Ut9 Alumno Micro

Microbiología
Técnicas clínica
en inmunodiagnóstico
Grado Superior de Laboratorio Clínico y biomédico
Miguel Avia
josemiguel.avia@fpclaudiogaleno.es
Curso: 2021/2022
UT9. PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA
• Purgas/vaciado intestinal
• Brebajes químicos
• Baños de agua helada
• Sangrías
• Hambrunas mortales
• George Washington
• S. pyogenes
• 40% sangre
• Vinagre mantequilla
• Escarabajos secos
• 21 horas
La era de los antibióticos

Alexander Fleming 1940
1970…Fin Bacterias
• Descubrimientos accidentales
• Lisozima, estornudo
• Penicilina, hongo Penicillium notatum, S. aureus (Gram+)
• Reducir mortalidad infantil
• Superbacterias-resistencias
• Mal uso
• OMS preocupación
• 2050
• 10 M-RESISTENCIA
Antibióticos
Antibiótico. Es una molécula de bajo peso molecular que inhiben el crecimiento de otros microorganismos, incluso los
destruyen.
Ahora, muchos son derivados sintéticos
Clasificación agentes antimicrobianos

Clasificación:
• Atendiendo a su origen:
1. Bacterias
1.1. Actinomicetos (Streptomyces, Micronospora y Nocardia)
1.2. Bacterias endosporuladas (Bacillus)
2. Hongos (Penicillium y Cephalosporium)
• Atendiendo a su espectro de acción:

1. Espectro reducido
2. Espectro medio.
3. Amplio espectro
4. Atendiendo al modo de acción:
5. Inhiben la síntesis de la pared celular.
6. Inhiben la síntesis proteica.
7. Destruyen la membrana celular.
Clasificación agentes antimicrobianos
• Dependiendo de la consecuencia de su actividad:

1. Bacteriostáticos.
2. Bactericidas.
3. Bacteriolítico.
• Dos familias:
ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR 1. β-lactámicos
2. No β-lactámicos
β-lactámicos
• Todos comparten un anillo β-lactámico
• Grupo de antibióticos más importante por su actividad y su amplia utilización
• Antibióticos bacteriolíticos
• Constituidos por las siguientes subfamilias:
1. Penicilinas
2. Cefalosporinas
3. Monobactamos
4. Cefamicinas
5. Clavaminas
6. Carbapedeminas
7. Nocardicinas
8. Oxacefeminas
ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR





ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos
PENICILINAS
PENICILINAS
• Anillo β-lactámico y anillo tiazolídico (S), dos grupos metilo y un grupo ácido
PENICILINAS
• Grupo 1: Bencilpenicilinas o Penicilina G
• Radical grupo bencénico
• Penicilina natural, Penicillium gnotatum
• Grupo 2: Fenoxialquilpenicilinas o Penicilina V

• Radical grupo bencénico con un oxígeno
PENICILINAS
• Grupo 3: Penicilina antiestafilocócicas

• Radical grupo bencénico con dos grupos metoxi
• Se denominan también metoxipenicilinas
• S. aures (G+), emite muchas β-lactamasas
• Resistentes a las β-lactamasas
PENICILINAS
• Grupo 4: Aminobencilpenicilina
• Radical grupo bencénico con grupo amino
• Sensibles a las β-lactamasas (acompañadas con un inhibidor)
PENICILINAS
• Grupo 5: Carboxipenicilinas
• Radical grupo bencénico con un grupo ácido (sal)
• Sensibles a las β-lactamasas
• Estables a los ácidos (se absorben mal en el intestino)
• Grupo 6: Amidinopenicilina
• Radical de estructura compleja
PENICILINAS
• Las resistencias a penicilinas se pueden deber a:

1. Modificación o reemplazo de la prot. PBP por otra prot con la misma fX
2. Inactivación por β-lactamasas excretadas al medio extracel (G+) o al espacio periplásmico (G-). Las β-lactamasas son expresadas por
plásmidos.
3. Disminución de la permeabilidad por reducción de las porinas de la pared bacteriana (G-)
4. Presencia de bombas de expulsión activa del metabolismo.
MONOBACTAMOS
• Importantes en clínica
• No tienen el anillo tiazolídico de las penicilinas
• Acción exclusiva sobre G-
• Vía parenteral.
CEFALOSPORINAS
• Similares a las penicilinas estructuralmente

• El anillo tiazolídico de las penicilinas es sustituido por un anillo cefalosporánico
• Producidas por el hongo, Cephalosporium acrenomium (Primera cefalosporina, de una alcantarilla de Cerdeña)
• Ventaja sobre las penicilinas. La penicilina no es tóxica, pero producen alergias en algunas personas, en cambio las cefalosporinas no son
propensas a producir alergias. Personas sensibles a penicilina pueden utilizar cefalosporinas.
CEFALOSPORINAS
• Se clasifican en tres generaciones
• Primera generación:
• Tienen más actividad sobre G+ que sobre G-
• Sensibles al ácido
• Vía parenteral
• Ejemplo, Cefalotina
• Segunda generación:
• Resistentes al ácido
• Vía oral
• Actuación contra G+ y G-
• Ejemplo. Cefatricina
• Tercera generación
• Más efectivas sobre G- que sobre G+
• Resistentes a ácidos y β-lactamasas
• Ejemplo, Ceftriaxón
CEFAMICINAS
• Similares a las cefalosporinas.
• Producidas por una bacteria, Streptomyces lactamaduras
• Resistentes a las β-lactamasas
• Vida media larga
• Ejemplo, Cefoxitina
CLAVAMINAS
• Similares a las penicilinas, sin anillo tiazolídico (S-O)

• No destruyen la pared celular, pero inhiben la actividad de las β-lactamasas
• Producida por una bacteria, Streptomyces clavuligenes
CARBAPEDEMINAS
• Similares a las clavaminas

• Producidas por una bacteria, Streptomyces olivaceus
• Ejemplo, Ácidos olivánicos (E.coli/K.pneumoniae)
NOCARDINAS
• Producidas por una bacteria, Nocardia
OXACEFEMINAS
• Actividad frente G-
• Producen coagulación
• Uso restringido
ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR NO β-lactámicos
VANCOMICINA
• Es un glicopéptido, una parte de carbohidrato y otra de péptido
ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR NO β-lactámicos
BACITRACINA
• Antb polipeptídico, con una parte peptídica y otra parecida al anillo β-lactámico
• Producida por bacterias, Bacillus lincheniformis
ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA SÍNTESIS PROTEICA
AMINOGLUCÓSIDOS
TETRACICLINAS
• 4 ciclos en su estructura con 4 radicales diferentes
• Antb bacteriostáticos con actividad contra una amplia variedad de bacterias aeróbicas y anaeróbicas, G+ y G-.
CLORANFENICOL
• Aislado de la bacteria, Streptomyces venezuelae
• Bacterioestático
• Estructura con una anillo aromático y un grupo nitrobenceno y dos radicales de CI
MACRÓLIDOS
• Antb muy grandes y complejos
• Antibiótico bacterioestático (inhibe el crecimiento del microorganismo, no lo mata)
ANTIBIÓTICOS QUE ALTERAN LA MEMBRANA PLASMÁTICA
POLIMIXINAS
• Polipéptidos cíclicos básicos. Con un ácido graso unido

• Producidas por Bacillus polymyxa
• Tipos A, B, C, D y E (B y E las más utilizadas)
AGENTES QUIMIOTERÁPICOS O ANTIBIÓTICOS SINTÉTICOS
• Sustancias químicas que inhiben el crecimiento o destruyen a los microorganismos de una forma selectiva sin afectar al tejido humano.
• Sintetizados en el laboratorio por procesos químicos
• 1495, sales de mercurio, sífilis. Tratamiento peor que la enfermedad. Toxicidad
• Toxicidad selectiva. Sustancias químicas que solo afecten al microorganismo y no al hospedador. “Balas mágicas”
• Propiedades.
• Tener toxicidad selectiva.
• Ser difusibles por los tejidos para llegar al foco.
• Permanecer el tiempo suficiente (vida media larga a temperatura corporal).
• No interferir en el SI
SULFONAMIDAS
• Antb sintéticos
• Análogo estructural y antagonista del ácido p-aminobenzoico (PABA) necesario para la
producción de las purinas (G, A)
• Inhibe la división bacteriana y por tanto el crecimiento.
• Antb. Bacterioestático
• Administración vía oral
• Actúa contra Streptococcus (NO S. faecalis, resistencia), contra Chlamydia, N.meningitidis,
Mycobacterium tuberculosis
• Trimetropim. Análogo del DHF (ácido dihidrofólico). Usado en infecciones respiratorias,
urinarias e intestinales
QUINOLONAS
• Antb sintéticos, no producidos por microorganismos

• Actividad bactericida (matan al microorganismo)
• Interrumpen la reproducción bacteriana y la replicación de los ácidos nucleicos.
Bloquean la actividad del ADN girasa (giros) y de la topoisomerasa IV
(desenrolla)
• Se clasifican en 4 generaciones:
• Generación 1: frente a enterobacterias, de localización urinaria (Ácido
pipemídico)
• Generación 2: frente a bacilos G- aerobios (norfloxacino)
• Generación 3: frente a bacilos G- y cocos G+ aerobios (Levofloxacino)
• Generación 4: frente a bacilos G -, cocos G + aerobios y anaerobios
(Moxifloxacino)
MECANISMOS DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS
• MECANISMOS DE RESISTENCIA:
1. Inactivación enzimática.
2. Alteraciones de las barreras de permeabilidad.
3. Alteración de la diana.
Multirresistencia
• Las resistencias a antibióticos se pueden deber a:

1. Inactivación por β-lactamasas excretadas al medio extracel (G+) o al espacio
periplásmico (G-). Las β-lactamasas son expresadas por plásmidos.
2. Químicos que inactivan. Streptomyces
3. Disminución de la permeabilidad por reducción de las porinas de la pared
bacteriana (G-). Presencia de bombas de expulsión activa del metabolismo.
4. Cambio de estructuras del ribosoma.
5. Vías alternativas para cubrir las vías metabólicas afectadas.
6. Mecanismos por ataque químico o cambio estructural.

TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA
• Estudiar la sensibilidad antimicrobiana es una función de las más importantes en un laboratorio de

microbiología.
• La CMI, o concentración mínima inhibitoria, es la concentración más baja (en μg/ml) de un antibiótico
que inhibe el crecimiento de una determinada cepa bacteriana.
• S (sensible), I (intermedia) o R (resistente)
• Sensible. Significa que el crecimiento del microorganismo está inhibido a la concentración sérica del
fármaco que se alcanza utilizando la dosis habitual.
• Intermedia. Significa que el crecimiento del microorganismo está inhibido solamente a la dosis máxima
recomendada.
• Resistente. Significa que el microorganismo es resistente a los niveles séricos del fármaco que se
alcanzan normalmente. La concentración máxima de antimicrobiano permitida no elimina el
microorganismo.
• Antibiograma. Procedimiento que se utiliza en un laboratorio para determinar la sensibilidad de un

microorganismo ante diferentes antibióticos.
• Diferentes métodos en función de las necesidades respiratorias del microorganismo, la forma de incorporación
del antibiótico y el medio de cultivo empleado.
• Se clasifican en:
• Antibiogramas por difusión:
1. Difusión en disco-placa
2. Difusión Epsilon-test
• Antibiograma por dilución:
1. En medio sólido
2. En medio líquido.
MÉTODO DISCO-PLACA
• Sembrar en una placa de agar (Mueller-Hinton, general) un inóculo de microorganismo puro y colocar sobre ella discos impregnados con
antibiótico.
• El antb difunde por el agar radialmente formando un gradiente de concentración. Máx en las inmediaciones del disco. Menos a medida que
nos alejamos del mismo.
• Microorganismo sensible no crece en la inmediaciones. Halo de inhibición.
• Halo de inhibición se mide en mm con una regla. Valores estandarizados. Establecer S, R, I.
• No se puede determinar la CMI. Se pueden extrapolar en rectas de regresión de bacterias con CMI conocida.
• Método barato, rápido y fácil.
• Utilizado para bacterias aerobias y de crecimiento rápido.
MÉTODO DISCO-PLACA
• Procedimiento:
• De una placa de cultivo puro o de un vial de conservación se cogen o pican varias colonias.
• Realizar una suspensión a 0.5 Mc.
• Poner un inóculo de la suspensión sobre el agar Muller-Hinton.
• Siembra en superficie con asa Driglasky.
• Dejar secar el extendido.
• Colocar los discos impregnados con antb (conservados a 4ºC). Coger discos con pinzas estériles.
• Presionar disco sobre el agar, para fijarlo.
• Incubar la placa invertida a 37ºC (18-24 h).
• Lectura. Medir el diámetro del halo de inhibición. Agar transparente sobre el reverso, agar sangre la superficie.
• Medidas definidas y recomendadas por el CLSI (Clinical and Laboratory Standard Institute)
MÉTODO DISCO-PLACA

MÉODO ÉPSILON TEST
• Determina la CMI mediante difusión en placa. Lectura directa

• Utiliza una tira impregnada (6 cm de largo por 5mm de ancho) de antb en un rango de concentraciones establecidos e indicado con
precisión en la tira. 15 diluciones diferentes
• Protocolo de preparación igual que el método disco-placa
• Resultado, zona de inhibición elipsoidal y simétrica.
• CMI, punto en el que el extremo de la elipse de inhibición intersecciona con la tira (ug/ml)
• Métodos de dilución. Utilizan concentraciones crecientes del antimicrobiano, diluido en el

medio de cultivo
MÉTODO DILUCIÓN EN AGAR
• El antibiótico se inocula en diferentes concentraciones sobre el agar fundido.

• Medio utilizado Muller-Hinton
• La CMI es la menor concentración de antb que inhibe completamente el crecimiento
bacteriano
MÉTODO DILUCIÓN EN AGAR

MÉTODO DILUCIÓN EN CALDO
• Caldo Muller-Hinton suplementado con calcio y magnesio y un pH 7,2-7,4

• Dos tipos:
• Método de macrodilución
• Método de microdilución
MÉTODO MACRODILUCIÓN
• Se crece el microorganismo en una solución madre de caldo.

• Se preparan una serie de tubos con diferentes diluciones del antibiótico en un volumen de 1ml.
• Una vez preparadas las diluciones se añade 1 ml de la solución madre del microorganismo, quedando un Vf de 2 ml. Se observa la
turbidez CMI (tubo sin turbidez).
• Se siembra cada preparación en una placa de agar.
• Lectura de la concentración mínima bactericida (mínima cantidad de antb que destruye el 100 *100 de los microorganismos).
MÉTODO MICRODILUCIÓN
• Placa de microtitulación
• Cada pocillo es un tubo del método de macrodilución. Vf 200 ul.
• Lectura del CMI e interpretación.
• Paneles comercializados (más complejos y más caros). Mejor manuales
MÉTODO MICRODILUCIÓN
MÉTODO DE ANAEROBIOS
• Para anaerobios se usan los métodos de dilución en agar. Método de microdilución

• No se usan los métodos de difusión. Dan errores.
MÉTODO DE DILUCIÓN EN AGAR

• Permite estudiar la sensibilidad de bacterias anaerobias.
• Método igual que la dilución en agar de bacterias aerobias.
• Se realizan diferentes concentraciones de antibiótico y se mezclan con agar al 50%.
• Se vierte sobre una placa, se deja solidificar.
• Se inocula el microorganismo.
• Se incuba en anaerobiosis 48h.
• Se utiliza agar Wilkings-Chalgren o Agar Brucella suplementado con 5% de sangre de carnero.
• El caldo del inóculo tiene tioglicolato, elimina el oxígeno-
• Método de microdilución igual que en aerobios, sin agar.
MÉTODO DE ANAEROBIOS
MÉTODO DE DILUCIÓN EN AGAR

MÉTODO AUTOMATIZADOS
• Similar a los sistemas de pruebas bioquímicas, pero en lugar de sustratos de enzimas se disponen
diferentes concentraciones de antimicrobianos
• Resultados programas bioinformáticos
• Diferentes pruebas comerciales, Micro-Scan, Vitek

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Microbiología

La era de los antibióticos

Clasificación agentes antimicrobianos

• Atendiendo a su espectro de acción:

Clasificación agentes antimicrobianos

• Dependiendo de la consecuencia de su actividad:

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

• Grupo 2: Fenoxialquilpenicilinas o Penicilina V

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

• Grupo 3: Penicilina antiestafilocócicas

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

• Las resistencias a penicilinas se pueden deber a:

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

• Similares a las penicilinas estructuralmente

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

• Similares a las penicilinas, sin anillo tiazolídico (S-O)

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR β-lactámicos

• Similares a las clavaminas

• Producidas por una bacteria, Nocardia

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR NO β-lactámicos

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA PARED CELULAR NO β-lactámicos

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA SÍNTESIS PROTEICA

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA SÍNTESIS PROTEICA

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA SÍNTESIS PROTEICA

ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA SÍNTESIS PROTEICA

ANTIBIÓTICOS QUE ALTERAN LA MEMBRANA PLASMÁTICA

• Polipéptidos cíclicos básicos. Con un ácido graso unido

AGENTES QUIMIOTERÁPICOS O ANTIBIÓTICOS SINTÉTICOS

AGENTES QUIMIOTERÁPICOS O ANTIBIÓTICOS SINTÉTICOS

AGENTES QUIMIOTERÁPICOS O ANTIBIÓTICOS SINTÉTICOS

• Antb sintéticos, no producidos por microorganismos

MECANISMOS DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS

MECANISMOS DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS

• Las resistencias a antibióticos se pueden deber a:

MECANISMOS DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS

TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

• Estudiar la sensibilidad antimicrobiana es una función de las más importantes en un laboratorio de

TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

• Antibiograma. Procedimiento que se utiliza en un laboratorio para determinar la sensibilidad de un

TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

• Determina la CMI mediante difusión en placa. Lectura directa

TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

• Métodos de dilución. Utilizan concentraciones crecientes del antimicrobiano, diluido en el

MÉTODO DILUCIÓN EN AGAR

• El antibiótico se inocula en diferentes concentraciones sobre el agar fundido.

TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

MÉTODO DILUCIÓN EN AGAR

TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

MÉTODO DILUCIÓN EN CALDO