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La segunda vía utiliza una combinación de tres segundos mensajeros: iones calcio (Ca2+), inositol
trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG). En este caso la enzima amplificadora es la fosfolipasa C que genera
el IP3 y el DAG a partir del fosfolípido de membrana el fosfatidil inositol difosfasto (PIP2). El IP3 provoca
la liberación del Ca++ intracelular, de sus reservorios, como por ejemplo el REL.
Luego de que la hormona se une, una señal es traducida al interior de la célula donde los segundos
mensajeros y proteínas fosforiladas generan respuestas metabólicas necesarias. Los segundos
mensajeros principales son cAMP, Ca2+, inositol trifosfato (IP3), y diacilglicerol (DAG). Las proteínas son
fosforiladas en la serina y treonina por la proteína cinasa cAMP-dependiente (PKA) y proteína cinasa C
DAG-activada (PKC). Adicionalmente, una serie de tirosina cinasas membrana-asociadas e intracelulares
fosforilan residuos de tirosina específicos pertenecientes a enzimas blanco y otras proteínas
reguladoras.
La vía representativa para la activación de la proteína cinasa cAMP-dependiente, PKA. En este ejemplo,
el glucagón se une a su receptor en la superficie celular, y así el receptor es activando. La activación del
receptor es ligada a la activación de una proteínas G (proteína que se une al GTP y lo puede hidrolizar)
compuesta de 3 subunidades. Al ser activada, la subunidad α se disocia y se una a la adenilatociclasa y a
su vez también lo activa. La adenilatociclasa convierte al ATP en AMP-cíclico (cAMP). El cAMP producido
luego se une a las subunidades regulatorias del PKA conllevando a la disociación de las subunidades
catalíticas. Las subunidades catalíticas están inactivadas hasta que las subunidades regulatorias se
disocian. Una vez liberadas, las subunidades catalíticas del PKA fosforilan varios sustratos usando el ATP
como el donador de fosfatos.