Espectroscopia UV-Visible

Determinación de fosfato
Análisis Instrumental II

CARRERA QUÍMICA Y LICENCIATURA EN QUÍMICA

Segundo semestre 2023

Integrantes
Maite Olivares Gianecchine
maite.olivares@usach.cl
Scarlett Salas Paredes
scarlett.salas@usach.cl
Docente
Dra. Marlen Gutiérrez Cutiño
 Introducción

En este práctico se determinó la absorbancia a soluciones estándar de fosfato mediante

espectrofotometría de absorción en el UV-Visible. Para esto se prepararon seis sets de
soluciones a diferentes concentraciones con el objeto de medir sus absorbancias y obtener
posteriormente una curva de calibración. Lo anterior, con la finalidad de determinar la
concentración de fosfato de una muestra problema mediante la interpolación de la muestra
en la curva obtenida.
Para obtener la concentración de fosfato de manera experimental en la muestra problema se
puede utilizar la ley de Lamber y Beer, en donde se define que un haz de luz monocromático
penetra una solución de concentración desconocida (mayor a 0,01 M) y esta absorbe la luz que
incide en un camino determinado, generando una banda de absorción en el espectrómetro
UV-visible, la cual se define como absortividad molar. Esto se puede expresar mediante la
siguiente ecuación:

𝜀 = 𝐴𝑏𝐶
Donde:
𝐴 = 𝐶𝑜𝑟𝑟𝑒𝑠𝑝𝑜𝑛𝑑𝑒 𝑎 𝑙𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
𝜀 = 𝐶𝑜𝑟𝑟𝑒𝑠𝑝𝑜𝑛𝑑𝑒 𝑎 𝑙𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑚𝑜𝑙𝑎𝑟
𝑏 = 𝐶𝑜𝑟𝑟𝑒𝑠𝑝𝑜𝑛𝑑𝑒 𝑎𝑙 𝑐𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑜 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑙𝑢𝑧 𝑖𝑛𝑐𝑖𝑑𝑒𝑛𝑡𝑒 [𝑐𝑚−1 ]
𝐶 = 𝐶𝑜𝑟𝑟𝑒𝑠𝑝𝑜𝑛𝑑𝑒 𝑎 𝑙𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑠𝑐𝑜𝑛𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎 [𝑀]

Objetivos

o Conocer el manejo de un espectrómetro UV-visible.

o Construir una curva de calibración mediante un estándar de fosfato.
o Determinar la concentración de fosfatos en una muestra problema.

Tratamiento de datos

En una primera instancia, se prepararon seis sets de soluciones estándar de 20 mL a

concentraciones de 2,5 - 5 - 7,5 - 10 - 12,5 - 15 (mg/L); las cuales fueron preparadas mediante
el método del azul de molibdeno, en donde se les adicionó molibdato de amonio a los
estándares de fosfato, con la finalidad de reducir este compuesto a un complejo, provocando
un viraje en el contenido del matraz de incoloro a azul.
Posteriormente, se procedió a medir la absorbancia a una solución estándar de fosfato tomada
al azar en el espectrofotómetro de absorción UV-Visible, con la finalidad de realizar un barrido
dentro de un rango de 350 – 900 nm y lograr establecer la banda de absorción máxima; para
así determinar la longitud de onda aproximada. Obteniéndose un valor de 710 nm para esta.
Luego, se procedieron a medir las absorbancias en función de la longitud de onda máxima (710
nm) de todas las soluciones desde la menos concentrada a la más concentrada y la muestra
problema, obteniéndose los siguientes resultados:

Tabla 1. Resultados obtenidos de absorbancias para las soluciones estándar a 710 nm

Concentración [mg/L] Absorbancia a 710 nm

2,5 0,273
5,0 0,526
7,5 0,759
10 0,998
12,5 1,212
15* 1,224

En donde: * = Dato que se considera eliminar

Tabla 2. Absorbancia de la muestra problema a 710 nm

Concentración muestra problema (mg/L) Absorbancia a 710 nm

6,4 0,643

Gráfico 1. Absorbancia vs. Concentración (mg/L) de fosfato a 710 nm

Se tomó la decisión de eliminar el último punto de la curva de calibrado debido a que se
necesita obtener un valor de R2 lo más cercano posible a 1, con el propósito de mantener la
linealidad en la curva y obtener una concentración de fosfatos de la muestra problema lo más
cercana a la realidad. Esto posee una elevada importancia, ya que la ley de Beer postula que la
absorbancia es directamente proporcional a la concentración, por lo que de no tener esta
linealidad presente la ley no es aplicable.

Gráfico 2. Absorbancia vs. Concentración (mg/L) de fosfato a 710 nm corregido

A partir de este gráfico se extrapola la siguiente ecuación de la recta:

Y = 0,094x + 0,0486
Con la ecuación de la recta obtenida, se reemplazó la absorbancia medida de la muestra
problema, la cual fue de 0,643
Y = 0,094x + 0,0486
0,643 = 0,094x + 0,0486
0,643 – 0,0486 = 0,094x
0,5944 = 0,094x
0,5944
=𝑥
0,094

X = 6,32 mg/L concentración de fosfato

 Conclusión

Al momento de realizar una espectroscopía UV-Visible es importante tener ciertas

consideraciones como:
o Definir de manera correcta la longitud de onda máxima, debido a que es el punto en donde
la muestra presenta la mayor diferencia entre la luz que incide en ella y la que se transmite,
por lo que permite conocer la cantidad máxima de luz que puede absorber la muestra,
además de obtener una mayor precisión y sensibilidad al momento de medir.

o Tener un pensamiento bastante crítico al momento de analizar un gráfico, juzgar con

claridad cuando es necesario eliminar algún dato o no, preguntarse si esto afecta o no a la
propiedad o ley con la que se está trabajando.

Referencias

o Skoog, D. A. (2001). Principios de análisis instrumental - 5b: Edición. McGraw-Hill Companies.