FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICAS

BIOQUÍMICA GENERAL
(BIOL265)
Informe de laboratorio 1: Cuantificación de
proteínas

Carrera: Química y Farmacia

NOMBRES: - Camila Hurtado

-Sofía Martínez
FECHA DE ENTREGA: 2/9/22
Introducción:
Objetivos:

Materiales y métodos:
 Resultados:

Tubo 2:

C1 x V1 = C2 X V2

60 μm x 1ml = C2 X 6ml

10 μm = C2

Tubo V PNP (60 μm) V NaOH (0,02M) Concentración PNP (μm)

1 0ml 6ml 0 μm
2 1ml 5ml 10 μm
3 2ml 4ml 20 μm
4 3ml 3ml 30 μm
5 4ml 2ml 40 μm
6 5ml 1ml 50 μm

Tubo Concentración Absorbancia

1 0 0
2 10 0,171
3 20 0,338
4 30 0,495
5 40 0,660
6 50 0,817

Figura 1

concentración vs absorbancia
0.9
0.8
f(x) = 0.0163114285714286 x + 0.00571428571428573
0.7
0.6
absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 10 20 30 40 50 60
concentración

y = 0,0163x + 0,0057
Experiencia B

Determinacion de la actividad de la fosfatasa acida de germen de trigo

Mezcla tiempo fijo: 12ml citrato + 1200 NPP (10mM)

Tubo NaOH (0,1M) Mezcla tiempo fijo Tiempo

1 2ml 2ml T0´
2 2ml 2ml T5´
3 2ml 2ml T10´
4 2ml 2ml T15´
5 2ml 2ml T30´
6 2ml 2ml T40´

Tubo Absorbancia
1 0
2 0,232
3 0,422
4 0,573
5 0,799
6 0,859

Figura 2

tiempo vs absorbancia
1
0.9
0.8
0.7
0.6
absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
tiempo(min)
Reemplazando los valores de absorbancia en la ecuación de la recta obtenida en el grafico 1:

y = 0,0163x + 0,0057

Tubo 2:

0,232=0,0163x + 0,0057

13,883=x

Tubo Absorbancia Concentración (μm)

1 0 0
2 0,232 13,883
3 0,422 25,539
4 0,573 34,803
5 0,799 48,668
6 0,859 52,349

Figura 3

tiempo vs concentracion
60

50
concentración(μm)

40

30

20

10

0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
tiempo(min)
III.-Propiedades cinéticas de la fosfatasa ácida del germen de trigo

Experiencia C

Tubo 2

CI x Vi = CF x Vf

10mM x 250 μl = CF x 2500 μl

1mM = CF

Se prosigue de igual manera para los siguientes cálculos, obteniendo la siguiente tabla:

tubo NPP (mM) V Citrato (0.1M) V H2O a 2,5ml pNPP(mM)

1 0 μl 1ml 1500 μl 0
2 250 μl 1ml 1250 μl 1
3 500 μl 1ml 1000 μl 2
4 750 μl 1ml 750 μl 3
5 1000 μl 1ml 500 μl 4
6 1250 μl 1ml 250 μl 5
7 1500 μl 1ml 0 μl 6

Tubo NaOH (0,1M)

1 3ml
2 3ml
3 3ml
4 3ml
5 3ml
6 3ml
7 3ml

Tubo Concentración Absorbancia

1 0 0
2 1 0,302
3 2 0,450
4 3 0,786
5 4 0,701
6 5 0,360
7 6 0,561

Extrapolando la concentración a tiempo 10 del grafico 3 la velocidad da como resultado:

V0= 25,539/10min= 2,5539 μmoles/min

Reemplazando los valores de absorbancia en el grafico 1 obtenido en la experiencia A

Tubo 2:

y = 0,0163x + 0,0057

0,302= 0,0163x + 0,0057

18,178=x

Tubo Concentración (mM)

1 0
2 18,178
3 27,257
4 47,871
5 42,656
- -
7 34,067

[s] V0
0 0
18,178 1,818
27,257 2,726
47,871 4,787
42,656 4,266
34,067 3,407

michaelis-menten
6

4
Vo min

0
18.178 27.257 47.871 42.656 34.067

[S] mM

Figura 4: curva obtenida al graficar V0 vs concentración de sustrato

Tabla para obtener grafica de lineweaver- burk

 1/[S] mM min-1 1/[V0] mM-1
0,055 0,550
0,036 0,366
0,021 0,209
0,023 0,234
0,029 0,293

Lineweaver- Burk
0.6

f(x) = 9.97396386822529 x + 0.00325398512221037

0.5

0.4
1/Vo mM/min-1

0.3

0.2

0.1

0
0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04 0.045 0.05 0.055 0.06
1/[S] mM-1

Figura 5: Linealización de Lineweaver- Burk que es el reciproco de la de michaelis-menten

y = 9,974x + 0,0033

vmax=-> 1/intercepto (0,0033) =303 mM/min -1 1541

Km = Vmax x pendiente (9,974) = 3022 Mm -1

Resultado de Km comprobado:

y = 9,974x + 0,0033

-0,0033 = 9,974x

-3,308x10-4 = x -> -1/km

3022 =x
Como el grafico de michaelis menten no nos entrega la velocidad con precisión se debe hacer uno
de dobles reciprocos

y = 0,097x + 0,208

1/v0 = km/kmax

0,969/10 = 0,0969

2,495/10 = 0,2495

Calculando el inverso de cada concentración

[s] V0
0 0
0,969 0,0969
2,495 0,2495
5,959 0,5959
5,082 0,5082
- -
3,639 0,3639