Universidad Mayor de San Andrés

Facultad de Ciencias Farmacéuticas y

Bioquímicas
Química Farmacéutica
“Validación de Metodologías Analíticas”

MSc. María Luisa Daza Calderón

Docente de C de C de M y QFO

La Paz- Bolivia
 Componentes de calidad de
datos analíticos
Verificación del CC (calibración, Calificación de los
materiales de referencia)` instrumentos analíticos

Pruebas de aptitud Validación de los

del sistema métodos analíticos
 APTITUD DEL SISTEMA
 “Si las mediciones son susceptibles a
variaciones en condiciones analíticas,
éstas deben controlarse adecuadamente
o incluirse en el método una declaración
preventiva.”

“Las pruebas de aptitud del sistema se basan en el

concepto que el equipo, el sistema electrónico, las
operaciones analíticas y las muestras constituyen
un sistema integral que puede evaluarse como tal.”
USP
 APTITUD DEL SISTEMA
 Su principal aplicación es en métodos
cromatográficos
 Se emplea para comprobar que la resolución y la
reproducibilidad del sistema cromatográfico son
aptas para realizar el ensayo.
 La Resolución (R) , Número de platos teóricos (N),
Factor de asimetría (As) , son parámetros que se
determinan para aptitud del sistema, a menos q se
especifique otros en la monografía
 Para evaluar aptitud del sistema se realizan
inyecciones repetidas de la preparación estándar, se
calcula desviación estandar relativa, ó coeficiente de
variación, el requisito es 2% o menor
 DEFINICIÓN VALIDACIÓN
Es el establecimiento de la
evidencia documental de que un
procedimiento analítico
conducirá, con un alto grado de
seguridad, a la obtención de
resultados precisos y exactos,
dentro de las especificaciones y
los atributos de calidad
previamente establecidos
Cuál es el objetivo de la
validación?
“El objetivo de la validación de un
procedimiento analítico es
demostrar que es apto para el
propósito indicado.”
ICH Guideline Q2A –
Text on Validation of Analytical
Procedures
 RAZONES PARA VALIDAR

 Demostrar que los métodos son

adecuados a los análisis
propuestos en las condiciones
descritas.
 La validación es la herramienta
que permite obtener las pruebas
documentales al respecto.
 Trabajar con métodos que
ofrezcan confianza y seguridad
en los resultados, minimiza el
número de fallas y repeticiones.
 RAZONES PARA VALIDAR

Conocimiento del método

analítico.
Cumplir con las exigencias legales
tanto de (registros, BPL), con el fin
de asegurar la calidad y eficacia
del producto.
La validación es un requisito previo
de los procesos de transferencia de
métodos analíticos.
METODOLOGIA ANALITICA : JERARQUIA

TECNICA
General

METODO

PROCEDIMIENTO

Particular PROTOCOLO
  TECNICA

Es un principio científico que puede ser

útil para suministrar información
sobre la composición de una muestra
  METODO

 Es la adaptación de una
técnica para
un propósito especifico
  PROCEDIMIENTO

 Un procedimiento consiste en
la información escrita
necesaria para
la correcta utilización de un
METODO
  PROTOCOLO :

 Un PROTOCOLO es una serie de

direcciones precisas y definitivas
que deben seguirse si se quiere que
los resultados analíticos se acepten
para un propósito específico dado
Documentación de la validación
Protocolo de validación

Realización de la validación

Evaluación de los resultados

analíticos

Informe de validación

Certificado de validación
Documentación de la validación
Protocolo de validación :
plan experimental que ejecutado
evidencia la validación realizada

• Objetivo
• Responsabilidad
• Factores críticos
• Parámetros a evaluar y metodología
• Muestras
• Instrumentos
• Métodos analíticos
• Criterios de aceptación
 ... validación

técnica

válido ?
método

resultado

procedimiento no válido ?

protocolo

jr
 Etapas para desarrollar un método
analítico
1 2 DEFINIR LAS CONDICIONES
El equipo
Los reactivos
El muestreo
1

3 DESARROLLAR EL METODO
Encontrar las condiciones óptimas
Estandarizar el método
Práctico : tiempo,
recursos
Idóneo: preciso, exacto
4 VALIDAR
Fiable
 Validación de métodos analíticos

La validación de procedimientos
analíticos requiere:
Instrumentos calificados y calibrados
Métodos documentados
Patrones de referencia confiables
Analistas calificados
Integridad de la muestra

Documentados
 Buenas prácticas de laboratorio

Las buenas prácticas de laboratorio ( BPL)

son indispensables durante todo el
proceso analítico y permiten garantizar la
seguridad de los datos obtenidos así
como las decisiones que se puedan
tomar sobre la calidad de un producto
 Buenas prácticas de
laboratorio
 Entorno de trabajo :

 Organización funcional adecuada

 Personal adiestrado suficiente
 Instalaciones adecuadas y suficientes
 Métodos escritos disponibles, actualizados y
aprobados
 Equipos e instrumentos apropiados,
cualificados y en
buen estado de funcionamiento
 Procedimientos adecuados de muestreo
 Reactivos y soluciones valoradas JR
apropiadas
 Buenas prácticas de laboratorio
 Entorno de trabajo….
 Material auxiliar apropiado y en perfectas
condicionesde uso
 Utilización de patrones y muestras de
referencia correctas
 Verificación y supervisión de los resultados
obtenidos
y mantenimiento de registros auditables
 Información y comunicación de los resultados
obtenidos
 Higiene y seguridad
 Autoinspección
 MÉTODOS ANALÍTICOS OFICIALES

 Los métodos de farmacopeas se

consideran oficiales.
 Métodos de Análisis para Materias Primas.
› Se consideran válidos. No es necesario
realizar ninguna revalidación a la hora
de poner el método en marcha en
cualquier laboratorio.
› Estos métodos han sido sometidos a
ensayos inter-laboratorios para confirmar
su buen funcionamiento.
 MÉTODOS ANALÍTICOS OFICIALES

Métodos de Análisis para FF.

FF de composiciones diferentes a nivel
cualitativo (excipientes) y/o cuantitativo.
El método se considera parcialmente
validado (con el consiguiente ahorro de
costes en el desarrollo del método).
Se evalúa que parámetros son necesarios
validar (de acuerdo al método), siendo la
exactitud y la selectividad los parámetros
más frecuentemente afectados.
 MÉTODOS ANALÍTICOS NO OFICIALES

 Métodos desarrollados por el laboratorio,

usados por algún tiempo, deben sufrir un
proceso de validación.
 Para validar de manera satisfactoria y sin el
uso de recursos innecesarios, es necesario
contar con métodos lo suficientemente
robustos.
 Para lo cual todo método analítico no
oficial debe seguir una secuencia lógica
de fases en su desarrollo, que oriente a una
validación exitosa.
 TIPOS DE VALIDACION
Prospectiva : proceso de validación para
metodologías nuevas

Retrospectiva : para métodos utilizados a diario

no validados anteriormente y de los cuales se
dispone de suficiente documentación para
probar la bondad del método
Revalidación : repetición total o parcial de una
validación, por la introducción de algún
cambio que se espera afecte la bondad de un
método ya validado
 Características de fiabilidad
Especificidad (USP) Selectividad (ICH)
Linealidad – Rango
Precisión:
Repetibilidad
Precisión Intermedia
Reproducibilidad
Exactitud
Límite de Detección
Límite de cuantificación
 Parámetros requeridos para la Validación
USP
Características de Categoría I Categoría II de valoración Categoría III de Categoría IV
Desempeño analítico de valoración de valoración
valoración (características (pruebas de
Prueba de Prueba de límite
Prod.Termi. de desempeño, identificación)
límite Cualitativa
disolución)
Cuantitativa (metales pesados,
(impurezas en etc.)
fármacos)
Exactitud SI SI * SI NO

Precisión SI SI NO SI NO

Especificidad SI SI SI SI SI

Límite de detección NO NO SI * NO

Límite de NO * NO
NO SI
cuantificación

Linealidad SI SI NO SI NO

* SI NO
Rango (intervalo) SI SI

* Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza de la prueba específica

 Selectividad Especificidad
 La capacidad de un método para determinar el
analito sin interferencias de impurezas, productos
de degradación, excipientes u otras sustancias
presentes en la muestra, se relaciona con el
término selectividad.

 SELECTIVIDAD: Capacidad de un método

analítico para medir y/o identificar simultánea o
separadamente los analitos de interés, de
forma inequívoca, en presencia de otras
sustancias químicas que puedan estar
presentes en la muestra
SELECTIVIDAD METODO ANALITICO

 Identificación. Se debe demostrar que el método

funciona en presencia de otras sustancias que
puedan interferir y de otros compuestos relacionados.

 Pureza. Se debe demostrar que el método analítico

permite evaluar las impurezas que se pretenden
analizar cuali o cuantitativamente (LOD, LOC).

 Cuantificación. Cuando se determina la pureza

de una materia prima o el contenido de un principio
activo u otro componente en un medicamento, se
debe asegurar que la señal observada procede
únicamente del analito sin ninguna interferencia de
excipientes, productos de degradación y/o
impurezas.
 Determinación
 En el estudio de la selectividad, se comparan
los resultados del análisis de muestras con y sin
analito, en presencia o ausencia de impurezas,
productos de degradación, sustancias
relacionadas y/o excipientes.
 La elección de la concentración podría ser la
teórica de trabajo para el principio activo y las
interferencias a su límite permitido, puede
evaluarse a partir del análisis de 6 réplicas y el
grado de discrepancia entre las
determinaciones en presencia o ausencia de
las posibles interferencias, mediante la fórmula
siguiente:
 Determinación
1) ( Di  D s )
% discrepancia  *100
Ds
Donde:
Di = respuesta media con interferencia
Ds = respuesta media sin interferencia

2) También seria de aplicación una prueba t de

Student para comprobar la existencia o no de
diferencias significativas entre los dos grupos
3) Determinación de espectros de absorción
molecular : espectrofotometría

Tiempos de retención analito solo y analito

mas interferencia: HPLC
 Espectro de Absorción
A
b ESTANDAR
s
o
r
b
A a
n
MUESTRA + EXCP

ci
a

l Max
Longitud de onda (nm)

l
Selectividad para Técnicas Separativas
HPLC

•Resolución entre Picos

• Número de Platos
Teóricos(Eficiencia)
SELECTIVIDAD PARA TECNICAS
SEPARATIVAS (HPLC)
 Selectividad en técnicas separativas

HPLC,GS, Tecnicas Separativas

Tiempo Cero Pico 1 Pico 2 Pico 3

Tiempo de Retencion t0 t1 t2 t3

0,72 1,788 9,289 14,99

Base de Pico W1 W2 W3

0,07 0,2397 0,3498

Resolucion entre Picos R(1,2) R(2,3) R(3,2)

R=(tn+1-tn)/(1/2(Wn+1+Wn)) 48,44042622 19,3418151 19,3418151

Numero de Platos Teoricos N1 N2 N3

N=16(ti/Wi)2 10439,00082 24028,23332 29382,1545

Conclusion de la Resolucion Resolucion Aceptable Resolucion Aceptable Resolucion Aceptable

Conclusion de la Eficiencia Eficiencia Aceptable Eficiencia Aceptable Eficiencia Aceptable

Conclusion del Metodo para el Pico Cafeina Acido Acetilsalicilico Acido Salicilico
 Ejemplo 1
 Valoración volumétrica de unos comprimidos, se
preparan 6 muestras de un placebo cargado (principio
activo mas matriz)y 6 de principio activo solo, se
valoran por el procedimiento descrito
Determinación pa + Excp pa puro
1 16.15 15.90
2 16.10 15.90
3 16.00 15.85
4 16.10 15.90
5 16.15 15.95
6 16.10 15.90
Comprobar el grado de discrepancia y el estadístico t de
Student
 1. Calcular los siguientes parámetros:

PARAMETRO P.a+ Excp P.A

PROMEDIO 16.1 15.9

DESVIACION 0.0547 0.0316

ESTANDAR
COEFICIENTE DE 0.34% 0.199%
VARIACION

2. Calcular porcentaje de Discrepancia:

( Di  D s )
%D *100 Donde:
Ds Di = respuesta media con
interferencia
Ds = respuesta media sin
interferencia
 3. Prueba “t” de student
 Para varianzas homogéneas.
1. Calcular una estimación conjunta de la S a partir de
las S individuales

s
nn  1s  nb  1s
2
A
2
B
nA  nB  2
 2. Calcular t experimental:

x A  x B
t 
1 1
s 
nA nB
3. Interpretación de la Hipótesis:

H0: Xa=Xb Hi: Xa≠ Xb

ts= t calculado o t expresado

tt= valor de tabla de t student
para una p=0.05 y GL= ts> tt: se rechaza la H0
nA+nB-2 y el resultado es que Xa≠Xb
tt= 2.23
4. Cuando se rechaza Ho, se estudia la Magnitud de
la desigualdad y su I.C
DETERMINACION P.a+ Excp P.a SOLO

NUMERO DE 6 6
DETERMINACIONES

PROMEDIO 16.1 15.9

ESVIACION 0.05477 0.03162
ESTANDAR

Calculo de la diferencia entre medias.

 Error Estándar Combinado:

3. Intervalo de Confianza del 95% para la diferencia entre

medias:

ts= t calculado o t expresado Con una confianza del 95%

tt= valor de tabla de t student
para una p=0.05 y GL= nA+nB- la solución valorante del p.a
2 + excp se sitúa entre 0.14 y
tt= 2.22 0.26
 Linealidad y Rango

 La linealidad es la capacidad del método

para proporcionar resultados que son
directamente proporcionales a la
concentración del analito en la muestra
dentro de un rango establecido.
 Siempre que sea posible se buscará una
respuesta de tipo lineal que facilite su trazado,
interpolación e interpretación.
 El Rango se define como el intervalo entre la
concentración superior e inferior de analito
para el cual se ha demostrado precisión,
exactitud y linealidad del método descrito
 Ámbito de aplicación

 Se recomienda estudiar la linealidad en todos los

métodos de tipo cuantitativo :
Valoración del contenido del principio activo:
productos 90-110%, materia prima 99-101% las
ICH 80-120%
Uniformidad de Contenido: las
especificaciones 85-115%
Cuantificación de impurezas: basado en el
perfil toxicológico de la impureza y la dosis
máxima del fármaco en cuestión
 Linealidad

 Dos tipos de estudios de linealidad:

› Linealidad del Sistema, donde se

realizan los ensayos con la presencia
única del analito.

› Linealidad del Método, en la cual los

ensayos se realizan en presencia del
analito y la matriz correspondiente
 Determinación
 Lo correcto es analizar las muestras de forma
aleatoria, pero, se establece como criterio
práctico analizarlas en sentido creciente de
concentración (mínimo 5 concentraciones) 2 a 3
réplicas
 Lo ideal es hacer pesadas independientes (para
preparar las diferentes concentraciones), ya que
a sí se elimina el posible error sistemático que se
podría arrastrar partiendo de una sola pesada.
 No obstante, se acepta una pesada madre y
posteriores diluciones si se asegura una precisión
y exactitud en la pesada madre y en las
posteriores diluciones.
 Estimadores de la regresión
1. Coeficiente de correlación r: evalúa el ajuste
al modelo lineal propuesto y es una medida
de la cercanía de las observaciones a una
línea recta.
2. Ordenada al origen a: evalúa la
proporcionalidad de la función analítica. Es
una medida del error sistemático potencial del
método.
3. Pendiente b: constituye una medida de la
sensibilidad del método
4. Coeficiente de determinación r2 : relación
entre la variación explicada, definida por un
modelo de ajuste y la variación total
 Análisis de Regresión

b
y = a + bx

x
 Coeficiente de Determinación
y
. . y
.
. .
. y . . y
. . r 2 alto 2
. r bajo

x x
.
y
. y
. . . .
. y . . y
.
. r2= 1 r 2
 0
x x
 Valores para r :

principios activos  0.997

impurezas  0.980
productos biológicos  0.950
 LINEALIDAD DEL SISTEMA
 Se efectuó la cuantificación de acetaminofeno
estándar secundario puro por duplicado.
CONC. ug/ml RESPUESTA
3.5 0.278
3.5 0.224
6.5 0.408
6.5 0.406
10.0 0.620
10.0 0.628
11.5 0.711
11.5 0.722
13 0.797
13 0.796
 Determinar los siguientes valores:
 a= Intercepto  a= 0.0398
 b= Pendiente  b= 0.0583
 r= Coeficiente de correlación  r= 0.9975
 r²= Coeficiente de determinación.  r²= 0.9950
 Σy= Sumatoria de las Resp. Instrum.  Σy= 5.59
 Σy ²= Sumatoria del cuadrado  Σy ²=3.53
 Σx= Sumatoria de los valores de Conc. p/c  Σx= 89
Resp.
 Σx ²= Sumatoria al cuadrado de los valores de
 Σx ²= 911.5
Conc. p/c Resp.
 Σxy= 56.7165
 Σxy= Sumatoria del producto d los valores de
Conc p/c Resp. Instrumental por la Resp.
Instrumental.
 n= 10
 n= Nº total de respuestas
 1. Determinar la Ec. de la Recta:

2. Limites de confianza para la pendiente

(b):
a. calculo de la varianza de la desviación alrededor de la
regresión o error de regresión.
 b. Calculo de la desviación estándar de la pendiente (Sb).

c. Calculo de los limites de confianza de la pendiente (b).

t= valor de tabla de
t student para una
p=0.05 y GL= n-2
t= 2.306
 3. Efectuar el test de hipótesis para la
pendiente (b):
“Demostrar que b es significativamente diferente
de cero.”

H0: b = 0 Hi: b≠0

ts= t calculado o t
expresado
tt= valor de tabla de t ts> tt: se rechaza la H0
student para una y el resultado es que b≠0
p=0.05 y GL= n-2
tt= 2.306
 4. Limites de confianza para el
intercepto (a):
a. Calculo de la desviación estándar del intercepto (Sa).

b. Calculo de limites de confianza para el Intercepto (Sa).

t= valor de tabla de
t student para una
p=0.05 y GL= n-2
t= 2.306
 5. Efectuar el test de hipótesis para el
Intercepto (a):
“Demostrar que a no es significativamente diferente
de cero.”

H0: a = 0 Hi: a≠0

ts= t calculado o t
expresado ts> tt: se rechaza la H0
tt= valor de tabla de y el resultado es que a≠0
t student para una
p=0.05 y GL= n-2
tt= 2.306
 6. Efectuar el test de H para la Regresión en
función al coeficiente de correlación (r):

“Demostrar que hay correlación entre x e y”

H0: No hay correlación x e y

Hi: Hay correlación x e y

tr= tr calculado tr> tt: se rechaza la H0;

tt= valor de tabla de t
student para una existe una correlación
p=0.05 y GL= n-2 significativa entre x /y
tt= 2.306
 7. ANALISIS DE VARIANZA (Regresión
lineal):
a. Determinar los siguientes valores (Sxy; Sxx).

b. Suma de Cuadrados de la regresión (Scr).

 c.Suma de Cuadrados del Error Puro (SCep).
• Determinar los siguientes valores:
Σyj= Sumatoria de las 2
respuestas p/c Concentración.
Σyj Σyj p/c (Σyj)²
Conc.
Σyj 1 0.502 0.2520
Σyj 2 0.814 0.6626
Σyj 3 1.248 1.5575
Σyj 4 1.433 2.0535
Σyj 5 1.593 2.5376
Σyj Total 5.59 7.063
mі= Nº de replicas para cada concentración.

mі=2
 d. Suma de Cuadrados entre Concentraciones
(SCec).

e. Suma de Cuadrados para el Desvió de la Linealidad

(SCl).
 f. Tabla de Anova.
• K= Nº de Concentraciones. K=5 Fs= Valor de F calculado
Fuente De
Variación
Grados
de
Suma de
cuadrados
Cuadrado medio
(CM) Fs Ft
Fv libertad (SC)
(gl)
CM/CMep
Regresión 1 SCr SCr/gl 6.61

Linealida K-2 SCl SCl/gl CM

/CMep 5.41
d
Error Puro n-k SCep SCep/
gl

1. ANOVA PARA LA REGRESION:

Valor de tabla F de Snedecor, para un gl para el numerador y (n-k=5), 5 gl
para el denominador, con una probabilidad p=0.05 y Ft=6.61

Fs>>Ft
2. ANOVA PARA LA LINEALIDAD:
Valor de tabla F de Snedecor, para (k-2=3), 3 gl para el numerador y (n-
k=5),5 gl para el denominador, con una probabilidad p=0.05 y Ft=5.41

Fs<Ft
 f. Tabla de Anova.
• K= Nº de Concentraciones. K=5 Fs= Valor de F calculado
Fuente De Grados
Variación de
Suma de
cuadrados
Cuadrado medio
(CM) Fs Ft
Fv libertad (SC)
(gl)
CM/Cmep
Regresión 1 1 SCr 0.4064 SCr/gl 0.4064 1353. 6.61
33

Linealida K-2 3 SCl 1*10 ³ SCl/gl 3.33*10 CM

/CMep 1.11 5.41
d
Error Puro n-k 5 SCep 1.553*10 SCep/
gl
3.1*10
³
1. ANOVA PARA LA REGRESION:
Valor de tabla F de Snedecor, para un gl para el numerador y (n-k=5), 5 gl
para el denominador, con una probabilidad p=0.05 y Ft=6.61
Fs>>Ft por lo tanto, la regresión es estadísticamente
representativa
2. ANOVA PARA LA LINEALIDAD:
Valor de tabla F de Snedecor, para (k-2=3), 3 gl para el numerador y (n-
k=5),5 gl para el denominador, con una probabilidad p=0.05 y Ft=5.41

Fs<Ft por lo tanto, la falta de ajuste no es representativa

8. Limites de confianza para la recta de
Regresión:
a. Determinar el valor de la respuesta encontrada por ajuste
por mínimos cuadrados (yі) para cada valor de (xі).

Xi Conc. Yi Resp. • Calcular Yi con la Ecuación

3.5 0.244 de la recta.
6.5 0.419
10.0 0.623
11.5 0.710
13.0 0.798

b. Determinar la Raíz cuadrada de la varianza de la Desviación

alrededor de la Regresión o error de regresión (Sxy)
 c. Determinar el valor de la tabla de T Student para una
probabilidad p=0.05 y GL= (n-1)

GL= 10-1= 9 para un Tt= 2.261

d. Determinar los Limites de Confianza:

Xi Y Y
3.5 0.2607 0.2374
6.5 0.4282 0.4092
10.0 0.6309 0.6147
11.5 0.7199 0.7004
• Calcular Y± para cada Y 13.0 0.8097 0.7857
(Resp.)
Hipérbolas de Confianza
 Relación entre exactitud y
precisión

inexacto
e impreciso

Exacto y preciso
preciso Exacto pero
pero impreciso
inexacto
 Precisión
 La precisión expresa el grado de concordancia
o grado de dispersión entre una serie de
medidas de tomas múltiples a partir de una
misma muestra homogénea .
 La procedencia de las muestras pueden ser
muestras reales o preparadas en el laboratorio.
 El objetivo del estudio es conocer el mas o
menos o la variabilidad del método de ensayo.
 La precisión engloba diferentes tipos de estudios:
Repetibilidad
Precisión intermedia
Reproducibilidad
 Precisión
Repetibilidad: estudia la variabilidad del
método efectuando una serie de análisis
sobre la misma muestra en las mismas
condiciones: un mismo analista, con los
mismos aparatos y reactivos, mismo
laboratorio, y mismo dia.
Precisión intermedia: estudia la variabilidad
del método efectuando una serie de análisis
sobre la misma muestra pero en condiciones
operativas diferentes: diferentes analistas,
aparatos, dias, y en un mismo laboratorio
Reproducibilidad: estudia la variabilidad del
método bajo condiciones operativas
diferentes y en distintos laboratorios.
 Repetibilidad
 Repetibilidad Instrumental.
› Estudia la variabilidad debida únicamente
al instrumento.
› Se prepara suficiente cantidad de una
muestra a concentración nominal que
contenga sólo el analito.
› Se realiza por lo menos 10 medidas
consecutivas de la misma muestra
(respuestas del instrumento).
› Se determina el coeficiente de variación
(CV) de las 10 medidas.
 Repetibilidad
 Repetibilidad del Método.
› Determina la repetibilidad de todo el proceso
de análisis (desde la pesada y preparación de
la muestra hasta el resultado final del análisis).
› Se prepara por lo menos 6 muestras por
separado, a la concentración nominal, a partir
de una muestra (analito + matriz) única
homogénea.
› Se realiza las medidas correspondientes y se
determina el coeficiente de variación (CV).
 Precisión

 La precisión de un método analítico se

expresa generalmente como el coeficiente de
variación (CV) de una serie de medidas y se
calcula matemáticamente de la siguiente
manera:

S
CV(%) *100
X
 Precisión Intermedia
Intervalo de CV % máximo aceptable
Aceptación n=1 n=2 n=3 n=4 n=5
99.0 - 101 0.39 0.55 0.67 0.78 0.87
98.5 – 101.5 0.58 0.82 1.01 1.16 1.30
98.0 - 102.0 0.78 1.10 1.34 1.55 1.73
95.0 – 105.0 1.94 2.74 3.36 3.88 4.33
90.0 – 110.0 3.88 5.48 6.71 7.75 8.67
85.0 – 115.0 5.81 8.22 10.07 11.63 13.00
 PRECISION INTERMEDIA
PLACEBO ANALISTA ENSAYO
%C
DIA 1 DIA 2 DIA 3

A 1 51.59 52.27 49.86

50% 2 49.16 49.41 47.37
3 47.27 53.35 48.00
B 1 50.51 49.07 51.48
2 52.02 50.69 53.62
3 51.11 50.67 50.25
A 1 98.82 102.92 97.96
100% 2 97.81 101.71 98.28
3 97.88 101.42 101.57
B 1 100.40 104.52 102.28
2 102.43 103.74 102.89
3 100.99 103.42 101.09
A 1 108.25 109.98 106.60
2 108.65 110.81 107.97 No se puede mostrar la imagen.

110% 3 107.43 111.78 107.11

B 1 112.59 113.31 111.57
2 110.79 116.84 110.63
3 110.41 113.00 107.83
 PRECISION INTERMEDIA
INSTRUMENTO ANALISTA ENSAYO Precisión REPETIBILIDAD:
DIA 1 DIA 2 DIA 3 intermedia
DETERMINAR
A 1 X= 49.34 X= 51.67 X= 48.41 X= COEFICIENTE
A 2 DS= 2.16 DS= 2.03 DS= 1.29 50.43 DE VARIACION DE
3 CV= 4.37 CV= 3.93 CV= 2.67 DS= CADA TRIPLICADO
1.84 EFECTUADO
B 1 X= 51.21 X= 50.14 X= 51.78 PARA CADA
2 DS= 0.76 DS= 0.93 DS= 1.70 CV=
CONCENTRACION
3 CV= 1.48 CV= 1.85 CV= 3.29 3.65
PRECISION
A 1 X= 98.17 X= 102.01 X= 99.27 X= INTERMEDIA
B 2 DS= 0.56 DS= 0.79 DS= 1.99 101.12
3 CV= 0.57 CV= 0.71 CV= 2.01 DS= DETERMINAR
2.15 COEFICICIENTE
B 1 X= 101.3 X= 103.9 X= 102.08 DE VARIACION DE
2 DS= 1.02 DS= 0.56 DS= 0.91 CV=
18 DATOS
3 CV= 1.01 CV= 0.54 CV= 0.89 2.13 EFECTUADOS
PARA CADA
A 1 X= 108.11 X= 110.85 X= 107.2 X= CONCENTRACION
C 2 DS= 0.57 DS= 0.90 DS= 0.69 110.31
3 CV= 0.62 CV= 0.81 CV= 0.64 DS=
B 1 X= 111.26 X= 114.38 X= 110.01 2.65
2 DS= 1.16 DS= 2.13 DS= 1.94 CV=
3 CV= 1.04 CV= 1.86 CV= 1.77 2.4
 EXACTITUD

 La exactitud de un procedimiento analítico

expresa la proximidad entre el valor que es
aceptado convencionalmente como valor
verdadero y el valor experimental encontrado.
 Concordancia entre el valor determinado y el
valor verdadero.
 Generalmente la recuperación del analito
agregado sobre un intervalo de
concentraciones se toma como medida de
exactitud
 GENERALIDADES

 No deben confundirse exactitud y precisión.

 La precisión esta relacionada con la dispersión de una
serie de mediciones pero no da ningún indicativo de lo
cerca que está del valor verdadero.
 Se puede tener mediciones muy precisas pero poco
exactas, sin embargo, para que un método sea
exacto se requiere un cierto grado de precisión.
 No siempre se obtienen valores de recuperación
cercanos al 100 %, ya que esta depende de la matriz de
la muestra, de la efectividad del método de preparación
y extracción, y de la concentración del analito.
 GENERALIDADES
 Aplicación.
Valoración en materia prima
Valoración en producto acabado
Cuantificación de impurezas
 Determinación.
La exactitud debe demostrarse en todo el
rango especificado para el método
analítico, se debe realizar como mínimo 9
determinaciones, sobre 3 niveles de
concentración del analito, por Ej. 3
determinaciones por 3 niveles de
concentración
 DETERMINACION

 En función del tipo de método a validar y de

cada caso concreto se deberá tener en cuenta
el rango de concentraciones de trabajo:
Riqueza de un pa en materia prima o en
producto acabado.80-120%
Impurezas: desde el 50% hasta 120%
Ensayo de disolución: si se trata de un
producto de liberación inmediata Q +/- 20%, si
se trata de un producto de liberación
controlada sobre cada límite de disolución se
aplicará +/- 20 %
 EXACTITUD
%C C1 C2 C3 PROMEDIO

teórico X=(n=6) X=(n=6) X=(n=6) S S²

50 50.27 50.91 50.09 50.42 0.43 0.18

100 99.73 102.95 100.68 101.12 1.66 2.75

110 109.69 112.62 108.62 110.31 2.07 4.29

1. Determinación del % de Recuperación

•Determinar %R para cada

concentración:
•Limites de %R: entre 97% - 103%
1. Test G de Cochran
Gs= G calculado
Gt= valor de tabla para
una p=0.05 ; n=3 ; k=3
Gt= 0.870

Gs<Gt por lo tanto, los S² de las

3 concentraciones son
equivalentes; el factor
concentración no influye en la
variabilidad de los resultados
 2. Prueba de T de Student
“Expresar los resultados como %R.”

%C terorico C1 C2 C3

50 100.54 101.82 100.18

100 99.73 102.95 100.68

110 99.71 102.38 98.74

Recuperación media n=9 R=100.75

Desviación Estándar S=1.37
Coeficiente de Variación CV=1.36
Tt=2.306 para p=0.05 ; GL=n-1
Texp=1.65

Texp<Tt existe una buena exactitud del método

 Límite de detección y límite de
cuantificación
 Límite de Cuantificación.
Es la mínima cantidad de analito presente en
la muestra que se puede cuantificar, bajo las
condiciones experimentales descritas con
una adecuada precisión y exactitud.
(término cuantitativo)

 Límite de Detección.
Es la mínima cantidad de analito en la
muestra que se puede detectar aunque no
necesariamente cuantificar bajo las
condiciones experimentales. (cualitativo)
 APLICACIÓN

› El LD en la evaluación de impurezas
mediante ensayos límite.
› El LC en métodos destinados a la
determinación cuantitativa de impurezas.
› Para métodos de análisis que se empleen
en la determinación de impurezas o trazas
de p.a.
› Permite un mejor conocimiento del método,
saber cuales son los LD y LC es útil en el
ensayo de disolución, determinación de
trazas de p.a. y en la validaciones de
limpieza.
 DETERMINACIÓN

1 Método basado en el examen visual:

 CCF aplicado al análisis de sustancias
relacionadas o impurezas.
 Métodos de valoración volumétrica con un
indicador visual de color.

2 Método basado en la relación señal/ruido

3 Método basado en la extrapolación de la

recta de calibrado a concentración cero
 Relación entre señal y ruido

Pico B
LC

Pico A
LD

Línea basal ruido

Cromatograma que muestra el ruido de línea base

 LIMITE DE DETECCION Y LIMITE DE
CUANTIFICACION
1. CURVA DE CALIBRACION RANGO NORMAL

CURVA DE CALIBRACION
RANGO: 1-15μg/Ml 200
ECUACION DE LA RECTA : 180
160

AREA m*Aus
140
Y= 200.65x+3.7 120
100
80
Y es la respuesta del equipo 60
40
X es la concentración 20
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
[C]μg/mL

2. CURVA DE CALIBRACION A BAJAS CONCENTRACIONES

[C]μg/mL Respuesta Área Área
Promedio
DS
Área
0.3 66 59 63 62.66 3.51
0.6 120 126 130 125.33 5.03
0.9 178 192 185 185.00 7.00
 3. DETERMINACION DEL INTERCEPTO CON EL EJE “Y” A
CONCENTRACION CERO:

•Determinar la Ec. de la recta para los siguientes datos:

X [C]μg/mL 0.3 0.6 0.9
Y AREA PROM. 62.67 125.33 185.0

ECUACION DE LA RECTA :
Y= 203.88x+ 2.0 CURVA DE CALIBRACION
200
La pendiente de la recta es muy 180
similar a la de la Ec. 1 160 y = 203,88x + 2,00
140 R² = 0,9998

AREA m*Aus
120
100

Para X=0 ; Y=2.00 80

60

El intercepto con el eje “Y” 40

20
es 2.00 0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
Ybl=2.00
=2.00 [C]μg/mL
 4. DETERMINACION DESVIACION STANDAR DE LA RESPUESTA A
CONCENTRACION CERO:

•Determinar la Ec. de la recta para los siguientes datos:

X [C]μg/mL 0.3 0.6 0.9

Y DS AREA 3.51 5.03 7.0

ECUACION DE LA RECTA : CURVA DE CALIBRACION

Y= 5,81x+ 1.69 8

7
y = 5,8167x + 1,69
6 R² = 0,9945

5
DS AREA

Para X=0 ; Y=1.69; r=0.9970 4

La DS de la pendiente es 3

2
1,69 1
Sbl=1,69.00
=1,69.00 0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
[C]μg/ml
5. CALCULO DEL LIMITE DE DETECCION K=3

6. CALCULO DEL LIMITE DE CUANTIFICACION K=10