G O B I E R N O DE LA C I U D A D DE B U E N O S A I R E S

INSTITUTO SUPERIOR DE TECNICATURAS PARA LA SALUD

CULTIVO DE BACTERIAS
 MEDIOS DE CULTIVO
• Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos.

• En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el

medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y
multiplicarse para dar colonias.

• Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una amplia
diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes para su
desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno.
Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento
específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.
 Clasificación de los medios de cultivo
• Según su origen:

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de

origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composición química no se conoce exactamente.

b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química

definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.

c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores de

crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.
 Según su consistencia
a) LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.

b) SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de

15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que se
extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no
constituye ningún elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado
puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad
de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran posibles en medio
líquido".

c) SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar

la motilidad de las especies en estudio. Actualmente se encuentran disponibles
comercialmente con el agregado de agar
 Según su composición
A causa de los requerimientos químicos del mundo microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar
componentes químicos del medio.

a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los microorganismos

poco existentes. Es el medio más frecuentemente utilizado para mantener colonias microbianas. Por
ejemlo: agar común o caldo común.

b) ENRIQUECIDOS: están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede
agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, líquido
ascítico, etc. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.

c) SELECTIVOS: son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones físicas del
medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos específicos con el fin de inhibir el crecimiento
de especies químicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio sólo permite el crecimiento de
un grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol o Chapman (permite
el crecimiento de ciertos estafilococos).
d) DIFERENCIALES: son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios géneros y
especies de microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha añadido un carbohidrato y un
indicador y la bacteria que se cultiva es capaz de fermentar dicho carbohidrato, se produce una
acidificación del medio con el consiguiente viraje de color del indicador por el cambio de pH.

El citrato de Simmons es un medio cuya única fuente de carbono es el citrato sódico, entonces en
él solo crecerán las bacterias capaces de desarrollarse utilizando como única fuente de carbono
ese componente.

Suelen ser a la vez selectivos, por lo tanto solo crecerán determinadas bacterias (pueden ser dos o
más tipos) que al actuar sobre alguno de los componentes específicos del medio, demuestran
algunas de sus propiedades o características y nos permite diferenciar entre ambos tipos.
Medios enriquecidos
Agar Sangre

Agar
Chocolate

Mueller
Tioglicolato Hinton
 Medios de cultivos selectivos y diferenciales
• Agar manitol salado
Selectivo y diferencial para Staphylococcus sp. El medio incluye extracto de caseína y tejidos animales
digeridos, extracto de ternera, manitol, sales y rojo de fenol.
Los estafilococos pueden crecer en presencia de una elevada concentración de sal y S. aureus puede
fermentar el manitol, dando colonias de color amarillo.

• Agar XLD. Agar xilosa, lisina dexocicolato

Selectivo y diferencial para la detección de Salmonella y Shigella en cultivos entéricos.
El dexicolato sódico inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias no patógenas. Salmonella
fermenta la xilosa, pero también descarboxila la lisina genera el producto alcalino diamino cadavarina,
este producto neutraliza los productos de fermentación de los ácidos, de manera que las colonias serán
rojas. Dado que la mayor parte de Salmonella produce ácido sulfhídrico a partir de tiosulfato sódico, las
colonias se vuelven negras en presencia de citrato amónico férrico, lo que permite diferencias
Salmonella de Shigella.
Shigella no fermenta estos carbohidratos, de forma que sus colonias serán rojas.
Medios diferenciales y selectivos

Agar Manitol

Agar XLD
 Curva de crecimiento
• Se define como crecimiento el aumento de la cantidad de
constituyentes y estructuras celulares, cuando hay crecimiento en
ausencia de división celular hay aumento en el tamaño y peso de la
célula. Mientras que cuando el crecimiento es seguido de división
de células hay un aumento en el número de células.
• El crecimiento de una población es el aumento del número de
células como consecuencia de un crecimiento individual y posterior
división. Esto ocurre de una manera exponencial. El crecimiento
exponencial es una consecuencia del hecho de que cada célula se
divide dando dos células.
• La velocidad del crecimiento exponencial se expresa como el
tiempo de generación “G”, y este se define como el tiempo que
tarda una población en duplicarse, los tiempos de generación varían
ampliamente entre los distintos microorganismos.
Por ejemplo una bacteria con un tiempo G de 30 min.
 CURVA DE CRECIMIENTO
ESTACIONARIA

Log CÉL.
MUERTE
VIABLES EXPONENCIAL

LATENCIA

TIEMPO
 Latencia
• Cuando una población bacteriana es inoculada en un medio fresco el crecimiento no suele comenzar de inmediato, sino
después de un tiempo llamado latencia.
• La fase de latencia representa un periodo de transición para los microorganismos cuando son transferidos a una nueva
condición. En esta fase se producen las enzimas necesarias para que ellos puedan crecer en un nuevo medio ambiente.
En esta fase no hay incremento de células, pero hay gran actividad metabólica, aumento en el tamaño individual de las
células, en el contenido proteico, ADN y peso seco de las células.

Exponencial o logarítmica
• Es el periodo de la curva del crecimiento en el cual el microorganismo crece exponencialmente, es decir que cada vez
que pasa un cierto tiempo de generación la población se duplica. Bajo condiciones apropiadas la velocidad de
crecimiento es máxima. Las condiciones ambientales afectan la velocidad de crecimiento exponencial.

Fase estacionaria
• En cultivos en recipientes cerrados una población no puede crecer indefinidamente de forma exponencial. Las
limitaciones de crecimiento ocurren ya sea por agotamiento de algún nutriente esencial, por acumulación de productos
tóxicos, porque se alcance un número de células elevado para el espacio disponible o por combinación de las causas
anteriores.

Fase de muerte
• Si la incubación continua después de que una población microbiana alcanza la fase estacionaria, las células pueden
continuar vivas y seguir metabolizando, pero va a comenzar una disminución progresiva en el número de células
viables, y cuando esto ocurre se dice que la población ha entrado en fase de muerte.
 Requerimiento de oxigeno
El oxígeno, como constituyente universal de las células, es un nutrimento proporcionado en cantidades
abundantes por el agua; sin embargo, la mayoría de los microorganismos requieren además oxígeno
molecular. Respecto a la necesidad o tolerancia de esta molécula, se tiene que los microorganismos se
clasifican en cinco grupos:

• Aerobios estrictos, aquéllos que crecen de manera obligada en condiciones óxicas o aerobias con
presencia de tensiones normales de oxigeno, el que utilizan como aceptor final de electrones para
cubrir sus necesidades energéticas.

• Microaerofílicos, los que crecen en tensiones de O2 menores a las del aire o condiciones
microóxicas.

• Facultativos, emplean alternativamente oxígeno molecular u otros compuestos inorgánicos u

orgánicos como aceptores finales de electrones por lo que crecen de acuerdo a las condiciones que
prevalecen en su hábitat, aerobias o anaerobias.

• Anaerobios estrictos, aquéllos que no requieren de este elemento para su desarrollo, y la presencia
de O2 inhibe su desarrollo o incluso provoca su muerte. Tal es el caso de las bacterias reductoras de
sulfatos y de las bacterias metanogénicas que utilizan el CO2 como aceptor de electrones y lo
reducen a metano.

• Aerotolerantes, son organismos anaerobios, pero que a diferencia de los estrictos, estos toleran el
O2 y crecen en su presencia aunque no puedan utilizarlo.
Clasificación de los microorganismos de acuerdo a su tolerancia al O2

a) Aerobios estrictos
b) Anaerobios estrictos
c) Anaerobios facultativos
d) Microaerófilos
e) Anaeobios aerotolerantes
Cultivo de microorganismos anaerobios o microaerófilos
Figure 6.5
 Cultivo Puro
En 1872, Johann Samuel Schroeter notó que las bacterias crecían sobre la superficie de materiales diversos,
incluyendo la superficie de una papa cortada. Aquí las bacterias daban lugar a la formación de una masa
relativamente grande a la que después se le denominó colonia.Cuando estas colonias individuales fueron
examinadas al microscopio, se encontró que cada una de ellas estaba formada por cantidades enormes de
bacterias; pero el asunto más importante era que todos los organismos de una misma colonia pertenecían a la
misma especie.
Aparentemente, las células individuales habían caído del aire, tocando la superficie de la papa en un cierto lugar,
multiplicándose ahí hasta producir millones de individuos, con lo que las colonias se hacían visibles a simple vista.
Todas las bacterias de una sola colonia habrían derivado de una sola célula, y, por lo tanto, cada colonia constituía
un cultivo puro.

Características de los cultivos puros

• Las colonias deben ser iguales en forma, tamaño y color.
• Que no existan formas inhibidas.
• Al microscopio deben tener un aspecto común.
• Tiene que tener iguales propiedades tintoriales
• Deben ser bioquímicamente y fisiológicamente iguales..
Técnica de la siembra
La técnica para el aislamiento comienza preparando un inóculo de siembra, que es la deposición de una pequeña
porción de la muestra en el medio o en los medios de cultivo adecuado, en función de las especies microbianas
que se espera encontrar. Por eso existen distintos métodos o tipos de siembra, en función de la muestra de
partida, del medio en el que se siembra y de la finalidad del estudio. Describiremos la siembra para inoculación
y la siembra para aislamiento.

Siembra para inoculación: la inoculación consiste en tomar una pequeña porción de la muestra y diluirla para
dispersarla y que crezca con más facilidad en el medio de cultivo. Se puede inocular en medio líquido o en medio
sólido.

Siembra para aislamiento: la finalidad de este tipo de siembras es la de obtener cultivos puros. Se siembra en
placa de Petri que contienen medios de cultivo sólidos.
Existen varios tipos de siembras para aislamiento:
Obtención de cultivos puros

Siembra por agotamiento

Seguimos en la próxima clase