TIROSINASA l: EFECTO DEL PH Y LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

TEMPERATURA: Cuando cambiamos la temperatura, va a ver un cambio significativo de la

velocidad de reacción catalizada por enzimas, podemos decir que la temperatura y la velocidad
son directamente proporcionales, es decir, que si aumentamos la temperatura, incrementara la
velocidad de esta reacción. Al inicio de la reacción, la velocidad de este aumenta cuando la
temperatura se eleva debido al incremento de la energía cinética. No obstante, al final, la energía
cinética de la enzima excede una barrera energética para romper los enlaces de hidrogeno que
conservan las estructuras. A esta temperatura se da la desnaturalización con pérdida de actividad
catalítica, es decir, las enzimas tienen una temperatura optima de acción.

PH: La actividad enzimática máxima ocurre en un pH óptimo, con una disminución notable de esta
actividad cuando se encuentra por fuera de este pH, o sea, a cada lado de este valor. El pH al cual
las enzimas adquieren su máxima actividad es diferente para cada una de ellas y depende de la
secuencia de aminoácidos que las conforman, por supuesto, también está relacionado con
el microambiente celular en el cual desarrollan su catálisis.  PH extremos pueden ocasionar la
desnaturalización de las enzimas, debido a que la estructura con estos cambios es posible
modificar las interacciones iónicas que intervienen en la estabilidad de la enzima en su estado
nativo.

MEDIDA DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA:

Absorbancia
Extracto (mL) 1,0 1,5 2,0 2,5
Tiempo (min) Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
0,0 0,159 0,120 0,114 0,105
0,5 0,166 0,126 0,116 0,115
1,0 0,165 0,132 0,120 0,132
1,5 0,169 0,140 0,122 0,173
2,0 0,170 0,152 0,125 0,196
2,5 0,176 0,169 0,130 0,207
3,0 0,178 0,191 0,136 0,230
3,5 0,185 0,218 0,146 0,246
4,0 0,193 0,241 0,153 0,263
4,5 0,202 0,260 0,163 0,285
5,0 0,213 0,280 0,172 0,299
 TUBO 1
absorbancia 0.25

0.2
f(x) = 0.00978181818181818 x + 0.155181818181818

0.15

0.1

0.05

0
0 1 2 3 4 5 6

tiempo

TUBO 2
0.3

0.25 f(x) = 0.0337818181818182 x + 0.1

0.2
absorbancia

0.15

0.1

0.05

0
0 1 2 3 4 5 6
tiempo
 TUBO 3
0.2
0.18
0.16 f(x) = 0.0115636363636364 x + 0.107181818181818
absorbancia

0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0 1 2 3 4 5 6
tiempo

TUBO 4
0.35

0.3
f(x) = 0.0404181818181818 x + 0.103590909090909

0.25
absorbancia

0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 1 2 3 4 5 6
tiempo

TUBO 1 10 actividad enzimatica=0.098

actividad enzimatica=0.0098 ×
1.0

TUBO 2 10 actividad enzimatica=0.2253

actividad enzimatica=0.0338 ×
1.5

TUBO 3 10 actividad enzimatica=0.058

actividad enzimatica=0.0116 ×
2.0

TUBO 4 10 actividad enzimatica=0.1616

actividad enzimatica=0.0404 ×
2.5
MEDIDA DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA CON CAMBIO DE LA TEMPERATURA:

Absorbancia
Tiempo (min) 4°C 37°C 98°C
0,0 0,123 0,105 0,115
0,5 0,105 0,114 0,114
1,0 0,113 0,125 0,115
1,5 0,143 0,146 0,116
2,0 0,177 0,170 0,114
2,5 0,211 0,199 0,114
3,0 0,240 0,224 0,114
3,5 0,282 0,252 0,115
4,0 0,304 0,272 0,114
4,5 0,330 0,291 0,115
5,0 0,352 0,306 0,114

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTI-

VIDAD ENZIMATICA 4°C
0.4
0.35
f(x) = 0.0538 x + 0.0818636363636364
0.3
0.25
absorbancia

0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 1 2 3 4 5 6
tiempo
 EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTI-
VIDAD ENZIMATICA 37°C
0.35
0.3
f(x) = 0.044 x + 0.0903636363636363
0.25
absorbancia

0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 1 2 3 4 5 6
tiempo

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTI-

VIDAD ENZIMATICA 98°C
0.1165
0.116
0.1155
absorbancia

0.115
0.1145 f(x) = − 0.000109090909090909 x + 0.114818181818182

0.114
0.1135
0.113
0 1 2 3 4 5 6
tiempo

4°C 10 actividad enzimatica=0.269

actividad enzimatica=0.0538 ×
2.0
37°C 10 actividad enzimatica=0.22
actividad enzimatica=0.044 ×
2.0
98°C 10 actividad enzimatica=−0.0005
actividad enzimatica=−0.0001×
2.0
 ACTIVIDAD ENZIMATICA vs TEMPERATURA
0.3

0.25
actividad enzimatica 0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 20 40 60 80 100 120
-0.05
temperatura

EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA:

Absorbancia
pH 3,0 8,4 10,0
Tiempo (min) Tubo 1 Tubo 3 Tubo 5
0,0 0,123 0,128 0,127
0,5 0,123 0,130 0,127
1,0 0,124 0,131 0,128
1,5 0,126 0,133 0,128
2,0 0,127 0,135 0,129
2,5 0,127 0,137 0,129
3,0 0,127 0,141 0,128
3,5 0,128 0,142 0,128
4,0 0,129 0,144 0,129
4,5 0,129 0,148 0,129
5,0 0,129 0,149 0,129
 EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMA-
TICA 3,0
0.13
0.129 f(x) = 0.00132727272727273 x + 0.123227272727273
0.128
0.127
absorbancia

0.126
0.125
0.124
0.123
0.122
0.121
0.12
0 1 2 3 4 5 6
tiempo

EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMA-

TICA 8,4
0.155
0.15
0.145 f(x) = 0.00436363636363636 x + 0.127090909090909

0.14
absrobancia

0.135
0.13
0.125
0.12
0.115
0 1 2 3 4 5 6
tiempo
 EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMA-
TICA 10,0
0.1295
0.129 f(x) = 0.000363636363636364 x + 0.127363636363636
0.1285
absorbancia

0.128
0.1275
0.127
0.1265
0.126
0 1 2 3 4 5 6
tiempo

3.0 10 actividad enzimatica=0.0065

actividad enzimatica=0.0013 ×
2.0
8.4 10 actividad enzimatica=0.022
actividad enzimatica=0.0044 ×
2.0
10.0 10 actividad enzimatica=0.002
actividad enzimatica=0.0004 ×
2.0

ACTIVIDAD ENZIMATICA vs PH
0.025

0.02
actividad enzimatica

0.015

0.01

0.005

0
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
ph

CONCLUSIONES:

PREGUNTAS:
1. Cuando se trabaja con manzana el extracto no es recomendable diluirlo, ¿Por qué?

No se recomienda diluir el extracto ya que al ser expuesto se produce un proceso de

oxidación (pardeamiento) con el oxígeno presente en el aire. El pardeamiento enzimático
es una reacción de oxidación en la que interviene como substrato el oxígeno molecular,
catalizada por un tipo de enzimas que se puede encontrar en prácticamente todos los
seres vivos, desde las bacterias al hombre. En el hombre es la responsable de la formación
de pigmentos del pelo y de la piel. En los cefalópodos produce el pigmento de la tinta, y en
los artrópodos participa en el endurecimiento de las cutículas del caparazón, al formar
quinonas que reaccionan con las proteínas, insolubilizándolas. En los vegetales dan el color
marrón.

2. ¿Cuál es la función de la tirosinasa en los animales superiores?

La tirosinasa es una enzima que cataliza la oxidación de fenoles (como la tirosina) y está
extendida en plantas y animales. La tirosinasa es una enzima cuprífera presente en tejidos
de plantas y animales que cataliza la producción de melanina y otros pigmentos de la
tirosina por oxidación, como el ennegrecimiento de una patata pelada o cortada expuesta
al aire.
-producción de pigmentos.
-fundamental para el metabolismo.
-interviene para el funcionamiento correcto del sistema nervioso central.
3. ¿Qué se podrá recomendar y que no, para evitar el pardeamiento de las frutas y las
papas cortadas?
Cuando exponemos algunas frutas o verduras al aire, después de haberlas cortado, estas
adquieren un color marrón por el pardeamiento enzimático, este es el resultado de la
combinación del oxígeno del aire con los fenoles que contiene la fruta. Para evitar el
pardeamiento se puede hacer:
- Evitar que la superficie de corte entre en contacto con el oxigeno
- Bajando la temperatura
- Reduciendo el pH ( a bajos pH hay una notable disminución catalítica e inactiva la
enzima)
- Usando ácido cítrico ( este inhibe la enzima y la oxidación ocurre a una velocidad
demasiado lenta)