este tipo depende de su peso
molecular como de su conformación.
• Moléculas más pesadas viajan más lentamente pero entre moléculas del mismo peso
molecular, esas que son más compactos se mueven más rápido.
• En consecuencia, para una molécula de ADN superenrollada se mueve más rápido que el
ADN circular abierto, que a su vez se mueve más rápido que el ADN linealizado.
• Para pequeñas moléculas circulares de ADN, incluso es posible separar topoisómeros con
diferente número de giros superhelical.
• Mientras más torcida , más compacta es la molécula, más rápido se mueve en un campo
electroforético
• Cuando se inhibe la ADN girasa de una cepa de E. coli que contiene pequeños plásmidos, es
posible aislar los plásmidos y demostrar están enrrollados positivos. Topoisomerasa I
continúa eliminando el exceso negativo superenrollamientos, pero la ADN girasa ya no
elimina los superenrollamientos positivos excedentes, que por tanto se acumulan.
Estructuras helicoidales
alternativas de ADN
• En realidad, son posibles varias estructuras
de doble hélice para el ADN.
• Watson y Crick describieron el más estable
y más común de estos.
• Esta estructura gira a la derecha, con 10
pares de bases por vuelta helicoidal., las
ranuras que recorren la hélice son de
diferente profundidad, conocidos como
los surcos mayor y menor. Esta hélice se
denomina forma B o ADN B para
distinguirla de la otra hélice formas, A-DNA
y Z-DNA
Estructuras helicoidales
alternativas de ADN
• La forma A de la doble hélice es más corta y más
gruesa que la forma B y tiene 11 pares de bases por
vuelta helicoidal.
• En la forma A, las bases se inclinan hacia afuera del
eje, el menor surco se vuelve más ancho y menos
profundo, y el surco principal se vuelve más estrecho
y profundo.
• ARN bicatenario o híbridos con un ARN y una cadena
de ADN generalmente formar una hélice A.
• El ADN de doble hebra tiende a formar un Hélice A
solo a una alta concentración de sal o cuando está
deshidratada.
• La tendencia a formar una hélice A también depende
de la secuencia.
Estructuras helicoidales
alternativas de ADN
• Z-ADN es una doble hélice con surcos de 12 pares de
bases por turno.
• Es más larga y más delgada que el B-ADN y su
esqueleto de fosfato y azúcar forma una línea en zigzag
en lugar de que una curva helicoidal suave
• El alto contenido de sal favorece el ADN-Z ya que
disminuye la repulsión entre los fosfatos cargados
negativamente de la cadena principal del ADN.
• ADN-Z es formado en regiones de ADN que contienen
un gran número de pares alternados de GC o GT,
• tal como:
GCGCGCGCGCGCGC or GTGTGTGTGTGTGT
CGCGCGCGCGCGCG or CACACACACACACA
 Estructuras helicoidales alternativas
de ADN

• El ADN-H es aún más peculiar: no es una hélice doble sino triple.

• Depende de largos tramos de purinas en una hebra y, en consecuencia, solo
pirimidinas en la otra hebra; p.ej.:
GGGGGGGGGGGGGG or GAGAGAGAGAGAGAG
CCCCCCCCCCCCCC or CTCTCTCTCTCTCTC
• El ADN-H contiene una hebra rica en purina y dos hebras ricas en pirimidina. La
otra hebra rica en purinas se desplaza y se deja desempar.
• En el ADN-H, la adenina se empareja con dos timinas y la guanina se empareja
con dos citosinas.
• Además, para formar el triángulo C = G = C, un protón (H +) extra es necesario
para uno de los enlaces de hidrógeno.
• En consecuencia, la formación de ADN-H es promovido por condiciones ácidas.
La alta acidez también tiende a protonar el grupo fosfato de la columna vertebral
del ADN, disminuyendo así sus cargas negativas y la repulsión entre las tres
hebras y ayuda a formar una triple hélice.
Las histonas
empaquetan el ADN
en eucariotas
• Las plantas y los animales tienen mucho más ADN que las bacterias y
deben doblar este ADN para encajar en el núcleo de la célula
• Los cromosomas eucariotas pueden ser como un centímetro de largo
y debe doblarse para encajar en el núcleo de la célula.
• Los cromosomas eucariotas no son circulares, y en lugar de
superenrollarse utilizando ADN girasa, el mecanismo de empaquetado
implica enrollar el ADN alrededor de proteínas especiales, las
histonas
• El ADN eucariota comienza a plegarse enrollando alrededor de las
histonas, proteínas cargadas positivamente que neutralizan la carga
negativa del propio ADN.
• ADN con histonas unido se llamó cromatina cuando se descubrió por
primera vez en los cromosomas.
• La cromatina consta de subunidades semi esféricas, los nucleosomas
• Cada nucleosoma contiene aproximadamente 200 pb de ADN y nueve
histonas, dos de H2A, H2B, H3 y H4 y una de H1
Las histonas
empaquetan el ADN
en eucariotas
• Los ocho pares de histonas se agrupan y se envuelven dos bobinas de ADN al rededor
de ellas.

• Cada bobina de ADN tiene aproximadamente 80 pb de largo, de modo que esta

partícula central acomoda 160 pb de ADN en total.

• Los 40 pb restantes aproximadamente de ADN forman una región enlazadora entre

partículas centrales vecinas que pueden variar algo en longitud (de 10 a 100 pb)
dependiendo de la secuencia de ADN.

• La novena histona, H1, se une a cada partícula del núcleo a la siguiente

• El ADN de la región enlazadora está relativamente expuesto y se puede cortar con

nucleasas.

• Las nucleasas son enzimas hidrolasas que catalizan la ruptura de los enlaces
fosfodiéster, que se establecen en los ácidos nucleicos entre la pentosa de un
nucleótido y el grupo fosfato de otro.

• En la práctica la nucleasa microcócica se utiliza a menudo para realizar este trabajo.

• El corte ocurre en tres etapas.

• Primero, se liberan nucleosomas individuales con 200 pb de ADN,

• luego se libera la región enlazadora cortar, dejando alrededor de 165 pb.

• Finalmente, los extremos del ADN enrollado alrededor del núcleo son mordisqueado,
dejando unos 146 pb que están completamente protegidos por la partícula del núcleo
de la “digestión”.
Las histonas
empaquetan el ADN
en eucariotas
• Las histonas centrales tienen un cuerpo de
aproximadamente 80 aminoácidos y una cola de
20 aminoácidos, en el extremo N-terminal.
• Esta cola contiene varios residuos de lisina que
pueden tener grupos acetilo agregados o
eliminados.
• esto controla en parte el estado del ADN
empaquetado y, por tanto, la expresión génica.
• Por tanto, en la cromatina activa, las histonas
centrales están altamente acetiladas
La cromatina altamente condensada se conoce como heterocromatina, apareciendo denso en el microscopio ópt

Niveles adicionales de empaquetado

de ADN en eucariotas
• El proceso continúa.
• La cadena de nucleosomas está enrollada en una estructura
helicoidal gigante.
• Con seis nucleosomas por turno.
• Ahora se conoce como la fibra de 30 nanómetros.
• estas fibras se enlazan hacia adelante y hacia atrás.
• Los loops varían en tamaño, promediando alrededor de 50
de las vueltas helicoidales (es decir, aproximadamente 300
nucleosomas) por loop.
• Los extremos de los loops están unidos a un andamio de
proteínas o eje cromosómico.
• Se produce un mayor plegamiento de los cromosomas en
preparación para la división celular.
• La cromatina altamente condensada se conoce como
heterocromatina, no se puede transcribir
La cromatina altamente condensada se conoce como heterocromatina, apareciendo denso en el microscopio ópt

Niveles adicionales de empaquetado

de ADN en eucariotas
• Entre las divisiones celulares, las regiones de
heterocromatina persisten alrededor del centrómero y en
los extremos del cromosoma.
• Estas regiones incluyen el ADN satélite y constituyen
aproximadamente el 10 por ciento del cromosoma.
• El resto de la cromatina, la eucromatina, está en la forma
más extendida que se muestra como una cadena de
cuentas.
• Aproximadamente el 10 por ciento de esta eucromatina
está incluso menos condensada y se está transcribiendo o
se puede transcribir en un futuro próximo.
• Esta es la "cromatina activa". Durante la replicación y la
transcripción, las histonas se desplazan temporalmente de
regiones cortas del ADN.
• Después que las enzimas sintéticas han pasado, los
núcleos de histonas se vuelven a ensamblar en el ADN
Niveles adicionales de empaquetado
de ADN en eucariotas

• Entre rondas de división celular, los cromosomas constan de un solo

cromátidas, y se conocen como cromosomas en interfase.

• Antes de siguiente división celular, el ADN es replicado y cada

cromosoma consta de dos moléculas de ADN o cromátidas
enlazadas en el centrómero.

• Justo antes de la mitosis, la condensación ocurre, haciendo los

cromosomas (y cromátidas) visibles.

• Los cromosomas se ven mejor mientras están extendido durante la

parte media (metafase) de la mitosis.

• Cada la célula hija adquirirá uno de los cromátidas y comienza el

proceso de nuevo.
 Tabajo Grupal :División celular y ADN
Replicación

ADN Polimerasas- Propiedades y funciones

El ADN debe replicarse antes de
que una célula se divida

• Tras la división celular, cada uno de los descendientes obtendrá una copia
completa del ADN que es idéntico a su predecesor.

• La primera etapa de la replicación es separar las dos hebras de ADN de la molécula

de ADN parental.

• La segunda etapa es construir dos nuevas hebras, usando cada una de las dos
hebras originales como “Template/modelo”.

• cada una de las hebras parentales separadas de ADN sirve como hebra molde para
la síntesis de una nueva hebra complementaria.

• Los nucleótidos entrantes para la nueva hebra reconocen sus “socios” por
emparejamiento de bases y, por lo tanto, están alineados en el “template”

• Dado que A se empareja solo con T, y dado que G se empareja solo con C, la
secuencia de cada hebra original dicta la secuencia de la nueva hebra
complementaria

• La síntesis de ambas nuevas hebras de ADN se produce en la horquilla de

replicación que se mueve a lo largo de la molécula parental.
Replicación del ADN
bacteriano
• Deben resolverse varios problemas importantes para lograr la la replicación del ADN
bacteriano.

• 1) los problemas topológicos debido a que el ADN no es solo una doble hélice, pero también
superenrollado.

• 2) Debido a que las dos hebras que forman una molécula de ADN se mantienen juntas por
enlaces de hidrógeno y se retuercen entre sí para formar un doble hélice, no pueden
simplemente separarse. .
Replicación del ADN
bacteriano
• En E. coli, los dos tipos topoisomerasas II, ADN girasa y topoisomerasa IV, están involucradas
en la replicación del ADN.

• A medida que la horquilla de replicación avanza a lo largo del ADN, sobrevuelve el ADN y
genera superenrollamientos positivos por delante del replisoma.

• Dado que el cromosoma bacteriano es superenrollado negativamente, el sobreenrollamiento

introducido por la replicación se cancela.

• Para que proceda la replicación del ADN, se debe quitar el enrollamiento excesivo. La ADN
girasa se une al ADN antes de la horquilla de replicación e introduce superenrollamientos
negativos que cancelan el superenrollamiento positivo.

• La topoisomerasa IV puede ayudar en este proceso hasta cierto punto, pero su La función
principal es desenredar las moléculas hijas una vez finalizada la replicación.

• El cromosoma bacteriano superenrollado es circular y tiene dos horquillas de replicación y se

abren en direcciones opuestas alrededor del círculo → replicación bi-direccional.
Replicación del ADN bacteriano

• La propia doble hélice es desenrollada

por la enzima ADN helicasa.
• Helicasa no rompe el Cadenas de ADN;
simplemente rompe los enlaces de
hidrógeno que mantienen unidos los
pares de bases.
• Se necesita energía para este proceso y la
helicasa dependiente de la hidrólisis de
ATP
 • La horquilla de replicación consiste en la zona de ADN donde el las hebras
están separadas, más un ensamblaje de proteínas que son responsables de
la síntesis → replisoma

• El resultado de la replicación es dos dobles moléculas de ADN de cadena,

ambas con secuencias idénticas a la original.

• Uno de estas moléculas hijas tienen la hebra izquierda original y la otra hija
tiene la hebra derecha original. El patrón de replicación es semi-
conservador, ya que cada célula conserva la mitad de la molécula de ADN
original.

• La replicación es similar, pero no exactamente igual, en procariotas y

eucariotas.

La horquilla de replicación
Replicación del ADN bacteriano

• Para fabricar las nuevas hebras, se deben

mantener separadas dos hebras
originales para usarlas como modelo.
• Esto se hace por la proteína de unión a
cadena (single strand binding protein) o
proteína SSB, que se une a la cadena
simple no aparejada ADN y evita que las
dos hebras parentales vuelvan a
recocerse.
Propiedades de la ADN polimerasa

• Las polimerasas son enzimas que unen nucleótidos.

• Las células bacterianas contienen varios ADN polimerasas que tienen diferentes
funciones tanto en la replicación del ADN como en el ADN reparación.
• La ADN polimerasa, la enzima responsable de crear nuevas cadenas de ADN.
• En primer lugar, la ADN polimerasa solo sintetizará ADN en una dirección de 5´ a 3 ´
• En segundo lugar, todas las ADN polimerasas carecen de la capacidad de iniciar una
nueva cadena y solo puede alargar una hebra preexistente.
• En consecuencia, un mecanismo especial para la iniciación de la hebra se necesita.
• Esto implica la síntesis de un Primer de ARN corto.
• Cada vez que se inicia una nueva cadena de ADN, para comenzar una nueva cadena
de usos de la polimerasa de ADN un Primer corto de ARN bebe ser elaborado por otra
enzima
Propiedades de la ADN polimerasa

• A diferencia de las ADN polimerasas, las ARN polimerasas

puede comenzar nuevas hebras.
• Una ARN polimerasa especial, conocida como primasa
produce los cebadores de ARN que son responsables de la
iniciación de la cadena durante la ADN síntesis en bacterias.
• Aunque el hilo principal solo necesita iniciarse una vez, La
hebra rezagada se hace en secciones cortas y se debe insertar
un nuevo primer de ARN cada vez que se hace una nueva
porción.
• La ADN polimerasa construirá nuevas hebras de ADN a partir
de cada primer de ARN
La ADN polimerasa alarga las
hebras de ADN

• La ADN polimerasa III (Pol III) es la principal enzima

involucrada en el alargamiento del ADN durante la replicación
cromosómica.
• La ADN polimerasa III tiene varios componentes:
→La "Abrazadera deslizante" tiene forma de rosquilla y está
hecha de dos subunidades semicircularesn de la proteína DnaN.
Se desliza hacia arriba y hacia abajo como un anillo de cortina en
la hebra de plantilla de ADN y requiere varias proteínas
accesorias (HolA, B, C y D más la g) conocido como el complejo
de carga de la abrazadera para cargar la abrazadera deslizante
en el ADN: un proceso que requiere energía.
La ADN polimerasa alarga las
hebras de ADN

• La "abrazadera deslizante" une la enzima central muy grande y

compleja al ADN polimerasa III
• La enzima central sintetiza ADN y consta de tres subunidades,
• DnaE (subunidad a;polimerización),
• DnaQ (subunidad e; corrección de pruebas)
• y HolE (subunidad q; función incierta).
• Dos conjuntos de núcleos, uno para hacer cada nueva hebra
de ADN, se mantienen juntos por un par de subunidades tau.
• Un solo complejo de cargador de abrazadera es compartido
por los dos núcleos ensamblar
La ADN polimerasa
alarga las hebras de
ADN
• Aunque los enlaces de hidrógeno por sí solos coincidirían con las bases
correctamente, la gran mayoría en ocasiones no es lo suficientemente
preciso para la replicación del genoma.

• Como consecuencia, muchas ADN polimerasas poseen capacidad

cinética de corrección de pruebas.

• Esto se refiere a la capacidad de hacer correcciones sobre la marcha.

• Los desajustes se detectan porque causan distorsiones menores en la

forma de la doble hélice. La polimerasa se detiene al detectar un
desajuste y elimina el último nucleótido agregado.

• Como esto se agregó al final de 3 ´ de la cadena de ADN en crecimiento,

la actividad enzimática que elimina el nucleótido ofensivo es una 3 ´ -
exonucleasa.

• En el caso de la ADN polimerasa III, la corrección de pruebas se debe a

una subunidad, la proteína DnaQ (subunidad e).

• (En algunas otras ADN polimerasas, la revisión a capacidad reside en la

misma proteína que la actividad de la polimerasa).

• Inmediatamente después de la replicación, el nuevo ADN es verificado y,

si es necesario, reparado por el sistema de reparación de desajustes
Fragmentos de Okazaki

• La horquilla de replicación se define como todos los

componentes estructurales en la región donde la molécula
de ADN se está duplicando.
• Incluye la zona donde el ADN está siendo desenrollada por
girasa y helicasa, junto con los tramos de ADN
monocatenario esta siendo separados por la proteína SSB.
• También incluye dos moléculas de ADN polimerasa III, que
están produciendo dos nuevas hebras de ADN
• la hebra delantera se fabrica de forma continua (conductora) ,
la hebra retrasada se fabrica en segmentos cortos de 1.000 a
2.000 bases de longitud, conocidos como fragmentos de
Okazaki en honor a su descubridor
• (Los fragmentos de Okazaki son segmentos de ADN que se
sintetizan en la cadena rezagada durante el proceso de
replicación del ADN)
Síntesis discontinua de
ADN
• Durante la replicación del ADN, las dos nuevas
hebras deben sintetizarse en direcciones
opuestas.
• Una representación lineal de esto implicaría
que las dos polimerasas tengan que separarse
• De hecho, las dos moléculas de Pol III que se
mantengen unidas por las subunidades tau.
• Para poder ambas hacer nuevo ADN
simultáneamente, las hebras de ADN deben estar
dobladas.
Síntesis discontinua de
ADN
• Aunque la hebra principal se sintetiza
continuamente, la hebra rezagada se compone
de múltiples piezas, los fragmentos de Okazaki.
• Cuando la síntesis de cada nuevo fragmento de
Okazaki comienza, necesita un primer de ARN
nuevo.
• Para que se produzca el priming o inicio, la
proteína PriA desplaza a la Proteínas SSB que se
unen al ADN desapareado de un tramo corto de
ADN y permite que la primasa (DnaG) se una.
Síntesis discontinua de
ADN
• Antes de la formación del primer, las bases de la hebra
de ADN parental son cubierto con proteínas SSB.
• A) Primero, la proteína PriA desplaza las proteínas SSB.
• B) Segundo, una primasa se asocia con la proteína PriA
• C) Por último, la primasa hace el primer corto de ARN
necesario para iniciar el fragmento de Okazaki.
• Este complejo de cebado o priming a veces se conoce
como primosoma.
• Cada vez que se inicia un nuevo fragmento de Okazaki,
el ensamblaje de Pol III que la hebra rezagada libera, se
reubica para comenzar a hacer una nueva hebra de ADN a
partir del extremo 3´ del primer de ARN.
• Esto implica el desmontaje y reubicación de la pinza o
abrazadera deslizante, que es realizada por el complejo de
carga de la abrazadera.
Completando la
hebra rezagada
• Una vez que ha pasado la horquilla de replicación, la
hebra rezagada se deja como una serie de fragmentos de
Okazaki con espacios (es decir, espacios en los que faltan
uno o más nucleótidos)
• Los huecos se llenan con el primer de ARN.
• Para lograr una hebra completa de ADN en necesitan dos
enzimas trabajando en sucesión:
• ADN polimerasa I (PolI)
• y ADN ligasa.
1) La ADN polimerasa I degrada los primers de ARN y llena
los espacios
2) La ADN ligasa une a los extremos.
 • Replicación del ADN procariota comienza en un
sitio único en el cromosoma, conocido como el
origen de la replicación, y procede en ambas
direcciones alrededor del círculo.
Se inicia la replicación • El complejo de iniciación contiene cinco
• proteínas: DnaA, DnaB, DnaC , girasa y SSB.
cromosómica en oriC • solo DnaA es exclusiva de iniciación
cromosómica; los otros también están
involucrados en comenzar nuevos fragmentos de
Okazaki
• El origen, oriC, tiene tres repeticiones de 13
bases, cada una de las cuales consta de
GATCTNTTNTTTT, seguido de cuatro repeticiones
de nueve bases, cada una de las cuales consta de
TTATNCANA.
• ambas secuencias son ricas en AT, una
característica que ayuda a la separación de las
cadenas.
Se inicia la replicación
cromosómica en oriC
• A) La proteína DnaA se une primero a las cuatro
repeticiones de 9 bases y luego a las tres repeticiones de
13 bases.
• B) A medida que se une más DnaA, el ADN se pliega y
las tres repeticiones de 13 bases se desenrollan.
• C) Dos complejos de DnaB y DnaC se unen a las tres
repeticiones de 13 bases. Esto aleja el DnaAy hace que la
hebra de ADN se abra a lo largo de la región rica en AT.
• Los dos complejos de DnaB ahora inician dos
bifurcaciones de replicación, cada uno se dirigie en
direcciones opuestas alrededor del ADN circular.
 • La región oriC contiene un total de 11 GATC
secuencias, que son reconocidas por la metilasa Dam y
metiladas.
• Antes replicación, cada GATC estará completamente
metilado.
• Inmediatamente después de la replicación, la vieja
hebra está metilada pero la nueva hebra aún no se ha
metilado. El ADN es así hemi-metilado.
• Esto permite el uso de hemimetilación como:
1. guía para el sistema de reparación de discrepancias
2. Transcripción de genes es reprimido mientras hemi-
metilado
3. Replicación no puede ser iniciada cuando el ADN
esta hemi metilado
4. El ADN hemi-metilado se une a la membrana
mientras que el ADN completamente metilado no.

Metilación del ADN y fijación a la

membrana:Control de la iniciación de la replicación
 • La replicación finaliza cuando las dos horquillas de
replicación se encuentran en el término del
cromosoma.
• Esta región está rodeada por varios sitios Ter que
impiden un mayor movimiento de horquillas de
replicación.
• Los sitios Ter actúan asimétricamente.
• TerC, TerB y TerF previene el movimiento de las
horquillas en el sentido de las agujas del reloj
• TerA, TerD y TerE previenen movimiento en
sentido antihorario.
• Esto bloquea el movimiento de la helicasa DnaB y
lleva el movimiento de la horquilla de replicación a
detenerse.

La replicación cromosómica termina en terC

Replicando ADN lineal
en eucariotas
• Replicar una molécula lineal de ADN requiere ciertas adaptaciones.

• Dado que las ADN polimerasas solo puede alargar/enlongar, no iniciarse, las
nuevas hebras de ADN deben iniciarse con una primer de ARN. Dado que la
síntesis siempre procede de 5´ a 3´, el primer de ARN debe estar ubicado
justo en el extremo de 5´ de cada nueva hebra cuando se replica el ADN lineal

• Cuando se elimina este primer de ARN terminal, no se puede reemplazar con

ADN, ya que no hay una hebra para que la ADN polimerasa se alargue.

• Los eucariotas se han adaptado al problema de replicar el ADN lineal

desarrollando estructuras conocidas como telómeros que se encuentran en
los extremos de sus cromosomas.
 Replicando ADN lineal en eucariotas
• Los telómeros consisten en múltiples repeticiones en
tándem (de 20 a varios cientos) de una corta secuencia,
generalmente de seis bases (TTAGGG).
• Durante cada ciclo de replicación, los cromosomas se
acortan y varias de las repeticiones de los telómeros se
pierden.
• En las células donde está presente la enzima telomerasa,
el ADN perdido se reemplaza posteriormente por agregar
varias de las unidades de seis pares de bases al final de 3´
después de cada ciclo de replicación.
• La telomerasa lleva un pequeño segmento de ARN,
complementario al de seis pares bases de repetición de
telómeros.
• Esto le permite reconocer los telómeros y le recuerda qué
secuencia para agregar.
• Después de que la telomerasa ha alargado los extremos
de 3 ´, la hebra complementaria puede ligarse por primer
de ARN seguido de elongación por ADN polimerasa y
unión por ligasa.
Los cromosomas eucariotas tienen múltiples
orígenes
• Los cromosomas eucariotas suelen ser muy largos y tienen
numerosos orígenes de replicación esparcidos a lo largo de cada
cromosoma.
• La replicación es bidireccional, como en las bacterias. Un par de
las horquillas de replicación comienza en cada origen de
replicación y las dos bifurcaciones luego se mueven en
direcciones opuestas.
• Las protuberancias donde el ADN está en proceso de división a
menudo se denominan burbujas de replicación.
• Cada origen debe iniciar una vez y una sola vez durante cada ciclo
de replicación para evitar la duplicación de segmentos de ADN
que ya se han replicado.
• Esto se logra mediante un complejo de proteínas, conocida como
factor de licencia de replicación (RLF), que se une al ADN junto
a cada origen antes cada ciclo de replicación y se desplaza
durante la replicación.
• Solo cuando RLF está presente la replicación del ADN tiene lugar
Síntesis de ADN eucariota
• Síntesis de ADN eucariota es igual a la de las
bacterias en respetos más generales:
• a) es semi-conservativa
• b) una hebra se hace en corto fragmentos
• c) Se necesitan primers de ARN para comenzar
nuevas hebras.
• d) replisoma.
Síntesis de ADN eucariota
• A) El proceso comienza con la unión de una primasa que
produce un primer de ARN.
• Después que el ARN ha hecho el primer, la polimerasa aplfa
lo alarga por un trozo corto de ADN solo tres o cuatro bases
de largo llamado ADN iniciador (ADNi).
• B) Otra proteína, el factor de replicación C (RFC), luego se
une al iDNA
• C) iDNA lleva RFC y carga a ADN polimerasa d más su
abrazadera deslizante (proteína PCNA) al ADN.
• D) Dos asambleas de ADN polimerasa d alargar las dos
nuevas hebras.
• → En los animales, no existe un equivalente de la polimerasa I
de función dual de las bacterias. Los primers de ARN son
eliminados por una exonucleasa (MF1) y los espacios se
llenan por la ADN polimerasa d que está trabajando en la
hebra rezagada.