Crecimiento

microbiano
MSc. Olga Rivas Solano
I-2023
 Clase 13/02/2023
1. Aclarar cambios en fechas del programa comunicados por
TEC Digital y comunicar situación 20/02/2023

2. Grupos y temas para “Mi problema en 180 segundos”

3. Tema crecimiento microbiano:

 Crecimiento microbiano:
1. Nutrición microbiana Aumento en el número de de
células asociado a la división
Rama de la fisiología que celular
estudia los nutrientes o
compuestos químicos
que la célula necesita
para su crecimiento

Macro (H, C, O, N, P,
S)

Micro (hasta 50
elementos)
Relevancia del carbono para la célula
microbiana

• 50% peso seco

• Se usa para
hacer nuevo
material celular
durante el
crecimiento
Clasificación de los microorganismos por:

Fuente Autótrofos: usan CO2 como única o

de principal fuente de carbono
carbono

Heterótrofos: Móleculas orgánicas

preformadas (ej. Glucosa)
Conservación de la energía de los nutrientes
mediante síntesis de compuestos con enlaces
de alta energía:
La síntesis de ATP es realizada por la
enzima ATPasa y requiere ADP, un
grupo fosfato y una fuente de
energía que proviene del transporte
de electrones en la membrana
citoplasmática
Clasificación de los microorganismos por:

Fuente de Quimiótrofos: Reacciones

electrones
usadas para la
REDOX del metabolismo
conservación de
energía
Fotótrofos: Luz
Quimiótrofos: utilizan las reacciones REDOX como
donadoras de electrones para obtener la energía
necesaria para la síntesis de ATP
Oxidación: pérdida de e-
Reducción: ganancia de e-
Hay dos tipos de quimiótrofos:

Quimioorganótrofos Quimiolitótrofos

• Usan molélulas • Usan moléculas

orgánicas como inorgánicas como
donadores de e- donadores de e-
(ej. glucosa) (ej. SH2, NH3, Fe)
Fotótrofos: realizan una fotofosforilación, en la
cual la luz es la fuente de electrones para la
síntesis de ATP
2. Medios de cultivo
En microbiología, los medios de cultivos se pueden
clasificar según su estado:

SÓLIDOS LÍQUIDOS

Contienen agar Se llaman caldos

Clasificación de los medios
Medio mínimo M9
según su composición:
6.5 g/l Na2HPO4.H2O
3 g/l KH2PO4
1 g/l NH4Cl
DEFINIDOS: Ej: 0.5 g/l NaCl
2 ml/l MgSO4 (1M)
Se sabe exactamente su
1 ml/l CaCl2 (1M)
contenido
1 ml/l Tiamina (1M)
5 g/l Glucosa
15 g/l Agar

INDEFINIDOS:
Ej: Agar Nutritivo
No se conoce exactamente
que tipo ni que cantidad de 3 g/l Extracto de carne
nutrientes poseen 5 g/l Peptona
15 g/l Agar
También se pueden clasificar según:

FUNCIÓN
Enriquecimiento

Selectivos

Diferenciales
 Medios de enriquecimiento
• Se usan en muestras con
mucha diversidad
microbiana (ej. Suelos,
alimentos) en las cuales el
microoganismo de interés Ej. Aislamiento de Listeria en
está en baja concentración suelos o alimentos
con respecto a los demás.
• El medio de
enriquecimiento permite
que crezca más para
facilitar su aislamiento. Ej. Muestra de pollo
contaminada con Salmonella
• BAM: Bacteriological
Analytical Manual
Ejemplo de un medio de enriquecimiento para
Listeria sp. (Fraser)

Contiene varias fuentes de nutrientes.

UVM Modified Mantiene el balance osmótico y el pH.
Listeria Enrichment Contiene esculina que es hidrolizada por
Broth Listeria. Contiene antibióticos que inhiben el
crecimiento de otras bacterias.
 Medios selectivos

Son muy útiles para aislar

Estimulan el crecimiento de microorganismos de intéres
ciertos microorganismos e
inhiben el de otros Ejemplo: Brilliance Bacillus
cereus Agar

Permite el desarrollo de B. cereus

y B. thuringiensis, pero inhibe el
crecimiento de muchas otras
bacterias ya que contiene
Polimixina B y Trimetoprim
(antibióticos)
 Medios diferenciales

Ejemplo: Agar
Permiten diferenciar o reconocer el
XLD (xylose
crecimiento de uno o más
lisine
microorganismos de interés
deoxycholate)

Permite reconocer el crecimiento de E.

coli, ya que contiene rojo de fenol que vira
a amarillo cuando esta bacteria fermenta
la xilosa

Permite diferenciar colonias de

Salmonella, ya que esta bacteria reduce
el azufre del medio a sulfuro de
hidrógeno, el cual reacciona con el
tiosulfato de hierro (sal presente en el
medio), generando un precipitado negro
de sulfuro de hierro
3. Medición del crecimiento microbiano

Contaje total de células

(Cámara de Neubauer)

Diluciones seriadas y conteo de

unidades formadoras de
colonias = UFC (viables)

Densidad óptica
(Espectrofotómetro)

Peso seco
 Cámara Neubauer

Ventajas: Rápido y directo

Desventaja: No permite diferenciar entre células vivas y muertas
Conteo de microorganismos en cámara Neubauer
Técnicas para inocular placas (para recuentos o
aislamientos)
Diluciones
seriadas y
conteo de
unidades
formadoras de
colonias (UFC)

= 2 UFC

= 1 UFC!
Densidad óptica

• Medición de la
densidad óptica de un
cultivo en un
espectrofotómetro
• Ventaja: es rápido
• Desventaja: no permite
diferenciar entre células
vivas y muertas
Otra desventaja: Ley de Lambert-Beer
Otra desventaja: Se requiere elaborar una curva de correlación
para relacionar la turbidez con la concentración en UFC/ ml

http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/2685/5_-
_Caracterizaci%C3%B3n_microbiol%C3%B3gica.pdf?sequence=10&isAllowed=y
Fórmula para Brucella:
UFC/ml = ABS(420nm)-0,0103/5*10-11
Ej.
Si ABS = 0.472
UFC/ml= 9.234 *109
 Peso seco
• Se puede cuantificar por filtración o centrifugación
• Ventaja: es útil en bioprocesos y para microorganismos
filamentosos (ej. Actinomicetes, hongos)
• Desventajas: No permite diferenciar entre células vivas y
muertas y requiere una curva de correlación
4. Crecimiento de poblaciones
El crecimiento de una población microbiana se representa
graficando el número de células en función del tiempo en una
gráfica semilogarítmica que normalmente sigue un modelo
exponencial
Aspectos cuantitativos de la fase
exponencial
El número de células se puede calcular mediante la ecuación

Nf=(Ni)2n también como Nt=N0x2n

En donde Nf número total de células de la población

Ni número inicial de células

n Número de generaciones

2n Número de células en cada generación

Ejemplo de cálculo
• ¿Cuál sería el número de S.aureus en un sandwich,
dejado cuatro horas en el interior de un automóvil?
• Número inicial de bacterias 10
• Tiempo de generación 20 minutos
• Número de generaciones: 4h=240 minutos/20
minutos: 12
• Aplicando la fórmula Nf=(Ni)2n 10x212, 10x 4096
• Entonces el número de S.aureus sería: 40960
Quimiostato: Cultivo continuo para mantener los cultivos en
ambientes constantes durante períodos largos de tiempo
 Efecto de factores ambientales en el
crecimiento microbiano

Factores Rangos
• Temperatura • Cada microorganismo
• pH tiene un valor mínimo,
óptimo y máximo para
• Disponibilidad del agua cada uno de estos
• Oxígeno factores
Efecto de la temperatura
Clasificación por temperatura óptima de
crecimiento
Efecto del pH
 Disponibilidad de agua
Los microorganismos necesitan agua, en una forma disponible. La mejor forma de
medir la disponibilidad de agua es mediante la actividad de agua (aw). La aw de se
puede reducir aumentando la concentración de solutos en la fase acuosa
mediante la extracción del agua o mediante la adición de solutos como sal o
azúcar, lo que aumenta la presión osmótica.
 Clasificación por aw

Halófilos Osmófilos Xerófilos

Altas Altas
Ambientes
concentraciones concentraciones
secos
de sal de azúcar
O2 como aceptor final de electrones

Aerobios
Sí
Microaerófilos

aerotolerantes
No Anaerobios
estrictos
Comerciales para el
curso de Laboratorio:

Traer un guante de
cocina para la
preparación de
medios y lentes de
seguridad!