Biología Molecular

Replicación
Fernando Villavicencio

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 30/5/2022 56

 Replicación

 Para la preservación de las

especies
 reproducción

 El ADN
 Formado por dos cadenas

 Cada ciclo celular, las hebras se

 Separan
 Copian

3/4/2022 Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 57

Replicación
Ciclo celular
 Fase G1
 Inicio de su ciclo de vida
 Aumento de tamaño
 Fase G0
 Especialización
 Fase S
 Replicación de material genético
 Fase G2
 Revisión y reparación de Genoma
 Activación de mecanismos de división celular
 Fase M
 División física de la célula

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 58

Replicación
Control
 Familia de Cinasas de proteínas
 Forman complejos con ciclinas
 CdK (Complejos Ciclinas-Cinasas)
 Proteínas de ciclo entre síntesis y degradación

 Acumulación  G1
 Desaparecen  S
 Sintetizan nuevamente  G2
 Degradan  M

 División física de la célula

 Cambios de estado de fosforilación de
proteínas intracelulares 3/4/2022 59
Replicación
Origen de replicación
 Secuencias específicas que no generan productos génicos
 Sitio de inicio
 Procariotes – 1 solo (OriC  E. coli)
 Modulos cortos de secuencias repetidas
 4 de 5’-TGTGGATAA-3’ Horquillas
de
 3 de 5’-GATCNTTTQTTT-3’
Replicación
 Eucariotes – varios (330 levadura 14 Mb)
 ARS (Autonomous Replicate Sequence) [plásmidos]
 Modulos funcionales
 A muy conservada
 Secuencia central A/TTTTATG/ATTTA/T
 B variable
3/4/2022 60
Enzimas participantes en la replicación

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 61

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 62
Tarea: Presentación en grupos de las
Enzimas participantes en la replicación
 Polimerasa de ADN (Andrés)
 I y II
 III Presentación 10 min
 Helicasas (Daniela)
3 preguntas o taller de
 Como se rompe los puentes de hidrogeno
5 minutos
 Primasas (Camila)
 Tamaño de ARN cebador y como se corrige el código
 Proteinas ssb (Maria José)
 Función de dedos de Zn
 Ligasas (Sebastián)
 Grafique reacción de ligasas
 Topoisomerasas (Estefanía)

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 63

Mecanismo de replicación
 Etapa 1. Reconocimiento del origen de replicación:
 Orígenes de replicación.
 Reconocidos por helicasas (ATP).
 Módulos cortos de secuencia repetida
 AyT

 Otras helicasas con estructura de anillo

 Inducen la abertura del resto de la cadena

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 64

 Mecanismo de replicación
 Etapa 2. Mantenimiento de la abertura de la hélice
 Proteínas ssb se asocian con los nucleótidos de cada hebra
 Estabilizan e impiden la regeneración de los puentes de hidrógeno
 Etapa 3. Síntesis del cebador:
 Primasa sintetiza un segmento corto de RNA
 Cebador para la siguiente enzima.
 Etapa 4. Inicio de la copia
 En 3′ de cebador se ancla la polimerasa de DNA
 La subunidad β, con la participación del complejo γ
 El centro enzimático.
 El centro enzimático añade nucleótidos complementarios

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 65

Mecanismo de replicación
 Etapa 5. Relajación de superenrollamientos
 Se generan superenrollamientos en la hebra que pueden
interrumpir el paso de la maquinaria de replicación.
 Las topoisomerasas son las enzimas encargadas de relajar
estos superenrollamientos
 Etapa 6. Terminación de la replicación
 Sitios de terminación del proceso
 Secuencias cortas repetidas
 RTP (replication terminator protein)
 inhibe el desplazamiento y disocia las helicasas en los sitios de
terminación.

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 66

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 67
Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 68
Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 69
Consulta

 Helicasas
 Como se rompe los puentes de hidrogeno
 Primasas
 Tamaño de ARN cebador y como se corrige el código
 Proteinas ssb
 Función de dedos de Zn
 Ligasas
 Grafique reacción de ligasas en la replicación

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 70

 Wiki

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 71

Trabajo

 Replicación con todos sus proteínas

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 72
 Cdc (Cell Division cycle)
Cdt (Chromatin licensing and DNA replication factor)
Mcm (minichromosome maintenance)
Control de la Replicación Noc (Nucleolar Complex-associated)
DDK (Dbf-4 dependent kinase)

 Procesos mejor controlados a nivel celular

 Se ejerce en el inicio de la replicación
 Orc-1-6
 Proteinas de reconocimiento
 Función ATPasa
 Función fosforilativa (Cilina-cinasa)
 Para iniciar la replicación
 Al ORC se suman otras proteínas en G1 Cdc6, Cdt1, seis
pequeñas proteínas Mcm, y Noc3.
 En conjunto, forman el complejo pre-replicativo (pre-
RC)
 En la transición G1/S
 Cdc6 y Cdt1 son desplazadas para formar el complejo de
pre-inicio (pre-IC)
 Iniciadores
 Cdc7

 Dbf4 (DDK)

 Mcm10 (una proteína nuclear abundante)

 Cdc45
3/4/2022 73
Reparación de ADN
 Reparar las alteraciones que ocurren continuamente en el
material genético en su replicación.
 Pueden ser causados por:
 Fallos enzimáticos
 Accidentes metabólicos
 Radiación
 Presencia de ciertas sustancias en el medio, etc.
 Para contrarrestar esto las células poseen sistemas de
reparación del DNA, los cuales se categorizan en cuatro
tipos:

 Reparación por supresión de bases (BER) Grupo 2

 Reparación por supresión de nucleótidos (NER) Grupo 3
 Reparación de pares erróneos (MMR) Grupo 1
 Reparación de rompimientos de la doble hebra (DBR). Grupo 4

Biología Molecular Segundo Semestre Fernando Villavicencio 3/4/2022 74