Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 4: Basic methods for the determination of

the trueness of a standard measurement method

VALIDACIÓN Y VERIFICACIÓN DE MÉTODOS DE

ENSAYOS
HUGO P. GUERRERO POSTIGO
 Aprendizaje
esperado
1. Introducción
2. Fuentes que afectan la posición y errores
Conocimiento y comprensión
sistemáticos
de los criterios y fundamentos
3. Valores de referencia de los estudios de veracidad
4. Evaluación del sesgo (ISO 5725-2) y linealidad
5. Evaluación de la veracidad relativa (ISO
16140-2)
6. Exactitud relativa métodos cualitativos
7. Estudio de linealidad
8. Evaluación de la linealidad (ISO 16140-2)
2
 1. INTRODUCCIÓN
Determinación de los parámetros característicos
1 2 3 4
Diseño y Determinación de Evaluación y
Informe de
desarrollo de plan los parámetros procesamiento de
validación
de validación característicos datos

Medir Analizar Mejorar Controlar

3 3
Definición según Definición según

VERACIDAD DE MEDIDAD/VERACIDAD
ISO 99 Proximidad entre la media de un número infinito de valores medidos repetidos y un
valor de Referencia

Dispersión de Xi
(Errores aleatorios)
VERACIDAD RELATIVA
ISO 16140-1 grado de correspondencia entre la respuesta obtenida por el
método de referencia y la respuesta obtenida por el método
alternativo en muestras idénticas Posición del valor central
(Errores sistemáticos)
Valor
Grado de concordancia entre el resultado de verdadero

una medición y el valor de referencia

aceptado.(ISO 5725-1: 1994).

Es el error sistemático total en contraste con el error

aleatorio.
sesgo

MÉTODO DE ANÁLISIS
4 4
 El sesgo examina la diferencia entre la medición promedio observada y un valor de referencia. Eso
responde la pregunta siguiente: "¿Cuál es la exactitud de mi sistema de medición cuando se compara
con un valor de referencia?" .

 La linealidad examina cuán exactas son sus mediciones comparadas con el rango esperado de las
mediciones. Eso responde la pregunta siguiente: "¿Tiene mi sistema de medición la misma exactitud con
respecto a todos los valores de referencia?“

ESTUDIO DE
VERACIDAD

Mediciones físicas,
Ensayos microbiológicos
fitoquímicas y químicas

𝜶 𝜹 𝐵 ± 𝑇. 𝑆 1+ ≤ ±0,5
𝟏 ;𝑵 𝟏
𝟐

ISO
ISO
ISO 16140-2
ISO 5725-4

5 5
Los valores de referencia se pueden determinar de diferentes maneras, dependiendo de los
estándares de los laboratorio clínicos y de las expectativas tanto de pacientes, usuarios y
entidades de vigilancia de la salud. Algunas de las bases para los valores de referencia son:
• Referencia externa
• Comparación de métodos

Definición según
• Adición Para métodos químicos
ISO 99

VALOR DE REFERENCIA
1. REFERENCIA EXTERNA valor de una magnitud que sirve
• Material de referencia certificado (M.R.C.)
• Patrón de referencia
como base de comparación con
• Patrón a partir de un programa interlaboratorios valores de magnitudes de la misma
• Valores definidos por la ley naturaleza
• Valores acordados por las partes afectadas

2. COMPARACIÓN DE MÉTODOS
• Comparación interna: mediante el estudio de comportamiento de un parámetro medido por diferentes métodos en el mismo
laboratorio.
• Comparación externa: mediante la participación en un programa interlaboratorios

3. MÉTODO DE ADICIÓN
Consiste en añadir una cantidad conocida de patrón a la muestra y comparar la diferencia entre los resultados que se obtienen de la
muestra sin adicionar y la muestra adicionada, con el valor teórico de la adición que se toma como valor de referencia. Todos los
resultados deben obtener de la aplicación completa de método, es decir sin omitir ninguna de las etapas que lo integran. 6 6
 6.5 TRAZABILIDAD METROLÓGICA

ISO/IEC
17025:2017

“Trazable al SI” es una descripción abreviada de “trazable a valores de referencia obtenido por
realizaciones acordadas de las unidades del SI”

Por ejemplo, un resultado citado en unidades de mg/l y declarado como “trazable al SI” tendría que ser trazable a las
materializaciones del kilogramo y del metro

Por ejemplo, hay dos materiales disponibles para la preparación de una solución de calibración de plomo:

1 un producto químico de calidad comercial con pureza

1.
declarada expresada como una fracción de masa>
98%;
Mayor
1. un MRC con pureza certificada expresada como una jerarquía de
2 fracción de masa de (99,6 ± 0,4)%. trazabilidad
7
 Ensayos físicos,
2. Mediciones, resultados y análisis de datos de los estudios de veracidad fitoquímicos y
químicos

8 8
 Ensayos físicos,
2. Mediciones, resultados y análisis de datos de los estudios de veracidad fitoquímicos y
químicos
Paso 1: Calcular el promedio de las mediciones;
Paso 2: Calcular el sesgo de las mediciones; (µ es el valor de referencia)
Paso 3: Calcular el sesgo en términos %; 𝒊

𝑵
Paso 4: Calcular el promedio del sesgo ; 𝒊 𝟏 𝒊
(Datos del paso 3)
𝑵
Paso 5: Calcular la desviación estándar del ; 𝒊 𝟏 𝒊
(Datos del paso 3)
Paso 6: Análisis de valores atípicos intra-ensayos (ISO 16269-4),
Estime “G” de Grubbs , y luego evalúe frente a
%

𝒄𝒓í𝒕𝒊𝒄𝒐 𝒊

𝒄𝒓í𝒕𝒊𝒄𝒐 𝒊

Repita los pasos 1, 2, 3, 4, 5 y para

todos los niveles de concentración 9 9
 Ensayos físicos,
Paso 7. Evaluación del sesgo y su nivel de significancia fitoquímicos y
químicos

Si el intervalo a 95% de confianza definido contiene al cero (valor de referencia) por lo tanto el sesgo asignado al método no es significativo.
SI el el intervalo a 95% de confianza definido no contiene al cero (valor de referencia) por lo tanto el sesgo asignado al método es significativo.
10 10
 Ensayos físicos,
Paso 8. Criterio de verificación/validación fitoquímicos y
químicos
Determine el valor del test estadístico t con de probabilidad y N-1 grados de libertad (use la
herramienta de MS Excel).
Determine el intervalo de verificación según la siguiente ecuación.
𝜶 𝜶
𝟏 ;𝑵 𝟏 𝜹 𝟏 ;𝑵 𝟏 %𝜹
Para b en unidades de medida: 𝟐
; Para b en % : 𝟐

Donde β es el criterio de verificación o de validación definido en el plan.

Analice el comportamiento de o con el intervalo de verificación.
Para el caso de Verificación:
Paso 8: Criterio de aceptación

Si o no están dentro del intervalo de verificación: el estudio tiene como conclusión que el
laboratorio no tiene las condiciones para demostrar consistencia con el método normalizado.
Si o están dentro del intervalo de verificación: el estudio tiene como conclusión que el laboratorio
reúne todas las condiciones para demostrar consistencia con el método normalizado y se puede usar.

Para el caso de Validación:

Si o no están dentro del intervalo de validación: el estudio tiene como conclusión que el laboratorio
no tiene las condiciones para demostrar consistencia con el uso previsto del método.
Si o están dentro del intervalo de validación: el estudio tiene como conclusión que el laboratorio
reúne todas las condiciones para demostrar consistencia con el uso previsto del método. 11
 Ensayos
2. Mediciones, resultados y análisis de datos de los estudios de veracidad microbiológicos
2.1.1 Resultados de las mediciones y procesamiento de datos Paso 1 Paso 2 Paso 3 Paso 6
Valor de
Mediciones ( log10 ufc/g ) 𝑋 1 𝑿 Valores atípicos de centralidad
N° FECHA
NIVEL DE
CONFIGURACIONES ALIMENTO referencia 𝑆 , =
𝑛 −1
𝑥 −𝑥
𝑹𝑹𝒊 =
𝝁
∗ 𝟏𝟎𝟎
CONTAMINACIÓN 𝑅𝑅 − 𝑅𝑅
log10 ufc/g x1 x2 x3 x4 x5 log10 ufc/g log10 ufc/g % 𝐺=
𝑆
G<Gcritico

1 23/04/2019 Bajo 1, 2 1 2.28 2.65 2.93 2.41 2.38 2.41 2.56 0.23575 112.11 2.276 Dato aceptado

2 23/04/2019 Bajo 3, 4 4 2.52 2.40 2.60 0.19677 103.20 0.132 Dato aceptado
2.73 2.84 2.62 2.40
3 23/04/2019 Bajo 5, 6 7 2.34 2.32 2.48 0.18714 105.96 0.796 Dato aceptado
2.76 2.54 2.30 2.49
4 23/04/2019 Bajo 7, 8 10 2.62 2.82 2.74 2.51 2.72 2.78 2.71 0.12033 103.69 0.250 Dato aceptado

5 24/04/2019 Medio 1, 2 2 3.11 3.20 3.20 2.94 2.91 2.91 3.03 0.15385 97.65 -1.203 Dato aceptado

6 24/04/2019 Medio 3, 4 5 2.92 2.91 3.11 2.96 2.97 2.98 2.99 0.07436 102.35 -0.072 Dato aceptado

7 24/04/2019 Medio 5, 6 8 3.10 3.08 3.15 2.99 2.90 2.93 3.01 0.10416 97.25 -1.298 Dato aceptado

8 24/04/2019 Medio 7, 8 11 2.81 2.66 3.04 3.08 2.86 2.89 0.17234 99.91 -0.658 Dato aceptado
2.89
9 25/04/2019 Alto 1, 2 3 4.11 4.12 4.15 4.08 4.20 4.13 0.04550 101.59 -0.255 Dato aceptado
4.07
10 25/04/2019 Alto 3, 4 6 4.56 4.51 4.12 4.11 3.89 4.24 0.28683 102.80 0.037 Dato aceptado
4.12
11 25/04/2019 Alto 5, 6 9 3.98 3.74 4.30 4.08 4.11 4.04 0.20474 99.07 -0.861 Dato aceptado
4.08
12 25/04/2019 Alto 7, 8 12 4.62 4.36 4.26 4.08 4.00 4.26 0.24470 106.20 0.855 Dato aceptado
4.02
13
14
15
16
E va lución de consistencia inter-ensayos
3.000

2.000

Paso 4 Paso 5
1.000

G
0.000

∑ 1
Categoría de Gcritico RR(%) = = S (%) = R − RR
-1.000

q n q−1
alimento (95%) -2.000

-3.000

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
12 5 2.41 102.65 4.156 Muestras

12 12
 Ensayos
2. Mediciones, resultados y análisis de datos de los estudios de veracidad microbiológicos

Paso 1: Calcular el promedio de las mediciones:

Paso 2: Calcular la desviación estándar de las mediciones individuales ,

Paso 3: Calcular el promedio de los promedios:

Para 4: Calcular la desviación estándar combinada: ;

Paso 5: Análisis de valores atípicos intra-ensayos (ISO 16269-4),

Estime “G” de Grubbs , y luego evalúe frente a

𝒄𝒓í𝒕𝒊𝒄𝒐 𝒊

𝒄𝒓í𝒕𝒊𝒄𝒐 𝒊

Repita los pasos 1, 2, 3, 4, 5 y para

todos los niveles de concentración 13 13
 Ensayos
Paso 6. Evaluación del sesgo y su nivel de significancia microbiológicos

Si se usa un método de referencia

Donde y son los resultados de las mediciones con el método de referencia

Escriba aquí la ecuación. Si el intervalo a 80% de confianza definido

contiene al cero (valor de referencia) por lo tanto el sesgo
asignado al método no es significativo.
SI el el intervalo a 80% de confianza definido no contiene al cero
(valor de referencia) por lo tanto el sesgo asignado al método es
significativo.
14
 Ensayos
Paso 7. Criterio de verificación/validación
microbiológicos
En límite de aceptabilidad según ISO 16140-2 es:

En caso de que el este fuera del AL, se debe estimar un nuevo límite de aceptación.

Analice el comportamiento de Bi con el intervalo de verificación.

Paso 7: Criterio de aceptación

Para el caso de Verificación:

Si no están dentro del intervalo de verificación: el estudio tiene como conclusión que el laboratorio no tiene las
condiciones para demostrar consistencia con el método normalizado.
Si están dentro del intervalo de verificación: el estudio tiene como conclusión que el laboratorio reúne todas las
condiciones para demostrar consistencia con el método normalizado y se puede usar.

Para el caso de Validación:

Si no están dentro del intervalo de validación: el estudio tiene como conclusión que el laboratorio no tiene las
condiciones para demostrar consistencia con el uso previsto del método.
Si están dentro del intervalo de validación: el estudio tiene como conclusión que el laboratorio reúne todas las
condiciones para demostrar consistencia con el uso previsto del método.
15
Definición según

Exactitud relativa 
 VP
( sensibilidad )   VN ( especificidad )
*100
nsensibilidad  nespecificidad
ISO 16140-1
EXACTITUD RELATIVA (ER)
grado de correspondencia entre la respuesta
obtenida por el método de referencia y la
respuesta obtenida por el método alternativo
en idénticas muestras

1. Exactitud relativa

16 16
C1 CRITERIO DE ACEPTACIÓN O RECHAZO SEGÚN ISO 5725-6, ISO 16140
Determine el valor de el criterios de aceptación y rechazo según la siguiente ecuación
; siendo el sesgo mínimo detectable

Compare el sesgo absoluto con un valor de verificación o validación

Para el caso de Verificación:
Si  Valor de verificación : el estudio tiene como conclusión que el laboratorio no tiene las
condiciones para demostrar consistencia con el método normalizado.
Si Valor de verificación : el estudio tiene como conclusión que el laboratorio reúne todas las
condiciones para demostrar consistencia con el método normalizado y se puede usar.

Para el caso de Validación:

Si  Valor de verificación : el estudio tiene como conclusión que el laboratorio no tiene las
condiciones para demostrar consistencia con el uso previsto del método.
Si Valor de verificación : el estudio tiene como conclusión que el laboratorio reúne todas las
condiciones para demostrar consistencia con el uso previsto del método.

17 17
 Ensayos físicos,
fitoquímicos y
químicos

A) DISEÑO DE LAS PRUEBAS Y CAPTURA DE DATOS

Los criterios que se puede usar son

18 18
2. Mediciones condiciones de reproducibilidad interna y procesamiento de datos

Paso 1 Paso 2 Paso 5 Paso 6

µ MEDICIONES mg/L X RR
N° FECHA RESPONSABLE MRC/MR ADICIÓN G G≤Gcri
mg/L x1 x2 x3 mg/L (%)
1 2015-10-27 T1 TDMA-51.5 ppm 0.108 0.0998 0.1093 0.1031 0.104 96.36 -0.876 Dato Aceptado
2 2015-10-28 T2 TDMA-51.5 ppm 0.108 0.1055 0.1007 0.1095 0.105 97.44 -0.570 Dato Aceptado
3 2015-10-29 T3 TDMA-51.5 ppm 0.108 0.0987 0.0989 0.0997 0.099 91.76 -2.181 Dato Aceptado
4 2015-10-30 T4 TDMA-51.5 ppm 0.108 0.1023 0.1096 0.1087 0.107 98.95 -0.141 Dato Aceptado
5 2015-10-27 T1 TDMA-64.3 ppm 0.298 0.2832 0.2894 0.2728 0.282 94.56 -1.385 Dato Aceptado
6 2015-10-28 T2 TDMA-64.3 ppm 0.298 0.2957 0.2728 0.2957 0.288 96.67 -0.789 Dato Aceptado
7 2015-10-29 T3 TDMA-64.3 ppm 0.298 0.2978 0.2915 0.2894 0.293 98.29 -0.328 Dato Aceptado
8 2015-10-30 T4 TDMA-64.3 ppm 0.298 0.2769 0.2728 0.2811 0.277 92.93 -1.849 Dato Aceptado
9 2015-11-11 T1 TDMA-70.2 ppm 1.000 1.006 0.998 1.025 1.010 100.96 0.430 Dato Aceptado
10 2015-11-12 T2 TDMA-70.2 ppm 1.000 1.008 1.010 0.998 1.005 100.52 0.304 Dato Aceptado
11 2015-11-13 T3 TDMA-70.2 ppm 1.000 1.038 0.993 1.000 1.010 101.02 0.447 Dato Aceptado
12 2015-11-14 T4 TDMA-70.2 ppm 1.000 1.051 1.020 1.011 1.027 102.72 0.928 Dato Aceptado
13 2015-11-06 T1 LGC.034 ppm 1.500 1.532 1.5038 1.528 1.521 101.42 0.559 Dato Aceptado
14 2015-11-07 T2 LGC.034 ppm 1.500 1.5024 1.5038 1.5097 1.505 100.35 0.257 Dato Aceptado
15 2015-11-08 T3 LGC.034 ppm 1.500 1.5087 1.5128 1.5116 1.511 100.74 0.366 Dato Aceptado
16 2015-11-09 T4 LGC.034 ppm 1.500 1.5098 1.5102 1.5185 1.513 100.86 0.400 Dato Aceptado
17 2015-11-11 T1 LGC.037 ppm 2.00 2.0341 2.0564 2.0706 2.054 102.69 0.919 Dato Aceptado
18 2015-11-12 T2 LGC.037 ppm 2.00 2.093 2.0828 2.0849 2.087 104.35 1.390 Dato Aceptado
19 2015-11-13 T3 LGC.037 ppm 2.00 2.0869 2.0869 2.0442 2.073 103.63 1.188 Dato Aceptado
20 2015-11-14 T4 LGC.037 ppm 2.00 2.0767 2.0564 2.0306 2.055 102.73 0.931 Dato Aceptado
21
19 19
 Ensayos físicos,
fitoquímicos y
químicos
2. Mediciones condiciones de reproducibilidad interna y procesamiento de datos

Paso 1: Calcular el promedio de las mediciones;

Paso 2: Calcular la razón de recuperación (RR); (µ es el valor de referencia)

Paso 3: Calcular el promedio de RR; (Datos del paso 2)

𝑵
Paso 4: Calcular la desviación estándar del ; 𝒊 𝟏
(Datos del paso 2)
Paso 5: Análisis de valores atípicos intra-ensayos (ISO 16269-4),
Estime “G” de Grubbs , y luego evalúe frente a

𝒄𝒓í𝒕𝒊𝒄𝒐 𝒊

𝒄𝒓í𝒕𝒊𝒄𝒐 𝒊

20 20
 Ensayos físicos,
fitoquímicos y
químicos
2. Mediciones condiciones de reproducibilidad interna y procesamiento de datos
Paso 6: Realice la regresión y estimación
de los coeficientes del polinomio de 1er
orden
(1er orden)
Paso 7: Realice la regresión y estimación
de los coeficientes del polinomio de 2do
orden
(2do orden)
Paso 8: Realice la regresión y estimación
de los coeficientes del polinomio de 3er
orden
(3er orden)

Para construir la gráfica, en ensayos microbiológicos; emplear los siguientes criterios:

• Marcar en el eje X, las concentraciones en función de M2 (0%, 25%, 50%, 75% y 100% de M2).
• Marcar sobre el eje Y, la escala apropiada al intervalo de valores de las medias obtenidas para las diluciones. 21
• Graficar las coordenadas de los puntos: (0%, Nivel1), (25%, Nivel 2), (50%, Nivel 3), (75%, Nivel 4), (100%, Nivel 5).
 Ensayos físicos,
fitoquímicos y
químicos
6.4 Análisis del cumplimiento del criterio de validación/verificación
Para verificar la linealidad se realiza un estudio de regresión lineal con polinomios de primer, segundo y terce
grado.

Lo que se busca es analizar que el sistema de medición tiene la misma exactitud con respecto a todos los valores
de referencia en el rango estudiado.

El análisis de regresión fue realizado con MSC Excel 2016, tomado los valores de referencia y los valores
promedios experimentales de cada nivel de concentración.
Paso 9: Criterio de aceptación

Estadísticas de la regresión
Evaluación de significancia
Coeficiente de correlación múltiple 0,972088972 Si: Probabilidad ≥0,05; Variable No significativa
Coeficiente de determinación R^2
R^2 ajustado
0,94495697
0,926609293
Si: Probabilidad <0,05; Variable significativa
Error típico 0,797892672
Observaciones 5

Superior Inferior Superior

Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% 95% 95,0% 95,0% Evaluación de significancia de a, b1
Intercepción -1,400730371 6,245076194 -0,22429356 0,836936521 -21,27535003 18,4739 -21,275 18,4739 Variable No significativa
Variable X 1 1,026393093 0,133701354 7,676759172 0,004592232 0,600895714 1,45189 0,6009 1,45189 Variable significativa

22
 Ensayos físicos,
fitoquímicos y
químicos

6.4 Análisis del cumplimiento del criterio de validación/verificación

Cuando se realice el estudio de el modelo por polinomios de 1er, 2do y 3er orden; es decir:

(3er orden)
(1er orden) (2do orden)
El sesgo o desvió de linealidad es
Paso 9: Criterio de aceptación

El error permitido (ET) puede estar dado

por:
1. Método de normalizado
2. Sesgo del método
3. Incertiumbre del método
23
 Ensayos físicos,
fitoquímicos y
químicos

6.4 Análisis del cumplimiento del criterio de validación/verificación

Si: Sesgo o desvió de linealidad ≤ Criterio de aceptación: El sistema de

medición tiene la misma exactitud con respecto a todos los valores de
referencia en el rango estudiado

Si: Sesgo o desvió de linealidad > Criterio de aceptación: El sistema de

medición No tiene la misma exactitud con respecto a todos los valores de
Paso 9: Criterio de aceptación

referencia en el rango estudiado y se debe verificar las posibles causas

24
 Ensayos
microbiológicos

Paso 1: Calcular el promedio de las mediciones:

Paso 2: Calcular la diferencia de entre el y el

valor de referencia µ por cada nivel y categoría:

Paso 3: Calcular el promedio de :

Para 4: Calcular la desviación estándar

combinada:

25 25
 Ensayos
Paso 5. Evaluación del sesgo y su nivel de significancia microbiológicos

5%

Los resultados de la diferencia y el gráfico de dispersión se interpretarán en función de una

observación visual sobre la cantidad de sesgo y los resultados extremos. Se espera que no más de
uno de cada 20 valores de datos queden fuera de los limites

26
 Ensayos
microbiológicos

Paso 6: Análisis del cumplimiento del criterio de validación/verificación

Si: Sesgo o desvió de linealidad ≤±LSC El

sistema de medición tiene la misma
exactitud con respecto a todos los
valores de referencia en el rango
estudiado
Paso 6: Criterio de aceptación

Si: Sesgo o desvió de linealidad > LC: El

sistema de medición No tiene la misma
exactitud con respecto a todos los
valores de referencia en el rango
estudiado y se debe verificar las posibles
causas
27
guerreropostigo@gmail.com

28