LINEA BASE DE

CORROSIÓN
INSTALACIONES DE
PETROTAL
RESUMEN
Los resultados obtenidos del contaje de bacterias cultivables
mesófilas y termófilas de SRB y APB del tipo planctónico y sésil Objetivo 2: Evaluar
menores de 102 NMP/ml, durante el periodo 26/11 al 10/12/2020, la susceptibilidad a la
parecieran indicar que la susceptibilidad a MIC por este tipo de corrosión microbiana
bacterias es bajo; debido a las altas temperaturas del agua asociada al
determinando la
crudo del Lote 95 de 90°C, desde el pozo productor hasta el pozo
concentración
inyector; sin embargo, si esta condición de alta temperatura no se
mantiene si es probable que se presente MIC por SRB mesófilas y se bacteriana de SRB y
requiera la inyección del biocida. APB y analizando la
dosis óptima del
Existen bacterias termófilas no cultivables del tipo arqueas biocida BIO 03-
reductoras de sulfato (SRA), que producen sulfuros en su proceso de CSMA.
reducción de sulfato y oxidación de la materia orgánica como las
Archaeoglobus que pueden crecer a altas temperaturas entre 60 y
95°C e igualmente, se conoce la existencia de bacterias Methanogens
despolarizantes catódicas. Amabas bacterias pueden generar MIC
bajo las condiciones de operación y proceso del agua asociada al
crudo del Lote 95; por lo tanto, es necesario realizar evaluaciones
complementarias mediante biología molecular y dependiendo de los
resultados, realizar la evaluación de la eficiencia del biocida contra
estas bacterias al igual que sus propiedades secundarias;
principalmente estabilidad térmica y compatibilidad con el inhibidor
de corrosión y el secuestrante de O2.

La mayor potencialidad a MIC se presenta en el tanque se agua fresca

y en el sumidero, con resultados de bacterias mesófilas planctónicas
mayores de 102 NMP/ml; por lo cual se evaluó el biocida BIO 03-
CSMA con un cultivo mixto aislado del sumidero, determinado dosis
óptima de 200 ppm con tiempos de contacto de 2 horas. Se
recomienda su inyección en estos puntos, con frecuencias a
determinar por el fabricante mediante evaluaciones de matanza en el
tiempo; de acuerdo con la norma NACE TM0194-2014.
www.internationalcorrosion.com RUC: 20545113296
Av. Andrés A. Cáceres 325-329 Edif. Los Girasoles interno 703-Surquillo
Movil: (0051) 958834175

PROYECTO

“LINEA BASE DE CORROSIÓN INSTALACIONES DE PETROTAL”

ORDEN DE SERVICIO 315201315

INFORME FINAL OBJETIVO 2

INCORS 001P-2021

Lima, Febrero 2021

1
 “LINEA BASE DE CORROSIÓN INSTALACIONES DE PETROTAL”

Objetivo 2:
Evaluar la susceptibilidad a la corrosión microbiana determinando la
concentración bacteriana de SRB y APB y analizando la dosis óptima del biocida.

INFORME FINAL
INCORS 002P2021

Dra. Matilde F. de Romero

Ing., MSc, PhD, Experta en Corrosión
NACE CERTIFICATION NUMBER ID: 8507
NACE member # 147143

MSc. Yureis Villasmil Ing. María Fernanda Romero

Especialista en Corrosión Electroquímica
NACE member #2540488

Lima, Febrero 2021

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2
 Lima, 15 de Febrero de 2021

Atención.
Ing. David Espinoza
Ingeniero de Integridad de Activos
PETROTAL
Lima-Perú

Ref. INFORME FINAL OBJETIVO 2 ORDEN DE SERVICIO 315201315:

Evaluar la susceptibilidad a la corrosión microbiana determinando la concentración
bacteriana de SRB y APB y analizando la dosis óptima del biocida.

Estimado ingeniero.

Ante todo reciban un cordial saludo. La presente tiene por finalidad hacerle entrega formal del informe final
revisado de la evaluación de la susceptibilidad a la corrosión microbiana de las instalaciones de
PETROTAL, determinando la concentración bacteriana de SRB y APB junto con el análisis de dosis óptima
del biocida actualmente empleado en planta BIO 03-CSMA.

A continuación las conclusiones y recomendaciones generadas producto de las evaluaciones realizadas

desde 26/11 al 10/12-2020.

Conclusiones

1. En operación normal desde el pozo productor hasta el pozo inyector y bajo las condiciones de altas
temperaturas del agua asociada al crudo del Lote 95 (aproximadamente 90°C), operado por
PETROTAL, la potencialidad de crecimiento de bacterias cultivables mesófilas y termófilas del
tipo SRB y APB es baja; por lo tanto, pareciera poco probable que se presente MIC por estas
bacterias. No obstante, si esta condición de alta temperatura no se mantiene si es probable que se
presente MIC por SRB y se requiera la inyección del biocida.
2. Se requieren evaluaciones con técnicas no convencionales como biología molecular para determinar
bacterias no cultívales del tipo Archaeoglobus y Methanogens y confirmar la baja susceptibilidad
a MIC a altas temperaturas en las instalaciones de PETROTAL, desde el pozo productor hasta el
inyector, y la necesidad de usar o no biocidas en condiciones normales de operación a altas
temperaturas.
3. Como era lo esperado los sistemas con mayor potencialidad a MIC por bacterias mesófilas SRB y
APB son los relacionados con el tanque de agua fresca y el sumidero.
4. El biocida BIO 03-CSMA funciona eficientemente por choque a una dosis de 200 ppm contra un
cultivo mixto de bacterias SRB y APB mesófilas extraído del agua contenida en el tanque sumidero.
5. La dosis de 200 ppm con 2 horas de contacto por choque puede considerarse como la dosis óptima
y eficiente que reduce el crecimiento de bacterias a los criterios de crecimiento aceptables menores
de 102NMP/ml. Es posible que esta dosis sufra un ajuste fino cuando el tratamiento con el biocida
sea aplicado en campo, bajo las condiciones reales de procesos.
 6. El punto de inyección del biocida antes del tanque skimmer es adecuado para el control de posibles
crecimientos bacterianos en el tanque skimmer y en el tanque de reposo; sin embargo, es necesario
revisar la compatibilidad con el secuestrante de O 2 e inhibidor de corrosión inyectados muy cerca
en la misma sección de tubería.

Recomendaciones

1. Realizar evaluaciones complementarias al agua de producción y de inyección que permitan la

caracterización microbiológica de bacterias termófilas no cultivables del tipo Archaeoglobus y
Methanogens, mediante biología molecular, y dependiendo de los resultados realizar la evaluación
de la eficiencia del biocida contra estas bacterias al igual que sus propiedades secundarias;
principalmente estabilidad térmica y compatibilidad con el inhibidor de corrosión y el secuestrante
de O2.
2. Instalar cupones de corrosión en las lineas de flujo y de inyección que permitan la formación de
biopelículas en campo y la determinación de bacterias sésiles junto con la eficiencia del biocida.
Adicionalmente, la obtención de depositos para la evaluación e identificación de los productos de
corrosión, la determinación de velocidad de corrosión por gravimetría y la morfología de ataque
para diferenciar los mecanismos de corrosión.
3. Iniciar el tratamiento del tanque de agua fresaca y sumidero inyectando por choque 200 ppm del
biocida BIO 03-CSMA con frecuencias a determinar por el fabricante mediante evaluaciones de
matanza en el tiempo. Este tratamiento debe ser aplicado en caso al agua de producción y de
inyección como contingencia en caso de generarse temperaturas óptimas de crecimientos de
bacterias mesófilas de SRB y APB.
4. Mantener siempre en control el crecimiento bacteriano en todas las instalaciones de PETROTAL
con valores ≤ 102 NMP/ml, para lo cual debe hacerse un monitoreo de bacterias SRB y APB usando
medios de cultivos especificos y/o evaluaciones mediante biología molecular.

Dra. Matilde F. de Romero

Ing., MSc, PhD, Experta en Corrosión
NACE CERTIFICATION NUMBER ID: 8507
NACE member # 147143

4
 Evaluación de la susceptibilidad a la corrosión microbiana determinando la concentración
bacteriana de SRB y APB y analizando la dosis óptima del biocida.

Objetivos Específicos

1. Evaluar la carga microbiológica en cuanto a bacterias SRB y APB en diferentes puntos de las
instalaciones de PETROTAL mediante la técnica de Número Más Probable.
2. Determinar la eficiencia y dosificación óptima del biocida BIO 03-CSMA usado en planta sobre
una biopelícula de bacterias sésiles.
3. Evaluar el sistema de inyección de biocida y la aplicación actual en campo.

Propósito:

Establecer línea base de susceptibilidad a la corrosión microbiana y evaluar la eficiencia del biocida y su
dosis óptima para asegurar la integridad de las instalaciones de PETROTAL desde el punto de vista de
corrosión microbiana.

1. INTRODUCCIÓN

La corrosión es uno de los principales problemas de integridad en las instalaciones de operaciones de

petróleo y gas, lo que genera costos significativos como resultado de las reparaciones y reemplazos, así
como por el uso de productos químicos para el control de la corrosión. En 2001, se estimó que estos costos
ascendían a 1.400 millones de dólares al año solo en EE. UU. Aproximadamente el 20% de los costos de
la corrosión se atribuyen a la Corrosión Inducida Microbiológicamente (siglas en inglés, MIC), es decir, de
la degradación del material a consecuencia de la actividad de microorganismos ambientales, que están
presentes en los sistemas de producción de petróleo y gas. Por lo general, las formas más profundas de
corrosión microbiana se han observado en ausencia de oxígeno o en sistemas anóxicos con solo exposición
intermitente al oxígeno. Una vez que se confirma o cuando sospecha de la presencia de microrganismos,
con el posible desarrollo del fenómeno de MIC en yacimientos petrolíferos, se requiere controlar mediante
la aplicación de biocidas con dosis por choque o continúa, según sea la necesidad1.

Ratificar la efectividad de los biocidas para controlar MIC en el campo es un desafío y pueden pasar muchos
meses antes de que se pueda confirmar la efectividad de un programa de tratamiento recientemente
implementado (es decir, tipo de biocida, concentración, tiempo de exposición y frecuencia de tratamiento).
Por lo tanto, la selección y calificación de biocidas en laboratorio se convierte en un componente importante
de cualquier programa sólido de mitigación de MIC. Por lo general, la selección y calificación de biocidas
se aborda a través de pruebas de eficiencia en contra de microorganismos, idealmente realizadas sobre
biopelículas cultivadas en aguas provenientes de un sistema representativo y evaluado con técnicas
adecuadas1.

PETROTAL, con el propósito de asegurar la integridad de las instalaciones desde el punto de vista de MIC,
generó la orden de servicio 315201315 “Línea base de Corrosión”; lo cual contempló 3 objetivos, siendo
el 2do relacionado a establecer una línea base de susceptibilidad a la corrosión microbiana y evaluar la
eficiencia del biocida y su dosis óptima. Para lograr este objetivo se seleccionaron 5 puntos de muestreo en
diferentes equipos de procesos con la finalidad de determinar la concentración bacteriana presente e
identificar los puntos más susceptibles a corrosión microbiana, seguidamente evaluar varias dosis de
concentración y tiempos de contacto que determinen la efectividad del Biocida BIO 03-CSMA actualmente
empleado en campo; y finalmente, la evaluación del sistema de inyección de biocida y su aplicación actual
en campo; estos temas de estudio serán objeto de este informe.

5
2. REVISIÓN TEÓRICA

2.1. Corrosión inducida Microbiológicamente, MIC2,3,4.

La corrosión inducida microbiológicamente (MIC) es el resultado de la presencia y/o actividades de

microorganismos y/o los productos que producen. Los microorganismos deben estar presentes para que
ocurra MIC; sin embargo, la presencia de bacterias por sí sola no significa que se esté produciendo el
mecanismo de MIC. Los factores que promueven la aparición de MIC incluyen velocidades de flujo
bajas, acumulaciones de depósitos, la presencia de agua y un mayor número de bacterias en las
biopelículas. Algunas de las bacterias son planctónicas, flotan libremente en los líquidos; otras son sésiles
y están unidas a las superficies del sistema y forman biopelículas, siendo estas más importantes que las
bacterias planctónicas en MIC.

La corrosión microbiana generalmente tiene lugar en presencia de consorcios microbianos que están
compuestos por más de un tipo de microorganismo fisiológico. Dependiendo del medio ambiente, estos
microbios pueden interactuar de formas complejas dentro de la estructura de las biopelículas. Basado en el
examen visual, el fenómeno de MIC no produce una forma o morfología de corrosión única; pero
normalmente se presenta de forma localizada acelerada. Una vez que se ha iniciado la corrosión localizada,
las reacciones microbianas pueden mantener condiciones adecuadas (por ejemplo, baja concentración de
oxígeno) para el crecimiento continuo de picaduras.

Una de las principales fuentes de microorganismos causantes de MIC son los lodos y depósitos
acumulados en tuberías, recipientes y otros equipos. Se ha descubierto que se puede formar una
biopelícula a partir de bacterias dentro de los depósitos de lodo en las tuberías de transmisión de petróleo,
lo que da como resultado una corrosión sostenida y severa. Tal lodo puede conducir al desarrollo de colonias
bacterianas, como las que se enlistan4 seguidamente; sin embargo, las más comunes y perjudiciales son las
SRB y las APB en la industria petrolera:

1. Bacterias reductoras de sulfato (por siglas en inglés, SRB)

2. Archaea reductora de sulfato (por siglas en inglés, SRA)
3. Metanógenos (MET)
4. Acetógenos
5. Fermentadores
6. Bacterias reductoras de hierro (por siglas en inglés, IRB)
7. Archaea reductora de hierro (por siglas en inglés, IRA)
8. Bacterias oxidantes de hierro (por siglas en inglés, IOB)
9. Bacterias oxidantes del manganeso (por siglas en inglés, MOB)
10. Bacterias productoras de ácido (por siglas en inglés, APB)

El diagnóstico de MIC se ha logrado tradicionalmente mediante la observación de tres evidencias: 1)

Morfologías de corrosión únicas, como picaduras localizadas; 2) Productos y depósitos de corrosión
específicos, como mackinawita, greigita y pirita de la corrosión relacionada con SRB; y 3) Presencia
de microorganismos causantes de corrosión o sus subproductos. Tradicionalmente, el diagnóstico de
MIC ha dependido del método de crecimiento dependiente del cultivo, como el método del número más
probable (NMP).5,6,7 Algunos microorganismos (por ejemplo, metanógenos) son extremadamente difíciles
de cultivar en condiciones de laboratorio. Por último, muchas muestras de una investigación de análisis de
falla por corrosión a menudo ya están comprometidas y no pueden analizarse mediante métodos
convencionales basados en el cultivo. Por lo tanto, los métodos de microbiología convencionales pueden
no proporcionar una evidencia crítica requerida para un diagnóstico firme de MIC, es decir, la presencia de
microorganismos causantes de corrosión en muestras de metal fallidas; un por ejemplo que daría mejor
información serían los métodos microbiológicos moleculares, como la secuenciación de ADN.
6
Algunos grupos específicos de microorganismos juegan un papel más importante en la corrosión
microbiana de estructuras metálicas. Los procariotas reductores de sulfato, incluidas las bacterias SRB
y las archaea SRA, se han aislado de una amplia gama de tuberías y entornos subterráneos que
contienen petróleo, y se consideran ampliamente como los microorganismos causantes de corrosión
más agresivos en varios entornos. Además, las APB y las bacterias oxidantes de hierro (IOB) también se
consideran bacterias agresivas que causan la corrosión. Las metanógenas, MET, por su parte consumen
hidrógeno de la superficie de los metales, mejoran la reducción catódica de protones y, por lo tanto, aceleran
la disolución anódica del metal (despolarización catódica).8

2.2. Microorganismos comúnmente asociados con MIC en la industria petrolera7,8,9

Para facilitar la discusión, los microbiólogos suelen agrupar las bacterias de acuerdo con la tolerancia
del organismo al oxígeno, la forma, la temperatura óptima de crecimiento o el metabolismo. Las
bacterias que utilizan oxígeno en su metabolismo se denominan bacterias aeróbicas estrictas u obligadas.
Por el contrario, las bacterias anaeróbicas obligadas no crecen en presencia de oxígeno. Los anaerobios
facultativos funcionan en presencia o ausencia de oxígeno, y los microaerófilos usan oxígeno, pero
prefieren niveles bajos. Es común encontrar bacterias con diferentes requerimientos de oxígeno
coexistiendo en un mismo sistema y en los mismos depósitos. Adicionalmente, se suelen agrupar las
bacterias de acuerdo con la forma del cuerpo celular de la bacteria (morfología). Las bacterias tienen forma
de varillas (Bacilo), varillas curvas (Vibrio), varillas curvas tipo sacacorchos (Spirillum) y esferas (Cocos).

Una tercera forma en que las bacterias se agrupan es por la temperatura óptima a la que crecen. Las
bacterias termófilas tienen tasas de crecimiento máximas a temperaturas superiores a 50 °C (122 °F).
Los mesófilos crecen mejor en el rango de temperatura media de 20 a 37 °C (68 a 99 °F). Otros
organismos llamados psicrófilos solo crecen bien cerca de temperaturas bajo cero de 4 a 10 °C (39 a
50 °F). Si bien cada especie de bacteria crece a una temperatura óptima, también puede adaptarse y
crecer a temperaturas fuera de los rangos enumerados anteriormente. De hecho, la mayoría de las
especies tienen la capacidad de crecer en un rango de temperaturas de 40 ° C (72 ° F). Los parámetros
del sistema como la disponibilidad de nutrientes, pH, salinidad y presión también pueden alterar la
temperatura de crecimiento óptima para una cepa particular de bacterias. Por último, las bacterias a
menudo se agrupan de acuerdo con los nutrientes que el organismo utiliza para el crecimiento y la
reproducción, las vías bioquímicas por las que el organismo obtiene energía o los productos químicos
finales que el organismo elimina.

Si se identifican bacterias, normalmente se les asigna un género y un nombre de especie. Estos nombres
aparecen juntos como dos palabras, la primera se refiere al género y la segunda a la especie. Como ejemplo,
Desulfovibrio desulfuricans es un nombre específico de un tipo de bacterias SRB.

Algunas de las bacterias más comunes en los sistemas de crudo, se mencionan a continuación:

• Bacterias Productoras de Ácidos Orgánicos (APB)

Son aerobias facultativas; es decir que pueden crecer tanto en medios aerobios como anaerobios
siendo realmente bien perjudiciales cuando entran en contacto con la superficie metálica (Figura
1). Muchas bacterias APB producen ácidos orgánicos e inorgánicos durante su metabolismo. Ejemplos
de las mismas son el Clostridium aceticum anaeróbico que produce ácido acético y el Thiobacillus
thiooxidans aeróbico estricto que produce ácido sulfúrico. Thiobacillus sobrevive en ambientes ácidos
con pH entre 0 y 4, pero el pH óptimo para el crecimiento es 2.5. Se ha informado que los Thiobacillus
se encuentran con mayor frecuencia en tanques de almacenamiento y piernas de plataformas. Los
ácidos excretados por las APB quedan atrapados debajo de los depósitos bacterianos y promueven la
corrosión de una variedad de metales al eliminar las películas de óxido pasivante de la superficie.
7
La mayoría de los productos finales de las bacterias APB son ácidos grasos de cadena corta (por
Ejemplo: Ácidos acético, fórmico y láctico). El papel de las bacterias APB en MIC es controversial.
Pope y col10. Propusieron que las bacterias APB producen ácidos orgánicos biogénicos que son
directamente responsables de la corrosión en ausencia de SRB. Jack y col11 informaron que la función
principal de las bacterias APB es proporcionar el medio ambiente y los nutrientes para el crecimiento
de SRB. Otras especies bacterianas pueden producir ácidos inorgánicos agresivos, como el ácido
sulfúrico (H2SO4), en ambientes aeróbicos. Los microorganismos pueden generar concentraciones
localmente altas de dióxido de carbono (CO2). El dióxido de carbono se disuelve en el agua y produce
ácido carbónico. La solución de ácido carbónico es corrosiva para los aceros de las tuberías y puede
provocar corrosión general, picaduras y agrietamiento por corrosión bajo tensión.

Figura 1. Ejemplos de corrosión inducida microbiológicamente por APB.

Fuente: NORRIS Dover Company12.

• Bacterias Reductoras de Sulfato (SRB)

Las bacterias SRB son uno de los tipos de bacterias más comunes y problemáticas en los sistemas de
campos de petróleo y gas. Aunque son estrictamente anaeróbicas, las bacterias SRB pueden
persistir y sobrevivir en sistemas que contienen oxígeno disuelto. Por lo general, se encuentran en
aguas estancadas en piernas muertas de tuberías, fondo de pozos y debajo de depósitos de incrustaciones
y otras bacterias. También se encuentran como bacterias que flotan libremente (planctónicas) en aguas
turbulentas. Las bacterias SRB toleran un amplio rango de pH de 5 a 9.5, pero algunas salmueras de
yacimientos petrolíferos son demasiado salinas para favorecer el crecimiento activo; Postgate13 afirma
categóricamente que las bacterias reductoras de sulfato “se encuentran en aguas naturales de
todas las salinidades desde casi cero hasta la saturación”, que es 357,000ppm o casi 36% en agua
fría, y más alta en agua caliente. La mayoría de las cepas de SRB crecen mejor a temperaturas
entre 25 y 35 °C (77 y 95 °F), pero algunas cepas termofílicas funcionan a temperaturas superiores
a 60 °C (140 °F). Desulfovibrio, Desulfobacter y Desulfotomaculum son tres géneros comunes de SRB.

Si bien las SRB a menudo difieren en apariencia o en las sustancias que metabolizan, todos oxidan
compuestos orgánicos a ácidos orgánicos o CO2 al reducir los iones sulfato a iones sulfuro a través de
la respiración anaeróbica. En ausencia de iones sulfato, las SRB también puede respirar mediante la
reducción de sulfito y otros iones que contienen azufre. Los iones de sulfuro que se producen durante
el proceso de respiración pueden reaccionar con el hierro disuelto para producir depósitos negros de
sulfuro de hierro, o con iones de hidrógeno para formar sulfuro de hidrógeno venenoso (H2S). La
presencia de sulfuro de hierro o H2S en los sistemas de campo causa problemas operativos. Estas
bacterias son causantes de ataques localizados severos (Figura 2).

8
 Figura 2. Morfología de ataque del acero al carbono a las 24 horas en presencia de las SRB
D. desulfuricans (arriba) y D. termitidis (abajo). Mag: 1000X.
Fuente: De Romero, M., Ocando, L. (2015). La Corrosión Microbiológica: Aspectos
Básicos, Casos y Experimentos. Curso Teórico-Práctico7

• Otros microorganismos asociados a MIC3,9

Si bien es cierto que las SRB y las APB son las bacterias más estudiadas y asociadas a los fenómenos
de MIC en la industria petrolera, pueden no ser las únicas como ya se había mencionada anteriormente.
A continuación otras familias de bacterias y microrganismos que también generan problemas en los
yacimientos petrolíferos.

Archaea: son microorganismos unicelulares genéticamente distintos de las bacterias y eucariotas

(hongos), que a menudo habitan en condiciones ambientales extremas. Las archaea incluyen halófilos
(microorganismos que pueden habitar ambientes extremadamente salados), metanógenos
(microorganismos que producen metano) y termófilos (microorganismos que pueden prosperar
en ambientes extremadamente calientes); estás últimas están referidas a temperaturas superiores
a los 50 °C, como se mencionan en la clasificación inicial por temperaturas y varios artículos
internacionales.

Los halófilos extremos se han aislado de diversos entornos de salmuera en el mundo. Estos
halófilos extremos son en su mayoría anaeróbicos e incluyen especies de bacterias reductoras de
sulfato, como Desulfovibrio halophilus y Desulfohalobium retbaense, que son capaces de crecer a
18 y 25% de NaCl, respectivamente. Bacterias fermentativas, metanógenos y bacterias
fototróficas oxidantes del azufre de crecimiento al 25% de sal o más14.

Las archaea reductoras de sulfato (SRA) son como las bacterias SRB, obteniendo su energía oxidando
compuestos orgánicos o hidrógeno molecular (H2) mientras reducen los sulfatos a sulfuros,
especialmente a sulfuro de hidrógeno. Las SRA consisten en el género Archaeoglobus. La formación
de H2S por la actividad de SRA puede tener efectos profundos en términos de contaminación del
yacimiento, amenazas a la salud / seguridad / medioambientales y degradación de materiales.

9
Archaeoglobus: son microorganismos que crecen a altas temperaturas entre 60 y 95 °C.3 Son
arqueas reductoras de sulfato (SRA), que combinan la reducción de sulfato a sulfuro con la oxidación
de muchas fuentes de carbono orgánico diferentes, incluidos los polímeros complejos. Se han aislado
especies de Archaeoglobus de reservorios de petróleo y sistemas de producción. Este grupo de
microorganismos normalmente no se mide con las técnicas de cultivo.

Metanógenos: son microorganismos que producen metano como subproducto metabólico en

condiciones anóxicas. Se clasifican como Archaea y están involucradas en MIC al consumir hidrógeno
en la superficie del metal y por lo tanto crear un proceso de despolarización. Algunos son extremófilos
y se encuentran en entornos como sistemas de yacimientos petrolíferos, fuentes termales y respiraderos
hidrotermales submarinos, así como en la roca sólida de la corteza a kilómetros por debajo de la
superficie. Los metanógenos son comunes en los sistemas de producción de petróleo.3

Bacterias oxidantes del hierro: también se conocen como bacterias depositantes de hierro y bacterias
relacionadas con el hierro (IRB). Estas bacterias microaeróbicas pertenecen a uno de los géneros
Galionella, Siderocapsa, Sphaerotilus, Crenothrix, Leptothrix o Clonothrix. Las bacterias oxidantes
del hierro son bacterias filamentosas, que generalmente se encuentran en montículos hemisféricos,
denominados tubérculos, sobre hoyuelos en las superficies de acero. La presencia de agua de color
óxido y depósitos de limo amarillo anaranjado generalmente sugieren la presencia de oxígeno o
químicos oxidantes; sin embargo, estos resultados a veces son causados por bacterias oxidantes del
hierro. En los sistemas de yacimientos petrolíferos, se informa que las bacterias oxidantes del hierro se
encuentran en tanques abiertos, pozos de suministro, filtros, líneas, equipos y en pozos de inyección.

Las bacterias oxidantes del hierro derivan su nombre del hecho de que respiran oxidando el
hierro (II) en hierro (III). Muchos de estos organismos también pueden obtener energía oxidando
iones manganeso (II) a iones manganeso (III). En las salmueras de los campos petrolíferos, el hierro
(III) forma hidróxido férrico y cloruro férrico que se acumulan en los tubérculos (Figura 3). Además
de ser agresivamente corrosivo para el acero inoxidable austenítico (SS) y el acero al carbono (CS), el
cloruro férrico se deposita en el tubérculo y establece un entorno anaeróbico en el que la SRB puede
prosperar.

Figura 3. Reacciones posibles debajo de los tubérculos creados por bacterias oxidantes del hierro
cuando en presencia de oxígeno.
Fuente: NACE International Publication 31205 (Item No. 24227).”Selection, Application, and
Evaluation of Biocides in the Oil and Gas Industry”. Pag.5.9

10
 Bacterias oxidantes del azufre: las bacterias del género Thiobacillus, de las que existen varios tipos,
pertenecen a un grupo inusual de microorganismos aeróbicos llamados quimiolitótrofos. Estos
organismos obtienen energía no por oxidación de compuestos orgánicos, sino por oxidación de
compuestos de azufre inorgánicos (incluidos los sulfuros) a ácido sulfúrico. Los organismos acumulan
su material celular mediante la fijación de dióxido de carbono. El producto final es ácido sulfúrico. El
Thiobacillus sobrevive en ambientes ácidos con pH entre 0 y 4, pero el pH óptimo para el crecimiento
es 2.5.

Además de Thiobacillus, existen varios tipos de esta bacteria que no producen ácido. La Beggiatoa,
uno de los oxidantes de azufre más conocidos, oxida el H 2S para producir un limo gris característico
que contiene azufre elemental. Las bacterias son difíciles de cultivar en medios de laboratorio y
generalmente se detectan mediante examen microscópico. El Chlorobium y Chromatiumson son cepas
de bacterias oxidantes de azufre anaeróbicas que requieren luz solar para realizar la fotosíntesis.

Cuando se realiza una caracterización completa de carácter microbiológico en un sistema se puede

discriminar las bacterias que causan problemas, (por ejemplo, problemas de agriamiento de H 2S producto
del metabolismo de las bacterias). En la siguiente Tabla 1, a manera de ejemplo se muestra una gama de
bacterias que se identificaron, caracterizaron y asociaron a MIC, según el trabajo realizado por Vic Keasler
y Col15. Dicha Tabla provee de información importante sobre efectos y metabolismos nocivos que generan
estas bacterias asociadas a MIC, y que pueden generar problemas si las mismas están presentes y activas.

Tabla 1. Especiación de bacterias en muestras sólidas y líquidas15

2.3. La Biopelícula y su formación7.

En ecosistemas naturales, la población microbiana es controlada, en gran medida, por la naturaleza del
sustrato y los nutrientes disponibles en el medio. En superficies metálicas, ésta depende de la naturaleza
química del sólido y de la fase líquida con la cual está en contacto. Entonces, en “hábitats” naturales
muy deficientes de nutrientes, como los suelos y el agua, las superficies metálicas ofrecen una
condición adecuada, al actuar como depósitos donde se encuentran los niveles de nutrientes
adecuados para sustentar el crecimiento bacteriano mediante la formación de una biopelícula; la cual
no es más que una interfase bio-orgánica entre el metal y la solución constituida por un material polimérico
que sirve de adhesivo de poblaciones bacteriana.
11
La biopelícula contiene un exopolímero (Estructura celular polimérica-EPS) que cumple con una serie de
funciones de importancia vital para los microorganismos que habitan en ella. Además de servir como
anclaje, ésta atrapa los nutrientes suspendidos en el cuerpo de la solución y los hace accesible a las bacterias;
protege a los microorganismos de moléculas antagónicas (biocidas, surfactantes, antibióticos, etc.) las
cuales son capturadas por los exopolisacáridos retardando o eliminando su acción, así como también la de
los predadores y bacteriófagos. El exopolímero ha sido caracterizado como una cadena larga de
polisacáridos formada por una enzima bacteriana llamada polimerasa.

El proceso de formación de la biopelícula es un tanto complejo y depende de un gran número de factores.

En términos generales, la formación de la biopelícula es un proceso que ocurre en dos fases, una reversible
y la otra irreversible. Comúnmente se puede dividir en tres etapas: Adhesión, Crecimiento y
Desprendimiento (Figura 4):

Figura 4. Diagrama esquemático del proceso de formación de la biopelícula

(Fuente: “Center for Biofilm Engineering, Montana State University”).

Etapas de formación de Biopelícula: 1) Las bacterias que flotan libremente, o planctónicas, encuentran
una superficie y en cuestión de minutos pueden adherirse. Comienzan a producir sustancias poliméricas
extracelulares viscosas (EPS) y a colonizar la superficie. 2) La producción de EPS permite a la comunidad
emergente de las biopelículas desarrollar una estructura tridimensional compleja que está inducida por una
variedad de factores ambientales. Las comunidades de biopelículas pueden desarrollarse en cuestión de
horas. 3) Las biopelículas se pueden propagar mediante el desprendimiento de grupos de células grandes o
pequeños. Cualquiera de los tipos de desprendimiento permite que las bacterias se adhieran a una superficie
y/o una biopelícula aguas abajo de la comunidad original.

2.4. Métodos de mitigación para controlar MIC por tratamiento químico3,7,9.

El uso de productos químicos tales como inhibidores de corrosión, secuestrantes, biocidas, inhibidores de
incrustaciones y parafinas y dispersantes de asfáltenos se considerarán para controlar la corrosión interna.
Su selección se basará en el estado de la tubería y la presencia de componentes corrosivos como agua,
gases ácidos, bacterias, etc. Los mecanismos de corrosión específicos que afectan la tubería deben
entenderse de manera que se seleccione el producto químico adecuado. La selección de sustancias
químicas debe basarse en pruebas de laboratorio y de campo apropiadas para determinar la dosis y
la sustancia química correctas.

El tratamiento químico se lleva a cabo mediante tratamiento por choque (intermitente) o inyección continua,
o mediante una combinación de dos métodos. El método de tratamiento debe decidirse en función del
estado de la tubería, la velocidad del fluido, la corrosividad de los fluidos, programa de
mantenimiento y logística con respecto al servicio de línea o equipos.

Los productos químicos deben ser compatibles con el fluido del proceso y otros aditivos y los
materiales de construcción. Las consideraciones adicionales para la selección química incluyen la
facilidad de manejo e inyección y los posibles efectos adversos en los procesos posteriores. Las pruebas de
12
laboratorio, las pruebas de campo, la experiencia en la industria y las recomendaciones de los fabricantes
de productos químicos son de gran importancia para evaluar los productos químicos en cuanto a su
efectividad, grado de solubilidad, compatibilidad o dosis de inyección requeridas.

Cuando se trata de mitigar MIC, la biopelícula es fundamental para el inicio del fenómeno, su
eliminación también debe ser un objetivo principal al momento de utilizar un tratamiento con
biocidas. Tidwell, y col16, advierten que se puede lograr una falsa sensación de seguridad ya sea confiando
en matar solo las bacterias planctónicas o usando pruebas no visuales para determinar la eficacia biocida
para eliminar las bacterias sésiles. Si la biopelícula se mata pero no se elimina, persiste el riesgo de corrosión
bajo depósito. Por lo tanto, depender de las estadísticas de muerte bacteriana, en lugar del control del
desarrollo de biopelículas, en la industria del petróleo y el gas puede ser engañoso y dar una falsa impresión
de efectividad del biocida.17 Se ha demostrado que el control de biopelículas en superficies no solo es la
herramienta más efectiva para mitigar MIC, sino también para mantener la transferencia de calor, como por
ejemplo: en los intercambiadores de calor.18 Además, en el monitoreo bacteriano, se debe tener cuidado
de no utilizar las muertes planctónicas como una indicación de éxito similar para los sésiles. Las
muestras planctónicas y sésiles tomadas del mismo lugar pueden ser tan diferentes entre sí como las
muestras obtenidas de otros lugares.

BIOCIDAS7,9

Uno de los métodos de control de la corrosión microbiana es mediante tratamiento químico,

específicamente con el uso de Biocidas. La aplicación de biocidas debe considerarse cuando la corrosión
inducida microbiológicamente se ha identificado como el mecanismo primario de corrosión interna. Un
buen biocidas debe distinguirse por poder alcanzar la superficie de la tubería para matar las
bacterias que están causando MIC (bacterias sésiles).

Un biocida puede ser Oxidante o No Oxidantes. En la industria del petróleo y del gas lógicamente se utilizan
los No Oxidantes por tener un efecto de matanza específico en las bacterias solamente. En términos
generales, se puede decir que un biocida actúa sobre un sistema industrial lo que un antibiótico a un ser
humano, por lo cual su selección debe realizarse cuidadosamente y su aplicación bajo continua supervisión
y control. El modo de acción de los biocidas No Oxidantes, es a través del envenenamiento de las enzimas
y desnaturalización de las proteínas de las células o como agentes tensoactivos, a través de una porción
hidrofílica y una hidrofóbica que permite su inserción dentro de la membrana lipídica.

La efectividad de los biocidas contra la población planctónica no necesariamente es la misma que

para la población sésil (causantes de la corrosión). Se ha demostrado que los compuestos de
gluteraldehido, formaldehido, cloruro de dodecildimetil amonio y mezclas de isotiazolinas son efectivos
para eliminar bacterias planctónicas, pero su efectividad disminuye para poblaciones de bacterias sésiles,
ya que los microorganismos generan resistencia a los diferentes tratamientos empleados, por lo que muchas
veces, a pesar de haber realizado una evaluación inicial, es necesario realizar continuas evaluaciones con
diferentes principios activos y/o dosificaciones y así disponer de un tratamiento adecuado para un sistema
dado, siendo recomendable su evaluación a nivel de laboratorio. Además, los sistemas de prueba de
laboratorio deben examinarse en busca de evidencia de incompatibilidad biocida/agua con otras químicas
de tratamiento. Sin embargo, la compatibilidad aparente en estos sistemas de laboratorio no excluye
problemas de incompatibilidad en el sistema de campo.

Envenenadores de enzimas y desnaturalizadores de proteínas (No oxidantes)

• Actúan sobre los Citocromos (enzimas transportadoras de electrones dentro de las células).
• Preferidos desde el punto de vista ambiental
• Se incorporan sobre ciertas pinturas y revestimientos porque tienen naturaleza hidrofóbica.
13
 • Algunos biocidas de este tipo son los bistiocianatos y algunas sales de metales pesados como Cu y Zn.
• También se encuentran dentro de este grupo, las Isotiazolinas, Merbamatos, Metronitazoles, que
reaccionan con el grupo “Tio” dentro de las proteínas y parece afectar la estructura de la membrana.
• Los aldehídos se ubican también dentro de este grupo: Formaldehidos, Gluteraldehido y Acroleina.
• Sales Cuaternarias de Fosfonium: THPS (Sulfato de Terakis Hidrometil Fosfonio).

Agentes Surfactantes

• Actúan sobre las superficies de las células causando su destrucción (lisis celular).
• Tienen una porción hidrofílica y una hidrofóbica que permite su inserción dentro de la membrana
lipídica.
• Los compuestos o sales de amonio cuaternarios se encuentran dentro de este grupo.
• Son estables en un amplio rango de pH y son llamados “ambientalmente amigables”.

Los biocidas comerciales por lo general contienen varios compuestos químicos y la cantidad de químico
presente que realmente tiene poder biocida se expresa como porcentaje de ingrediente activo. Esto es lo que
verdaderamente influye en el precio del producto y en la concentración necesaria para el control microbiano.

Biocidas No Oxidantes más comunes

• Aminas cuaternarias y fílmicas

El tipo de biocida más antiguo y utilizado en los sistemas de campos de petróleo y gas son las aminas
fílmicas. Esta clase de biocidas incluye sales grasas de di-amina. Las aminas cuaternarias (quats) contienen
nitrógeno que está unido a cuatro grupos químicos en lugar de los tres normales, por ejemplo, como en el
amoníaco. Por lo tanto, los quats tienen carga catiónica. Los quats vienen en muchos tipos y descripciones,
desde el cloruro de alquildimetilbencilamonio (ADBAC) más antiguo y utilizado, hasta los quats de di-
alquilo ligeramente más nuevos, como el cloruro de didecildimetilamonio (DDAC). Más recientemente,
también se han introducido quats de di-alquilo ramificados. Esta clase incluye las moléculas de di-acetato
de cocodiamina di-funcional y cloruro de oxidietilenbis (alquildimetilamonio). Las propiedades de estos
productos pueden variar sustancialmente en la tendencia a la formación de espuma, la tolerancia a la sal y
la eficacia biocida.

Dosificación: 5 – 50 ppm, pH: 6,5 – 9,5.

Organismos sobre los que actúa: varias clases de bacterias, algas y hongos.
Compatibilidades e Incompatibilidades: Debido a la actividad natural superficial de estos compuestos pueden
ser fácilmente inefectivos en sistemas altamente ensuciados con lodos, aceites y depósitos; así como también,
en aquellos sistemas con alta salinidad y compuestos aniónicos, de allí que estas sales pueden precipitar en
presencia de alto de contenido de calcio.

• THPS
El Sulfato de Tetrakis Hidroximetil Fosfonio (THPS) es un biocida de amplio espectro no espumante que
es menos tóxico para las especies acuáticas y marinas que otros biocidas actualmente registrados para uso
en campos de petróleo y gas. Las bacterias son destruidas por la interrupción de las proteínas en la
membrana celular bacteriana y la inhibición de la actividad de la enzima catalizadora de la deshidrogenasa
lactasa.

Dosificación: Los productos de aplicación de campo típicamente contienen 20% en peso a 35% en peso de
THPS, pero las formulaciones con 75% en peso de THPS también están registradas y disponibles
comercialmente.
Bajo ciertas condiciones, el THPS puede disolver el sulfuro de hierro en aguas producidas, pero las
14
propiedades biocidas del THPS no se ven afectadas por la presencia de H2S. Existen historias de casos
sobre el uso de THPS en diversas aplicaciones de campo de petróleo y gas.
pH: 7 – 10.
Organismos sobre los que actúa: funciona de manera rápida y efectiva sobre bacterias y algas, especialmente
sobre las SRB.
Compatibilidades e Incompatibilidades: Es compatible con la mayoría de los tratamientos químicos para agua,
excepto con halógenos y compuestos oxigenados. El THPS es una especie catiónica por lo cual reacciona con
todas las especies aniónicas presentes, así como también absorbe los contaminantes orgánicos y reacciona con
el sulfuro de hierro. Presenta un buen sinergismo con compuestos de amonio cuaternario.

• Biocida Gluteraldehido
El gluteraldehído (1,5-pentanedial) es un di-aldehído que ha ganado una amplia aceptación como biocida
de amplio espectro en la industria del petróleo y el gas. La amplia actividad del biocida se atribuye a la
capacidad del di-aldehído para reticular amina celular primaria como residuos de lisina en la pared celular
bacteriana. Los productos de aplicación de campo típicamente contienen 25% en peso o 50% en peso de
gluteraldehído en agua, pero hay otras formulaciones registradas que están disponibles comercialmente. El
gluteraldehído reacciona con el amoníaco, las aminas primarias y el H 2S y puede desactivarse. La reacción
de H2S con gluteraldehído, sin embargo, es significativamente más lenta que la reacción de H2S con otros
aldehídos. Debido a que los secuestrantes de oxígeno contienen bisulfito de amonio también pueden
reaccionar y aumentar la demanda del sistema de gluteraldehído, el producto generalmente se
inyecta aguas abajo del secuestrante de oxígeno, o la alimentación del secuestrante de oxígeno se
apaga durante el tratamiento con biocida. El gluteraldehído es eficaz tanto en ácido como ácido como
en pH básico, pero la tasa de muerte es a menudo aproximadamente 20 veces más rápida a pH 8.5 que a pH
5. En todos los niveles de pH, la tasa de muerte es más rápida a temperaturas más altas y concentraciones
más altas.

2.5. Evaluación de eficiencia de biocidas sobre bacterias sésiles7.

Para evaluar una aplicación de un biocida a nivel de campo, se realizan pruebas de matanza de bacterias
sésiles a nivel de laboratorio que permitan medir la efectividad de uno o varios productos químicos. Esta
evaluación tiene como objetivo principal hacer coincidir las condiciones de prueba con las que prevalecen
en el sistema de estudio. Para esta evaluación se toma como referencia la norma NACE TM0194-2014:
“Field Monitoring of Bacterial Growth in Oil and Gas Systems”19, la publicación del 2015, bajo el No.5793
con el título “Evaluation of Non-oxidizing Biocides to Control Sulfate-Reducing Bacteria on a Produced
Water Injection Plant”9 y el paper “Non-oxidizing Biocide to Control Sulfate-Reducing Bacteria on a
Produced Water Injection Plant”20. Esta evaluación de biocida debe realizarse por duplicado, como mínimo.

Algunas de las consideraciones para los montajes de estas pruebas de eficiencia contra bacterias sésiles, se
tienen a continuación:

1. La evaluación “Sessile Kill Test” propiamente, se puede realizar con cupones de corrosión de campo
con biopelícula de microorganismos formados, o en su defecto, generar una biopelícula con
bacterias extraídas del campo a evaluar a nivel de laboratorio, sobre un sustrato metálico similar al
sistema de estudio. Las condiciones de prueba deben ser lo más similares posible a las que
prevalecen en el sistema. Por ejemplo, para sistemas anaeróbicos (típicos), las pruebas deben
realizarse bajo condiciones anaeróbicas.

2. Para las pruebas de eficiencia de laboratorio, las bacterias sésiles crecidas sobre los cupones deben
exponerse a biocidas, ya sea en condiciones estáticas (prueba de frascos estancados) o al colocarse
en un lazo de flujo dinámico. Para el caso de la evaluación de PETROTAL el procedimiento
desarrollado fue mediante la prueba con frascos estancados.
15
 3. Las bacterias utilizadas para evaluar a los biocidas deben ser de la población que normalmente se
encuentre en el fluido de análisis.

4. El volumen de la solución del biocida agregada a la evaluación de ensayo debe ser la cantidad
calculada para proporcionar la dosis que se espera sean útiles en el sistema.

5. Los tiempos de exposición del biocida (tiempo de contacto) deben ser consistentes con los tiempos
de contacto probables para el biocida dentro del sistema en campo.

La experiencia de campo ha demostrado que las pruebas de laboratorio pueden servir como guía
para la aplicación en campo del biocida. Por lo tanto, la efectividad del biocida debe confirmarse una
vez que el producto químico se agrega al sistema de campo real. Casi siempre se requiere un ajuste
fino de la dosis de biocidas. Además, los problemas de compatibilidad del biocida pueden no ser
evidentes hasta que se realicen ensayos de campo; pero las pruebas de laboratorio, permiten
reconocer y dar las primeras impresiones de cómo se comportan los productos químicos.

2.6. Identificación y enumeración de microorganismos bacterianos.

2.6.1. Método de dilución seriada7,19,21.

En el método de dilución seriada para un cultivo bacteriano transfiere porciones cada vez más
pequeñas del fluido original a cada vial sucesivo. Esto se logra mediante un esquema de dilución
escalonada 1:10 hasta que no se transfieren bacterias. El medio de crecimiento en los viales de dilución
en serie proporciona nutrientes para el crecimiento de las bacterias transferidas, provocando un
cambio visible en el vial respectivo. Por ejemplo, la turbidez (nubosidad) en los viales heterotróficos de
recuento general (GHB), un cambio de color de rojo a amarillo en los viales de rojo fenol (APB) y un
precipitado negro en los viales de reductoras de sulfato (SRB). El vial final de una serie de diluciones para
mostrar estas condiciones debe ser el vial que recibió entre 1 y 10 bacterias y representa el factor de dilución
necesario para reducir el inóculo original a estas concentraciones. Multiplicar por el factor de dilución da
el número aproximado de bacterias por ml presentes en la muestra original. Para la validez estadística,
esta prueba se realiza con réplicas y la estimación de la población se deriva de una Tabla estadística
o Número Más Probable (NMP).

En el método de dilución seriada el primer vial de medio de una serie se inocula con 1 ml de la muestra de
campo. Después de mezclar a fondo, se agrega 1 ml de la muestra del primer vial al segundo vial de medios
de la serie. Después de mezclar bien, se extrae 1 ml del segundo vial y luego se agrega al tercer vial de la
serie. Este proceso de dilución secuencial se repite con los viales restantes de la serie. Un total de seis a
ocho viales de medios suelen ser suficientes para enumerar las bacterias en todos los sistemas, excepto en
los más sucios. La serie completa de viales de medios generalmente se incuba a una temperatura
dentro de los ±5 ° C (9 °F) de la temperatura del sistema durante 7 días (bacterias aeróbicas y
anaerobias facultativas) o de 14 (APB) a 28 días (SRB), según el tipo de medio. Debido a que cada vial
de medio contiene un indicador de la presencia de bacterias, la cantidad de viales que muestran una prueba
positiva para bacterias, está aproximadamente logarítmicamente relacionada con la cantidad de bacterias
contenidas en cada ml de la muestra original.

• Número más probable

Es un método de estimación de densidades poblacionales. La técnica se basa en la determinación de

presencia o ausencia (positivo o negativo) en réplicas de diluciones consecutivas de atributos
particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes, como se
muestra en la Figura 5. Por lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder
16
 reconocer un atributo particular de la población(es) en el medio de
crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de
ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una Tabla probabilística. La Tabla 2 muestra el número
más probable (NMP); el cual es una dilución por triplicado y se divide en 10 ml contenido en el vial
para reportarlo como NMP/ml. Esta técnica probabilística es mucho mejor que la técnica de dilución
seriada, pero es un poco más costosa por la cantidad de viales y el tiempo.

Figura 5. Esquema de la inoculación por dilución en serie por triplicado, según la NACE
TM0194-201419.

Tabla 2. Número más probable por triplicado (FDA’s Manual analítico de bacteria)22

2.6.2. Métodos alternativos para evaluar poblaciones de bacterias4,23.

Los métodos a continuación proporcionan una definición más detallada de las poblaciones
bacterianas examinadas, pero normalmente no están asociados con técnicas de campo. A menudo se
17
utilizan para mejorar los datos derivados de las pruebas de campo. Estos incluyen microscopía fluorescente
general, especiación procariótica por secuenciación de ADN, reacción en cadena de la polimerasa
cuantitativa (qPCR), radioespirometría, electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante (DGGE) y
microscopía de anticuerpos fluorescentes. En general, las muestras deben mantenerse en recipientes
estériles y a una temperatura fría (4 ° C [39 ° F]) durante el transporte, excepto las bacterias fijadas en
membranas para DGGE y qPCR, que pueden enviarse a temperatura ambiente.

• Microscopia de Florescencia general: Se puede determinar el número total de bacterias en la

muestra y, en algunos casos, se pueden distinguir las células vivas y muertas mediante
microscopía fluorescente. Se utilizan tintes específicos que emiten fluorescencia cuando se
irradian con luz ultravioleta. Los tintes como el naranja de acridina, el isotiocianato de fluoresceína
(FITC) y el DAPI se utilizan para el recuento total de bacterias porque tiñen tanto las células vivas
como las muertas. Los desarrollos recientes en la tecnología de tinción fluorescente han dado como
resultado métodos que utilizan una combinación de tintes fluorescentes duales, con diferentes
espectros de emisión, que pueden distinguir entre bacterias vivas y muertas. Se utiliza un
microscopio de fluorescencia para permitir el recuento de células. Algunas interferencias pueden
resultar de material orgánico e inorgánico suspendido en la muestra. Esta técnica ayuda a distinguir
los microorganismos de los desechos, por ejemplo, o puede usarse para examinar estructuras
celulares específicas de microorganismos. Existe una variedad de kits de análisis microbiológicos
disponibles comercialmente.
• Radioespirometría: Este método, como se propone actualmente, es específico de la SRB. Al
igual que los métodos de cultivo descritos, requiere crecimiento bacteriano para su detección.
Sin embargo, a diferencia de otros métodos de cultivo para SRB, produce resultados en uno o
dos días de tiempo total de prueba. La muestra debe incubarse primero con una pequeña cantidad
conocida de sulfato marcado con S identificado como sulfato. Después de la incubación, la reacción
debe terminarse con ácido para matar las células y liberar cualquier S-sulfuro producido por SRB.
Estos sulfuros deben fijarse en acetato de zinc antes de la cuantificación, utilizando un contador de
destello líquido. Una vez que se fijan los S-sulfuros, se pueden cuantificar en laboratorios fuera del
sitio. Cuando se conoce la concentración natural de sulfato, se puede calcular la actividad general
de la población de SRB. Se ha aplicado la radioespirometría para cuantificar el SRB en el
campo y para probar la eficiencia biocida en el laboratorio. Sin embargo, es una técnica
altamente especializada que involucra costosos equipos de laboratorio. Además, la
manipulación de sustancias radiactivas que están estrictamente regulada.

Métodos Microbiológicos Moleculares: Los métodos genéticos son un enfoque independiente del
cultivo, que proporciona un análisis directo de muestras sin el sesgo introducido por el proceso de
crecimiento. Debido a que no se requiere el crecimiento previo de microorganismos, los métodos genéticos
aceptan cantidades muy pequeñas de cualquier tipo de muestra (muestras líquida, de biopelícula, sólida y
seca) con o sin bacterias vivas. Una vez que se extraen los materiales genéticos de la muestra, se realizan
ensayos que son muy específicos, dando una cuantificación más precisa de varios tipos de bacterias que las
pruebas de cultivo. qFISH, PCR, qPCR y DGGE son ejemplos de métodos microbiológicos
moleculares.

• Cuantificación vía FISH: FISH es una forma sólida de cuantificar la fracción de

microorganismos vivos en todo tipo de aguas de proceso, como el agua de inyección, el agua
de refrigeración y el agua producida, y vincularlos con grupos bacterianos específicos como
Bacteria, Archaea o SRB. Las sondas FISH pueden diseñarse para unirse solo a grupos
seleccionados de microorganismos, por ejemplo, tipos específicos de SRB o SRA. Por lo tanto, solo
los microorganismos objetivo-específicos serán visibles para su enumeración durante la
microscopía.

18
 • Cuantificación vía qPCR: La técnica qPCR se puede utilizar para cuantificar el número total
de microorganismos o un género/especie específico de microorganismos en casi cualquier tipo
de muestra, incluidos los fluidos producidos, aceite/emulsión y sólidos. Este método no
subestima los organismos que no crecen en cultivo. La qPCR se puede utilizar tanto en muestras
sólidas como líquidas, así como en microorganismos recolectados mediante filtración por
membrana. Este método utiliza ADN sintético (llamados “primers”) etiquetado con una molécula
fluorescente o ADN sintético mezclado con un agente intercalante de ADN (tinte) para cuantificar
organismos usando una versión modificada de PCR. De manera similar a FISH, el método qPCR
puede enumerar un método muy general (es decir, bacterias totales o arqueas) o una población muy
específica (es decir, Desulfovibrio desulfuricans).

• DGGE: La técnica DGGE es un método basado en PCR para comparar comunidades

microbianas en varias muestras diferentes. Durante la DGGE, el material genético de las
muestras individuales se amplifica mediante PCR y posteriormente se compara mediante
electroforesis. La técnica se utiliza para identificar grupos dominantes de microorganismos en
muestras individuales y evaluar cómo se distribuyen los microorganismos entre muestras (puntos
calientes de crecimiento). Este tipo de prueba se puede realizar en cualquier muestra líquida o sólida,
así como en bacterias recolectadas mediante filtración por membrana.

• Especiación de Procariotas vía secuenciación de ADN: Las herramientas de base molecular

que se utilizan en el campo petrolífero pueden proporcionar una comprensión mucho más
profunda de la comunidad microbiana presente en un sistema dado. Para la especiación
procariota, los microorganismos más abundantes pueden identificarse a nivel de género o especie
(por ejemplo, Desulfovibrio sp.). Este tipo de información puede ayudar a comprender el riesgo
potencial de MIC y a seleccionar y monitorear la eficacia del biocida. En resumen, el ADN
procariótico total se extrae de una muestra determinada, se amplifica mediante PCR, se separa
mediante DGGE y se secuencia para la identificación de especie o género. Este tipo de prueba puede
realizarse en cualquier muestra líquida o sólida, así como en bacterias recolectadas mediante
filtración por membrana.

2.7. Experiencias Internacionales asociadas a identificación de MIC y su mitigación en operaciones de

producción de crudo.

En la Tabla 3, se muestras en orden cronológico las diferentes experiencias documentadas sobre la

identificación de MIC y su mitigación bajo condiciones exigentes de altas temperaturas en operaciones de
extracción de crudo en diferentes lugares.

Tabla 3. Experiencias Internacionales.

Experiencias Internacionales y Caracterización de los sistemas estudiados.
Año: 2000
Autores: V. J. Orphan, L. T. Taylor, D. Hafenbradl y E. F. Delong
Origen: California/E.E.U.U
“Culture-Dependent and Culture-Independent Characterization of Microbial Assemblages Associated
with High-Temperature Petroleum Reservoirs”24

Investigaciones recientes de reservorios de petróleo en una variedad de lugares han indicado que estos
hábitats pueden albergar conjuntos procarióticos termofílicos activos. En este estudio, se utilizaron
métodos moleculares y basados en cultivos para caracterizar consorcios procarióticos asociados
con yacimientos de petróleo ricos en azufre de alta temperatura en California. Los cultivos

19
enriquecidos diseñados para termófilos anaeróbicos, tanto autótrofos como heterótrofos, tuvieron
éxito a temperaturas que oscilaban entre 60 y 90 °C. Los medios enriquecidos heterotróficos de todos
los sitios produjeron géneros similares a Thermotogales, Thermoanaerobacter y a Thermococcus. Los
microorganismos autótrofos predominantes recuperados en los medios enriquecidos inorgánicos fueron
los metanógenos, como Methanobacterium, Methanococcus y Methanoculleus. Se generaron dos
colecciones de genes de ARNr 16S (ADNr) a partir del ADN de la comunidad total recogido del cabezal
de pozo de producción. El análisis de secuencia de la colección universal indicó que los géneros
representados en las colecciones de clones de ADNr incluyeron Thermoanaerobacter, Thermococcus,
Desulfothiovibrio, Aminobacterium, Acidaminococcus, Pseudomonas, Halomonas, Acinetobacter,
Sphingomonas, Methylobacterium y Desulfomicrobium. La colección de arqueas estaba dominada por
rDNA similares a metanógenas, con un porcentaje más bajo de clones pertenecientes a Thermococcales.
Los resultados de este estudio apoyan firmemente la hipótesis de que los microorganismos
termófilos que utilizan azufre y que producen metano tienen una amplia distribución en los
yacimientos de petróleo.

Año: 2003
Autores: Carlos A. Palacios T., Thais Hernández
Origen: Anzoategui y Monagas/Venezuela
“FIELD EXPERIENCES FOR SRB-MIC CONTROL IN WATER INJECTION PLANTS HAVING
CONTINUOUS PIT RECOVERED FLUIDS”.25

El campo donde se encuentra la planta de estudio, es el área Oritupano-Leona que se ubica en la parte Este
de Venezuela y cubre parte de los Estados Anzoategui y Monagas. El corte de agua promedio de los pozos
promedia alrededor del 80%. Para manejar esta producción de agua, se cuenta con un total de cinco (05)
plantas de tratamiento e inyección de agua. La temperatura media de funcionamiento en toda la planta
es de 50 a 65 °C. La metalurgia de la planta es de acero al carbono, específicamente API Grado B para
tuberías y tanques con revestimiento interno con su respectiva protección catódica. Asociado a esta planta,
existe un pozo de disposición donde se recogen los fluidos de producción y desbordamiento de la planta.
Para detener o disminuir la proliferación de bacterias en los diferentes puntos de contaminación, se probaron
varios biocidas a lo largo de la vida útil de la planta, desde que fue construida en 1999. Los químicos
utilizados fueron cinco biocidas disponibles comercialmente. Inicialmente, en base a la información de la
línea base de corrosión de la planta, se procedió a inyectar Aminas Cuaternarias como inhibidor de
corrosión, pero que tendría acción sobre las bacterias siempre y cuando estas tuviesen una baja actividad, lo
cual no era lo que pasaba en el sistema. Seguidamente, en función de la proliferación bacteriana se decidió
utilizar un producto químico específico para la matanza de bacterias, como un biocida. Se probaron varios
biocidas en este orden: 1) Amonio cuaternario, 2) Acroleína, 3) Gluteraldehído y finalmente el THPS.
Cuando se usó la Acroleína durante el proceso de recuperación de fluidos del pozo, fue efectiva, controlando
las tasas de corrosión inducidas por bacterias. Al comparar la rentabilidad, la acroleína resultó mucho más
rentable que el resto de los inhibidores utilizados. Este se descartó por problemas ambientales. El resto de
los biocidas no presentaron una buena actuación bien sea en planta o en el pozo de disposición que recoge
fluidos de producción, ya que no lograban disminuir la velocidad de corrosión de los cupones.

Año: 2007
Autores: AbdulHameed Al-Hashem, John A. Carew, y Paula J.B. Scott.
Origen: Kuwait
“Experiments on MIC of Steel and FRP Downhole Tubulars in West Kuwait Brines” 26

Para este caso, se estudiaron las aguas disponibles para la recuperación secundaria de petróleo en los campos
petrolíferos de Kuwait occidental que estaban muy afectadas desde el punto vista de su calidad para la
inyección de la misma. Se caracterizó el total de sólidos disueltos (TDS) del agua de un acuífero en
239.000 ppm (cloruro: 146.000 ppm). El agua de efluente varía, pero el TDS puede alcanzar 241.000
20
ppm (cloruro: 151.000 ppm). Adicionalmente, en este trabajo se evaluaron los materiales de los tubulares
para inyección secundaria que se probaron para el ataque de MIC a altas concentraciones de sal. Se probaron
aceros N-80 y L-80, y tres plásticos reforzados con fibra, (por sus siglas en inglés, FRP): fenólico, viniléster
y resina epoxi en los dos tipos de agua como se menciona. Un consorcio bacteriano mixto (incluyendo SRB
halófilas) de un ambiente marino mediterráneo natural fue habituado a alta salinidad y usado como inóculo
para ambos experimentos con los dos materiales a evaluar.
Como resultado, todos los cupones de acero fueron atacados. La clasificación de más a menos corroída fue
la siguiente: agua efluente L-80> agua del acuífero L-80> agua efluente N-80> agua del acuífero N-80, lo
que indica que el N-80 era más resistente a la corrosión que el L-80 y el agua efluente era más corrosivo que
el acuífero en estos experimentos. No hubo evidencia de ataque por microorganismos de los cupones de
FRP a base de éster de vinilo o epoxi. La capa de gel superficial de los materiales de éster de vinilo y epoxi
no cambió de apariencia y no fue atacada ni dañada por las bacterias. No se pudieron sacar conclusiones
sobre el material fenólico.
Finalmente, los autores indican que la temperatura es importante en la respuesta de las bacterias a la
sal. Algunos microorganismos necesitan cantidades sustanciales de NaCl a temperaturas más altas y
poco o nada a temperaturas más bajas. La concentración de sal óptima y máxima para diversas cepas
de bacterias aumenta con el aumento de temperatura. Las temperaturas más altas se encuentran en
los entornos de fondo de pozo, por lo tanto, apoyarían una mayor tolerancia a la sal en las bacterias
que se encuentran allí. Por lo tanto, existe un potencial de MIC por SRB en salmueras de campos
petrolíferos y debe considerarse en la selección de aleaciones tubulares y sistemas de agua de
inyección.

Año: 2009
Autores: Krista M. Kaster, Harald Berland & Grethe Kjeilen-Eilertsen, Krista M. Kaster y
Kristin Bonaunet & Odd Gunnar Brakstad
Origen: Noruega
“Characterisation of culture-independent and -dependent microbial communities in a high-temperature
offshore chalk petroleum reservoir”27

Estudios recientes han indicado que las reservas de petróleo albergan diversas comunidades microbianas.
Se utilizaron métodos dependientes e independientes de cultivo para evaluar la diversidad
microbiana en muestras de agua producidas del campo petrolífero Ekofisk, un reservorio de caliza
fracturado y de alta temperatura en el Mar del Norte. Se utilizaron análisis DGGE de fragmentos del
gen de ARNr 16S para evaluar la diversidad microbiana de las comunidades tanto de archaea como de
bacterias en muestras de agua producidas y cultivos enriquecidos de 4 pozos diferentes (B-08, X-08, X-
18 y X-25). El análisis de secuencia de los clones indicó coincidencias cercanas a los microbios asociados
con reservorios de petróleo de alta temperatura u otros entornos similares. Se encontró que las secuencias
eran similares a los miembros de los géneros Thermotoga, Caminicella, Thermoanaerobacter,
Archaeoglobus, Thermococcus y Methanobulbus. Los cultivos enriquecidos obtenidos de las muestras
de agua producidas estuvieron dominados por varillas enfundadas. Los análisis de secuencia de los
cultivos indicaron predominio de los géneros Petrotoga, Arcobacter, Archaeoglobus y
Thermococcus. Las comunidades de cultivos enriquecidos y agua producida parecían estar dominadas
por fermentadores termófilos capaces de reducir los compuestos de azufre. Estos resultados sugieren
que los procesos bioquímicos en el reservorio de caliza Ekofisk son similares a los observados en
reservorios de arenisca de alta temperatura.

Año: 2011
Autores: Michael V. Enzien y Bei Yin
Origen: E.E.U.U
“New Biocide Formulations for Oil and Gas Injection Waters with Improved Environmental Footprint”28
Las combinaciones de varios biocidas con gluteraldehído o THPS (sulfato de tetrakis
21
hidroximetilfosfonio), los dos biocidas para fluidos de inyección más utilizados en la industria del
petróleo y el gas, mostraron un rendimiento mejorado y perfiles de toxicidad acuática ambiental
más bajos. Las condiciones de tratamiento incluyeron temperaturas de hasta 80 °C, salinidades de
hasta el 15% y tiempos de contacto de hasta 7 días. Las pruebas de combinación se evaluaron contra
bacterias reductoras de sulfato (SRB) y bacterias productoras de ácido (APB). Muchas de las nuevas
formulaciones ensayadas tenían un perfil de toxicidad acuática medioambiental más bajo que el
gluteraldehído o el THPS solo debido a los perfiles de toxicidad acuática favorables de los activos
combinados complementarios. Por lo tanto, estas nuevas formulaciones no solo mejoraron o
igualaron el desempeño de los biocidas existentes, sino que lo hicieron con una mejor huella
ambiental. Las nuevas formulaciones de biocidas se desarrollaron para el tratamiento de aguas de
inyección utilizadas en aplicaciones de inundación de agua o fracturación hidráulica. En ambas
aplicaciones, la estabilidad térmica mejorada y, por lo tanto, una conservación más prolongada
fueron objetivos para el desarrollo de nuevos productos.

Año: 2015
Autores: Matilde F. de Romero, Lisseth Ocando, Antonio De Turris y Laura L. Machuca
Origen: Venezuela
“Non-oxidizing Biocide to Control Sulfate-Reducing Bacteria on a Produced Water Injection Plant”20

Los biocidas no oxidantes se utilizan comúnmente para erradicar microorganismos, prevenir problemas de
corrosión y taponamiento y asegurar la calidad del agua que se utilizará en plantas de inyección de agua. Sin
embargo, estos biocidas son muy caros y, en algunos casos, no son completamente eficaces en todas partes.
Por tanto, es necesario evaluar su eficacia frente a las bacterias sésiles antes de utilizarlas en un sistema
específico.
Este estudio muestra el procedimiento utilizado para evaluar la efectividad de una variedad de
biocidas no oxidantes para el control de la corrosión inducida microbiológicamente (MIC) por
bacterias reductoras de sulfato (SRB) en una planta de inyección de agua de una empresa petrolera
venezolana. Estudios previos utilizando un sistema de monitoreo en línea demostraron que las
bacterias SRB fueron la principal razón de los daños recurrentes en estas instalaciones, junto con la
alta salinidad.
El procedimiento experimental seguido en este trabajo consistió en tres pasos básicos: 1) formación de
biopelículas en laboratorio, 2) prueba de eficiencia del biocida en función al tiempo de contacto y 3)
evaluación y contaje de bacterias sésiles por la técnica de dilución seriada. Se completó el procedimiento de
evaluación a nivel de laboratorio de 15 biocidas contra bacterias SRB sésil en superficies de acero al carbono
a la concentración máxima de los productos establecida por el fabricante y dos horas como tiempo de
contacto. Esta evaluación permitió reducir las opciones a cuatro biocidas. Los resultados mostraron que un
buen método para cultivar biopelículas y evaluar la eficiencia de los biocidas en el laboratorio fue el uso de
agua producida con un inóculo al 10% de un cultivo de bacterias SRB completamente desarrollado y que se
originó en el sistema de campo. Como resultado, se obtuvo al gluteraldehído (Biocida 24 con 240ppm)
de un fabricante como el mejor biocida, seguido de otra buena segunda opción con la mezcla de THPS
más sales de amonio cuaternarios (Biocida 19 con 300ppm), ambos mostraron buenas expectativas
para controlar la MIC por bacterias SRB en este sistema de inyección de agua.

Año: 2015
Autores: Xue Y and Voordouw G
Origen: CANADA
“Control of Microbial Sulfide Production with Biocides and Nitrate in Oil Reservoir Simulating
Bioreactors”29

La degradación de los reservorios de petróleo por la reducción microbiana de sulfato a sulfuro no es

deseada, ya que aumenta la corrosión de la infraestructura metálica utilizada para la producción y
22
procesamiento de petróleo. El agriamiento del yacimiento se puede prevenir o remediar mediante la
inyección de nitrato o biocidas, aunque no se suele realizar la inyección de biocidas en los
reservorios. Se desconoce si la aplicación combinada de estos agentes puede proporcionar un
control sinérgico del agriamiento del reservorio. Para abordar esto, se utilizaron biorreactores
empaquetados con arena de flujo ascendente inyectados con sulfato (2 mM) y ácidos grasos volátiles
(VFA, 3 mM cada uno de acetato, propionato y butirato) a un caudal de 3 o 6 volúmenes de poros (PV)
por día. Se utilizó inyección pulsada de los biocidas gluteraldehído (Glut), cloruro de benzalconio
(BAC) y cocodiamina para controlar el agriamiento. El control de agriado se determinó como el
tiempo de recuperación (RT) necesario para restablecer una concentración de sulfuro acuoso de 0,8 a 1
mM (del 1,7 a 2 mM antes del pulso). Los pulsos fueron durante un tiempo prolongado (120 h) a baja
concentración (largo-bajo) o durante un tiempo corto (1 h) a alta concentración (corto-alto). La
estrategia corto-alto proporcionó un mejor control del agriamiento con Glut, mientras que la
estrategia largo-bajo fue mejor con cocodiamina. La inyección continua de nitrato (2 mM) solo no fue
eficaz, porque VFA (3 mM) puede reducir completamente tanto nitrato (2 mM) a nitrito como N2 y,
posteriormente, sulfato (2 mM) a sulfuro. No se observó sinergia para biocidas de pulsos cortos-altos
y nitrato inyectado continuamente. Sin embargo, el uso de nitrato continuo y biocida de pulsos
largos y bajos proporcionó un control sinérgico del agriamiento con BAC y Glut, como lo indica el
aumento de RT en presencia, en comparación con la ausencia de nitrato. El aumento de la producción de
nitrito, que aumenta la eficacia del control del ácido mediante biocidas, es la causa más probable de esta
sinergia.

Año: 2017
Autores: Xiao-Xiao Li, Jin-Feng Liu, Lei Zhou1, Serge M. Mbadinga, Shi-Zhong Yang, Ji-Dong Gu
y Bo-Zhong Mu
Origen: China
“Diversity and Composition of Sulfate-Reducing Microbial Communities Based on Genomic DNA and
RNA Transcription in Production Water of High Temperature and Corrosive Oil Reservoir” 30

Los ecosistemas de reservorios de petróleo del subsuelo profundo albergan una gran diversidad de
microorganismos, y la corrosión inducida por microbios es un problema importante para la industria del
petróleo. Aquí, utilizaron la secuenciación de alto rendimiento para explorar las comunidades
microbianas basadas en el rDNA 16S genómico y los análisis de rRNA 16S metabólicamente activos
de muestras de agua de producción con diferentes grados de corrosión de un reservorio de crudo
a alta temperatura. Los resultados mostraron que Desulfotignum y Roseovarius fueron los géneros más
abundantes en las comunidades bacterianas activas y genómicas de todas las muestras. Tanto las
comunidades de arqueas genómicas como activas estaban compuestas principalmente por Archaeoglobus
y Methanolobus. Tanto dentro de las bacterias como de las arqueas, las comunidades activa y genómica
eran composicionalmente distintas entre sí en los diferentes pozos de petróleo. Además, los
microorganismos reductores de sulfato (SRM) se evaluaron específicamente mediante la secuenciación
de Sanger de los genes funcionales aprA y dsrA que codifican las enzimas adenosina-5'-fosfosulfato
reductasa y sulfito reductasa disimilatoria, respectivamente. El análisis de genes funcionales indicó que
con frecuencia se detectaron Archaeoglobus, Desulfotignum, Desulfovibrio y Thermodesulforhabdus
potencialmente activos, con Archaeoglobus como el grupo reductor de sulfato más abundante y activo.
El análisis de correspondencia canónica reveló que las comunidades de SRM en el sistema de
reservorios de petróleo estaban estrechamente relacionadas con el pH del agua de producción y la
concentración de sulfato. Este estudio destaca la importancia de distinguir los microorganismos
metabólicamente activos de la comunidad genómica y amplía el conocimiento sobre las
comunidades de SRM activas en yacimientos de petróleo corrosivos.

Año: 2019
Autores: Bei Yin, Terry Williams, Thomas Koehler, Brandon Morris y Kathleen Manna
23
Origen: E.E.U.U / SUIZA
“Targeted microbial control for hydrocarbon reservoir: Identify new biocide offerings for souring control
using thermophile testing capabilities” 31

Los microorganismos productores de sulfuros mesófilos y termófilos pueden prosperar en ambientes

subterráneos y causar que los depósitos de hidrocarburos se agrieten durante las operaciones de
recuperación de energía, y el régimen de temperatura subterráneo puede afectar la eficacia de los
programas de control biológico. En este estudio, se evaluó la eficacia de biocidas seleccionados
utilizando una bacteria productora de sulfuro termófila y mesófila. Un biocida de campo petrolífero
de uso común, gluteraldehído (Glut), y tres biocidas no tradicionales de campo de petróleo y gas, cis-1-
(3-cloroalil) -3,5,7-triaza-1-azoniaadamantano cloruro (CTAC), 4,4-. Para la investigación se utilizaron
dimetiloxazolidina (DMO) y tris (hidroximetil) nitrometano (THNM). Se encontró que Glut era muy
eficaz contra bacterias productoras de sulfuros tanto mesófilas como termófilas. Sin embargo, su
eficacia persistió durante períodos más cortos a 75 ° C en comparación con 35 ° C. Se requirieron
dosis más altas de Glut para la destrucción bacteriana completa durante un período de tiempo prolongado.
Como biocidas conservantes no tradicionales, CTAC, DMO y THNM actuaron más lentamente en
comparación con Glut. Sin embargo, su eficacia se incrementó a temperatura elevada. CTAC, DMO y
THNM mostraron un rendimiento mejorado a 75 ° C frente a 35 ° C, y su eficacia persistió más
tiempo que Glut. Este estudio destaca el potencial de los biocidas de yacimientos de petróleo y gas
no tradicionales para el control microbiano y del ácido en yacimientos con condiciones de
temperatura desafiantes.

Año: 2019
Autores: Silvia Salgar Chaparro.
Origen: Australia Occidental
“Investigating the Effect of Temperature in the Community Structure of an Oilfield Microbial
Consortium and Its Impact on Corrosion of Carbon Steel”32.

En su estudio confirmó que los reservorios de petróleo presentan altas temperaturas favoreciendo la
actividad de los microbios termófilos. No obstante, la temperatura disminuye después de la extracción de
crudo y agua a lo largo de las instalaciones de producción de crudo. El efecto de esta fluctuación de
temperatura de condiciones termófilas (60 ° C) a condiciones mesófilas (40 ° C) sobre la composición
microbiana se ha investigado en un consorcio microbiano recuperado de un campo petrolífero de
Australia Occidental. Para este caso se implementó la secuenciación NGS del gen de ARNr 16S para el
perfil de diversidad de la comunidad total y activa en ambas condiciones térmicas. Adicionalmente se
expusieron cupones de acero al carbono para estudiar el impacto de los cambios de estructura microbiana en
la corrosividad del consorcio. Los resultados mostraron diferencias notables en la abundancia relativa
de la especie y también en su comportamiento corrosivo. Los procariotas y metanógenos productores
de sulfuro fueron los grupos microbianos predominantes a una temperatura más alta, mientras que
las bacterias productoras de ácido y relacionadas con el hierro también desempeñaron un papel en el
consorcio mesófilos. Ambos consorcios causaron pérdidas de peso en los cupones metálicos expuestos, sin
embargo, las tasas de corrosión fueron diferentes a las de la comunidad termófila más corrosiva. Este
análisis sugirió que las velocidades y los mecanismos de corrosión inducida microbiológicamente
pueden diferir a lo largo de las instalaciones petroleras de acuerdo con la variación de especies
abundantes debido a los cambios de temperatura.

Año: 2020
Autores: Jodi B. Wrangham, Adam Bounds, Jerry L. Conaway, Jim Ott, Mason Long, y Corey
Stevens
Origen: E.E.U.U.
“Remediation of Microbially Contaminated Horizontal Wells with Acrolein” 33.
24
Los pozos horizontales de petróleo y gas, creados por una técnica de perforación direccional que extiende el
pozo horizontalmente en un ángulo que excede los 80 grados, son comunes porque pueden aumentar la
producción hasta 20 veces más que la de los pozos verticales. Este aumento en la producción se debe al
hecho de que estos pozos están orientados para correr a lo largo de la formación en profundidad, lo que les
permite acceder a la misma cantidad de petróleo y gas que históricamente habría requerido múltiples pozos
verticales para producir. Los pozos horizontales tienden hacia laterales más largos, lo que les permite
producir mayores volúmenes. Estas longitudes plantean desafíos microbiológicos, ya que
proporcionan más área para contaminarse microbianamente y requieren mayores volúmenes de
fluido y biocida para su tratamiento. Una vez contaminados, ha resultado muy difícil remediar los pozos
horizontales con biocida, ya que a menudo no se logra el contacto completo con biocida debido al hecho de
que múltiples perforaciones pueden aceptar líquido antes de que pueda viajar al final del lateral.
Este estudio tiene su desarrollo en un campo petrolífero de la Cuenca Pérmica (USA) que experimentó
fallas relacionadas con MIC en sus pozos horizontales, lo cual es motivo de preocupación debido al
alto costo de reparación asociado.
Las pruebas de desafío de los biocidas en laboratorio identificaron varias químicas de campos petrolíferos
comunes y combinaciones de las mismas como efectivas contra la población de microbios de este campo.
Sin embargo, las aplicaciones agresivas de estos productos en el campo no produjeron una destrucción
microbiana efectiva ni impidieron que los pozos tratados experimentaran más MIC y fallas.
Se realizó una prueba de campo con acroleína en un conjunto de pozos horizontales problemáticos y
contaminados con microbios durante un período de aproximadamente un año. Durante este período
de tiempo, estos pozos experimentaron el control microbiano. Se obtuvieron beneficios adicionales como
resultado de la acroleína, incluida una mejora dramática en la calidad del agua evidente como una
disminución en el sulfuro de hierro y los sólidos en suspensión, una limpieza de los pozos inferida por un
aumento inicial de sólidos después de la acroleína, una disminución en el tasa de corrosión indicada por una
reducción significativa en los recuentos de hierro y manganeso, una disminución en la tasa de fallas del
pozo, un aumento en la producción y un ahorro general de costos asociado con la aplicación de acroleína.

Año: 2021
Autores: Diogo Jurelevicius, Luana Ramos, Fernanda Abreu, Ulysses Lins, Maíra P. de Sousa,
Vanessa V.C.M. dos Santos, Mônica Penna y Lucy Seldin.
Origen: BRASIL
“Long-term souring treatment using nitrate and biocides in high-temperature oil reservoirs”34

La producción biogénica de sulfuro de hidrógeno (H2S) por las bacterias reductoras de sulfato (SRB) y,
en consecuencia, la degradación de los yacimientos sigue siendo un problema importante en la industria
petrolera. Se utilizan biocidas y/o nitratos para controlar la actividad de SRB en los yacimientos de
petróleo, pero aún se necesitan estudios a largo plazo para demostrar su eficacia. En este estudio,
se analizaron dos reservorios de petróleo de alta temperatura (80-84 °C) durante tres años. Se
agregaron nitrato y sulfato de tetrakishidroximetilfosfonio (THPS) al sistema de inyección de agua (WI)
al comienzo de la recuperación secundaria de petróleo en el reservorio de petróleo 1, mientras que el
nitrato solo se agregó 19 meses después del comienzo de la recuperación de petróleo secundaria en el
reservorio de petróleo 2. La concentración de H2S se cuantificó mensualmente en los pozos de
producción, y la comunidad bacteriana total (basada en el gen que codifica el rRNA 16S) y SRB (basada
en los genes dsrA y apsAB) se determinaron mediante análisis de hibridación in situ de fluorescencia
(FISH) y análisis PCR-DGGE. Nitrato más THPS controló la producción de H 2S durante 34 meses
en el reservorio de crudo 1. La inyección de THPS en el reservorio de crudo 2 controló los niveles de
H2S durante 17 meses, y la adición de nitrato en la inyección de agua no controló la producción de H2S.
Los análisis de PCR-DGGE y la identificación molecular de los grupos dominantes mostraron un
predominio de bacterias termofílicas, incluyendo diferentes SRB (como Desulfocaldus y
Desulfonauticus) y bacterias reductoras de nitrato (NRB - Marinobacter) en el reservorio de crudo 1 y
25
 SRB mesófila (Desulfovibrio) y NRB (Halomonas y Acinetobacter) en el yacimiento de petróleo 2. La
estrategia elegida durante la recuperación secundaria de petróleo moduló la comunidad microbiana y, en
consecuencia, cambió la dinámica de producción de H2S.

3. METODOLOGÍA

La metodología establecida para los objetivos específicos definidos, se contemplan a continuación:

3.1. Análisis microbiológico mediante contaje de bacterias SRB y APB empleando la técnica de dilución
seriada con la estadística de Número Más Probable.

3.1.1. Definición de los puntos de muestreos para análisis microbiológico.

En base a revisión de planos de construcción, reuniones virtuales y a experiencias de campo, se acordaron

los puntos de muestreo seleccionados para colectar las muestras de agua de producción (bacterias de tipo
planctónicas) y las muestras de sólidos/lodos o depósitos (bacterias de tipo sésiles) donde fuera posible.

A continuación, en la Figura 6 se enumeran las ubicaciones de los puntos de muestreo seleccionados:

1. Fondo de Separador de Producción 1-V-200A

2. Separador de Producción 1-V-200B

26
 3. Fondo de Tanque de Reposo 1-T-620

NO DISPONIBLE EN PLANO

4. Tanque Sumidero T-310 de la Fase CPFI

5. Fondo de Tanque de sistema de Agua Fresca

Figura 6. Localización en planos e imágenes de los puntos de muestreos seleccionados

Luego de definir los puntos anteriores para colectar las muestras, se procedió al muestreo en campo. Para
dicha actividad, se tomaron ciertas consideraciones especiales para tomar la muestra de forma correcta y
evitar el ingreso de oxígeno y/o contaminación de la misma.

3.1.2. Muestreo en planta para análisis microbiológico

A continuación, los pasos para la realización de un correcto muestreo en campo:

1. Determinar el tipo de muestra a ser analizada, indicando si es planctónica o sésil (agua de
producción o sólidos/lodos/depósitos de los equipos, respectivamente).
2. Tomar las muestras cuidadosamente en los envases plásticos limpios y estériles, previamente
identificados con el lugar del muestreo, fecha y analista. Para ello debe evitarse contaminar las
muestras con las manos o utensilios no esterilizados. Evitar el ingreso de oxígeno durante el
muestreo.
3. Preservar las muestras líquidas o depósitos en frio en un cooler.

27
 4. Anotar todos los detalles del muestreo: color, consistencia, adherencia al sustrato del depósito,
densidad de depósitos, severidad del proceso corrosivo, degradación del recubrimiento si lo hubiese,
etc.
5. Trasladar las muestras en forma segura y adecuada al laboratorio para su procesamiento de forma
inmediata.

La Figura 7 muestra el detalle del muestreo en campo, siempre con el apoyo del personal operativo de
campo y con las medidas de seguridad exigidas, en este caso por las altas temperaturas la muestra requirió
uso de guantes térmicos.

Figura 7. Recolección de muestras en puntos seleccionados.

3.1.3. Contaje de bacterias SRB y APB usando la técnica de dilución seriada con la estadística de Número
Más Probable.

Una vez realizado el muestreo y estando en laboratorio de campo, se armó la mesa de trabajo en donde se
distinguen dos procedimientos importantes, uno de ellos es el procesamiento de la muestra en condiciones
de anaerobiosis; con la finalidad de evitar el efecto del oxígeno en el contaje de las SRB (estrictas
anaeróbicas) y la realización del contaje de bacterias mediante la técnica de dilución seriada aplicando
Número Más Probable (NMP).

3.1.3.1. Procedimiento para el procesamiento de muestras en condiciones anaeróbicas:

1. Conectar el suministro de nitrógeno por la parte posterior de una bolsa de anaerobiosis. El

uso de condiciones de anaerobiosis mejora el contaje bacteriano de las SRB, las cuales son
estrictas anaerobias.

28
 2. Desairar la bolsa de anaerobiosis haciendo circular
nitrógeno por la misma durante aproximadamente un minuto por tres veces y luego,
introducir los materiales necesarios para el contaje bacteriano (El Kit de ProVials más una
tijera, la muestra sea líquida, depósitos o cupones y toallin).
3. Sellar la bolsa y aumente el flujo de N2 para llenarla y poder trabajar con ella a través de
sus guantes.

➢ Si la muestra es de tipo Sésil:

4. Retirar el sello de aluminio y el septum del vial de buffer PBS.

5. Retirar la biopelícula de cupón usando una espátula de madera o si es muestra de
sólidos/lodos/depósitos agregue una porción de la muestra (aproximadamente 1 g) de la
muestra recolectada y colóquela en el vial con buffer PBS. Selle herméticamente el vial con
su septum y agite vigorosamente por 5 minutos aproximadamente hasta homogenizar toda
la muestra con el buffer.

➢ Si la muestra es de tipo Planctónica:

6. En el caso de muestras de agua y/o líquidos homogenice y extraiga 1 ml de la muestra acuosa

en un vial conteniendo buffer PBS o directamente en el primer vial de una serie de medio
de cultivo selectivo donde iniciará el conteo de bacterias especificas por la técnica de
dilución seriada. La ventaja con el buffer es que sirve como un medio para suspender las
bacterias en la solución sin propiciar su crecimiento.

3.1.3.2. Procedimiento INCORS y soportado con la norma NACE TM0194-2014 para la aplicación
de la técnica de dilución seriada con Número más Probable.

Bajo condiciones de asepsia y anaerobiosis, seguir los pasos siguientes:

1. Juntar 8 viales alineados de medio de cultivos (Postgate B, Rojo Fenol, otros). Se requieren
3 series de 8 viales, para considerar así un triplicado de la muestra por cada tipo de medio
de cultivo selectivo.
2. Realizar la inoculación de bacterias SRB y APB dentro de condiciones anaerobias y asepsia
o en una bolsa de anaerobiosis usando para ellos los viales No. 1 previamente identificadas
de ambas series de medios por triplicado para un total de 6 viales (3 de SRB y 3 de APB).
Tomar con la jeringa de 3 ml de 1,5 a 2 ml de la muestra problema retirando el exceso y el
aire varias veces hasta dejar 1 ml, baje el vial, saque la aguja e inocule el vial No. 1 para
SRB, descarte esta jeringa. Haga lo mismo para las APB. Este procedimiento es por
triplicado para determinar NMP.
3. Repetir el mismo procedimiento para las otras muestras de biopelícula o agua colectadas.
4. Sacar los viales No. 1 de SRB y APB de la bolsa de anaerobiosis (6 en total).
5. Retirar el centro del sello de aluminio de los otros viales de la serie, ya identificados hasta
el 8, y limpiar la goma con alcohol.
6. Proceder a realizar la dilución seriada usando el vial No.1 de SRB preparado bajo
condiciones de anaerobiosis. La dilución debe hacerse en una zona previamente esterilizada
con hipoclorito de la siguiente forma:

➢ Agitar nuevamente el vial No. 1, limpiar la goma con alcohol e insertar una jeringa
nueva.
➢ Tomar de 2 a 3 ml de muestra y sin sacar la jeringa del vial reinyecte el líquido unas
3 veces para ayudar con la homogenización de la muestra evitando aire, burbujas y
contaminación, por lo cual debe trabajar cerca de un mechero. Dejar un (1) ml en la
29
 jeringa e inocular el vial No. 2 de SRB. Agitar nuevamente el vial No. 2 y limpiar la
goma con alcohol, tomar 1 ml de este vial, homogeneizando previamente como se
indicó en el paso anterior e introducirlo en el vial No. 3. Repetir este procedimiento
hasta completar los 8 viales de SRB por triplicado. (Figura 8).
➢ Finalizada la dilución seriada para las SRB, repetir los pasos anteriores para los
medios de cultivo APB, para contar bacterias productoras de ácido.
➢ Incubar los viales de APB a la temperatura del sistema por 14 días y los de SRB entre
21 y 28 días antes de reportar los resultados finales. No obstante, en un período de 5
días debería notarse un cambio de coloración en el primer vial de cada una de las
diluciones.
➢ Cuente los viales de APB que han cambiado de color rojo a amarillo claro y los de
SRB de color ámbar a negro. Siguiendo la metodología del NMP (Tabla 4).

9 ml de
medio

Figura 8. Esquema de aplicación de la dilución seriada

Para el cálculo del NMP de SRB y APB, la dilución se hace por triplicado, siguiendo el procedimiento
anterior para una serie de 8 viales, requiriendo un total de 24 viales para cada bacteria para un total de 48
viales contenidos en el kit de ProVials. Se esperan los días de crecimiento correspondiente; con tiempos de
incubación de 14 días para las APB y 28 días para las SRB. Los pasos para cuantificar por NMP, se
mencionan en la Tabla 4 que contiene el esquema de pasos para la determinación de NMP, como se observa
a continuación:

Tabla 4. Esquemático para determinar el NMP.

Pasos para NMP
1) Se realiza el cálculo NMP, realizando el arreglo indicado en la imagen modelo
adjunta.
2) Los números que se encuentran en la parte superior de la imagen modelo se llaman
patrón de reacciones positivas.
3) De este patrón se toman 3 cifras significativas de derecha a izquierda, pudiendo
incluir hasta una serie de viraje negativo (0)
4) En el ejemplo de la imagen modelo el patrón de 3 cifras significativas es 210
5) El patrón de 210 se busca en la Tabla NMP mostrada en la parte inferior y el valor
de la lectura más probable encontrado es 15 NMP para 10 ml contenidos en el vial.
6) Para llevarlo a NMP/ml se divide entre 10, lo cual arroja un valor de 1.5
7) Se cuentan el número de series positivas completas por delante del patrón de 3 cifras
significativas y eso se multiplica por la lectura obtenida de NMP/ml.
8) Resultado: En el ejemplo, hay 3 series de reacciones positivas completas, por lo
tanto el resultado es 1.5x103 NMP/ml de APB.
Imagen Modelo de conteo de bacterias APB por NMP

30
 Tabla de NMP del FDA´s

3.2. Evaluación de la eficiencia del biocida contra bacterias sésiles a nivel de laboratorio.

3.2.1. Descripción del biocida usado en planta35.

El biocida empleado en planta es el BIO 03-CSMA. La Tabla 5 muestra las especificaciones de este
producto, según la hoja técnica del fabricante.

Tabla 5. Resumen Descriptivo del Biocida BIO 03-CSMA35

Casa Tratante: CSMA Consultores, Ingeniería y Servicios SRL
Identificación del producto comercial:
Biocida BIO 03-CSMA
Tipo de Producto BIOCIDA/BACTERICIDA INDUSTRIAL ESPECIAL

Composición del 1. Mezcla de compuestos de Amonio Cuaternario, Quats (%Peso: 5-25%)

producto 2. Sulfato de Tetrakis Hidroximetil Fosfonio, THPS (%Peso: 40-70%)

Descripción breve y El BIO 03 –CSMA es un biocida concentrado de amplio espectro, particularmente

aplicación efectivo contras las bacterias sulfato reductora (BSR).
Este producto contiene una nueva generación de ingredientes activos combinados con
ingredientes que le dan mayor poder de penetración en sistemas complejos.

31
 Características • ESTADO FÍSICO: Líquido claro
Fisicoquímica • COLOR: Incoloro
• OLOR: Frutal. Medicinal fuerte.
• DENSIDAD A 20° C: 1.15 – 1.3 gr/cm3
• pH PURO: 5.0 – 6.0
• PUNTO DE INFLAMACIÓN: Vaso cerrado: >93.4° C (>201° F) Estimado
• PUNTO DE EBULLICIÓN/CONDENSACIÓN: 108° C (226.4° F)
• PUNTO DE FUSIÓN/CONGELACIÓN: -43° C (-45.4° F)
• DENSIDAD DE VAPOR: >1[Aire=1]
• VISCOSIDAD: Dinámico: 30 cPs
• PRESIÓN DE VAPOR: 2.2 kPa (16.7 mm Hg en 21.1° C
• PUNTO DE FLUIDEZ: < - 42 ° C (<-45° F)

Protección contra Bacterias

Solubilidad (Agua) Soluble
Dosificación continua o Información según hoja técnica:
por choque (ppm) Dosis por choques: de 200 ppm por 2 horas (suministrada por tf por el
fabricante)
Tratamiento continuo: de 30 a 50 ppm
Identificación de dosis 200, 350 y 500 ppm por 2 horas.
evaluada (ppm) 200 ppm por 5 horas

3.2.2. Etapas de evaluación

Para la evaluación de la eficiencia del biocida BIO 03-CSMA se realizaron pruebas de matanza,
requiriéndose para ello cupones con biopelícula formada a nivel de laboratorio; según procedimiento
experimental desarrollado por INCORS avalado por NACE International20 (Paper C2015-5793: Evaluation
of Non-oxidizing Biocides to Control Sulfate-Reducing Bacteria on a Produced Water Injection Plant), el
cual contempla tres etapas, a saber:

• Etapa I: Desarrollo de biopelícula a nivel de laboratorio sobre cupones de acero al carbono

utilizando un cultivo mixto bacteriano aislado de las instalaciones de PETROTAL.
• Etapa II: Evaluación de la eficiencia del biocida sobre la biopelícula de cultivo mixto de bacterias
formada de sobre cupones previamente preparados, bajo condiciones de anaerobiosis.
• Etapa III: Conteo de bacterias mediante la técnica de dilución seriada luego de impactar el biocida
contras los cupones con biopelícula con la intención de medir su efectividad.

Cultivo bacteriano seleccionado

El cultivo mixto de bacterias empleado en esta evaluación para formación de la biopelícula de la Etapa I
correspondió a un cultivo mixto o inóculo bacteriano aislado de planta, específicamente del Tanque
Sumidero T-310 de CPF1 de la locación durante el primer muestreo de bacterias sésiles. La relación de
inóculo usado para formar la biopelícula fue del 10% del volumen total de reactor de ensayo (500ml).

Medio de cultivo

Un medio de cultivo es una solución formulada de nutrientes orgánicos e inorgánicos que facilita el
crecimiento bacteriano. Igualmente, un estuario natural como el agua producida sirve como medio de
cultivo; ya que contiene los nutrientes necesarios para que se desarrollen las bacterias, lo cual quiere decir
que el agua problema asociada al crudo, puede servir como fuente de nutrientes para el crecimiento de
microorganismo. Para esta evaluación se establecieron dos tipos de medios cultivos para las etapas I y III.
32
Para la Etapa I: Para el desarrollo de la biopelícula sobre los cupones metálicos del material de acero al
carbono, se usó el medio específico formulado Postgate B y agua de producción, donde se inocularon las
bacterias aisladas de campos previamente; lo ideal es utilizar solamente agua de producción para simular
las condiciones de campo, pero se necesita de tiempos de incubación más largo para la formación de la
biopelícula (14 días en lugar de 7 días). Por tal motivo, para esta evaluación en particular se diseñó en una
proporción de 50:50 utilizando agua producida recolectada en planta y medio de Cultivo enriquecido de
tipo Postgate B. La relación de medio (Postgate B + Agua Producida) con el inóculo fue 90:10.

El agua de producción se colectó a la entrada del Tanque Skimmer 1-T-610 en la línea de 8"-PW-A2-CPF1-
154 que viene del cabezal N°2 de la planta según indicación de los planos, más específicamente en el punto
del “tubing” antes de químicos cuya identificación es la siguiente 1/2"-IQ-TUBING-CPF1-632. La idea de
este punto, es una muestra de agua producida justo antes del punto de inyección biocida, que permita
realizar una evaluación con el agua tal cual como viene del proceso libre de tratamiento químico para el
control de microorganismos.

Para el medio de cultivo enriquecido, se utilizó Postgate B, preparado según norma NACE TM0194-2014,
con la variante de haber realizado un ajuste en la cantidad de cloruros respecto a la cantidad original según
norma, esto último de acuerdo a la caracterización preliminar del agua producida del reporte de laboratorio
FST18-077-PETROTAL que indicó una cantidad de Cloruros de 53.200 ppm para el pozo 95-2-1XD-ST.
Adicionalmente, ese mismo parámetro se cotejo con el resumen del análisis fisicoquímico de la muestra de
agua producida a la entrada del Tanque Skimmer 1-T-610, realizado por INCORS en visita a planta, el cual
reporta 40.000ppm, como se observa en la Tabla 6. En función a lo mencionado, se ajustaron los cloruros
a 50.000ppm en el medio de cultivo, de manera de simular más aún las condiciones de planta.

Tabla 6. Resumen de la caracterización fisicoquímica de la muestra de agua producida

a la entrada del Tanque Skimmer 1-T-610.
PM: Agua Producida PM: Agua Producida
Análisis Entrada Análisis Entrada
Fisicoquímico Tanque Skimmer Fisicoquímico Tanque Skimmer
1-T-610 1-T-610
M:01/12/20202 M:01/12/20202
Color Clara STD (g/l) -
O2 (d) (ppb) 0 COND (mS/cm) -
CO2 (d) (ppm) 70 SALINIDAD (psu) -
H2S (d) (ppm) 0 SO4= (ppm) 170
Fe++ (ppm) 30 Alcalinidad (ppm) 190
Fe(t) (ppm) 37.5 Dureza Total (ppm) 12500
pH 6.5
Cl- (ppm) 40000

Para la Etapa III: Los medios de cultivo empleados para la enumeración de bacterias fueron, el Postgate
B que permite determinar las bacterias SRB y el medio a base Dextrosa con Rojo Fenol para identificar y
cuantificar bacterias APB, preparados según norma NACE TM0194-2014, ambos medios descritos en el
apéndice C de la norma mencionada. Para el medio de cultivo Postgate B se realizó ajuste de cloruros
(50.000ppm), tal y como se modificó para la etapa I.

Sustrato metálico

El material seleccionado para ser expuesto al ataque bacteriano fue acero al carbono API 5L, cortados en
forma rectangular cuyas dimensiones son: 2 x 2 x 0.2 cm, con un orificio en un extremo.

33
3.2.2.1. Etapa I: Desarrollo de biopelícula a nivel de laboratorio sobre cupones de acero al carbono
utilizando un cultivo mixto bacteriano aislado de las instalaciones de PETROTAL.

Actividades previas:

1. Preparación del medio de cultivo Postgate B con 50.000ppm, según la norma TM0194-2014, para
la etapa I. Volumen 250ml.
2. Esterilización por filtración (filtros de 0.45 micras) para el Agua Producida recolectada y
posteriormente se le dio condiciones anaerobias con un flujo de nitrógeno.
3. Activación e incubación del inóculo de cultivo mixto bacteriano extraído de campo en medio
fresco. El inóculo se formó con los viales con indicación positiva del crecimiento de SRB y APB
del contaje realizado al Tanque Sumidero T-310 de la Fase CPFI. Volumen de inóculo 50ml (3
viales positivos de SRB y APB, respectivamente).
4. Preparación de los cupones, limpieza química y secado con etanol y aire caliente. 5 cupones de
acero al carbono.
5. Montaje de reactor de ensayo de volumen total 500ml, agregando medio de cultivo (Postgrate B
+Agua Producida – 90% del volumen total, es decir 450ml) + inóculo activo (10% del volumen
total, es decir, 50ml) + Cupones limpios. La relación de medio/inóculo es 90:10, respectivamente.
6. Formación y crecimiento de la Biopelícula por un tiempo de incubación de 8 días.
7. Todos los materiales de trabajo se lavaron y esterilizaron para evitar la contaminación
microbiológica y asegurar la asepsia, según sea el caso.

Formación de la biopelícula:
En el laboratorio, las biopelículas se forman sobre cupones del material en estudio. Para esta evaluación se
diseñó la formación de biopelículas (figura 9) de la siguiente forma:

1. Colocando los cupones dentro de un reactor de ensayo estático (recipiente tipo frasco con tapa de
rosca) conteniendo el medio de cultivo (Postgate B con 50.000ppm de cloruro a un volumen
agregado 225ml y Agua Producida estéril y anaerobia con un volumen añadido 225ml).
2. Inoculación (10% de inóculo -50ml), tal cual se indicó en las actividades preliminares. En este caso,
se utilizaron inóculos de un cultivo mixto bacteriano, previamente contado como se indicó.
3. Incubación por 8 días; el tiempo de incubación depende de la concentración bacteriana existente a
nivel de campo. En este caso en particular se dejaron 8 días; ya que es la primera vez que se aísla
la bacteria en esta locación en particular. Además, se utilizó una relación de medios de cultivos
(50:50 Medios de Cultivo Postgate B y Agua Producida) que ayudaría al mejor desarrollo de la
biopelícula. Para estos casos lo mejor es utilizar únicamente el agua problema de campo como
medio de cultivo, pero se requieren de muchos días (14 o más días) para la formación de la
biopelícula; y que el agua este cargada de microorganismos. Una forma de garantizar y asegurar un
crecimiento adecuado, es emplear un medio enriquecido como Postgate B que viene a reforzar con
muchos nutrientes frescos a los que ya tiene el agua producida.

34
 Materiales necesarios para la formación de biopelícula Reactor de ensayo con cupones

Inóculo bacteriano y medios de cultivos Reactor terminado para incubación

Figura 9. Secuencia de preparación de reactor para el desarrollo de biopelícula de la etapa I.

3.2.2.2. Etapa II: Evaluación de la eficiencia del biocida sobre la biopelícula de cultivo mixto de
bacterias formada de sobre cupones previamente preparados bajo condiciones de anaerobiosis.

Actividades previas:

1. Preparación de Buffer de PBS anaerobio según la norma TM0194-2014, descrito en el Apéndice

C. Volumen 500ml. En este buffer se suspenden los cupones para ser impactados con el biocida a
evaluar. Es importante destacar, que esta solución buffer es una solución de carácter inorgánico que
no proporciona crecimiento adicional a la biopelícula ya formada en el paso anterior.
2. Montaje de los recipientes de evaluación de 50ml con buffer, el cupón con biopelícula formada
suspendido en el líquido sobre el cual se impactará el biocida y la dosis a evaluar del mismo por un
tiempo de contacto especifico.
3. Formulación de matriz para la evaluación (Figura 10). Las dosis para evaluación fueron 200ppm a
2h y 5h de contacto y 350ppm y 500ppm a 2h de contacto.
4. Cálculo de los volúmenes de biocida en función a las dosis a evaluar.
5. Todos los materiales de trabajo se lavaron y esterilizaron para evitar la contaminación
microbiológica y asegurar la asepsia, según sea el caso.

35
 Figura 10. Matriz de trabajo para la evaluación de Eficiencia del Biocida BIO 03-CSMA.
Fuente: propia

Evaluación de Eficiencia:

El procedimiento desarrollado por INCORS, utilizado para la evaluación del biocida se fundamentó en la
norma NACE TM0194-2014 y de la experiencia de sus expertos en el tema (Paper C2015-5793: Evaluation
of Non-oxidizing Biocides to Control Sulfate-Reducing Bacteria on a Produced Water Injection Plant). En
resumen, el desarrollo de la evaluación consistió en suspender los cupones con biopelícula formada en una
solución de buffer PBS, y en dicha solución se agregaría la dosis del biocida a evaluar que debería impactar
la biopelícula y matar las bacterias adheridas. El biocida BIO 03-CSMA fue evaluado a concentraciones
de 200, 350 y 500 ppm. Para la dosis de 200ppm los tiempos de contacto fueron de 2 y 5 horas; mientras
que las dosis 350 y 500ppm solo evaluaron a tiempo de contacto de 2horas. La Figura 11 muestras fotos de
parte de la evaluación realizada en la evaluación.

36
 Figura 11. Evaluación del Biocida BIO 03-CSMA a nivel de laboratorio de planta.

3.2.2.3. Fase III: Conteo de bacterias empleando la técnica de dilución seriada luego de impactar el
biocida contras los cupones con biopelícula para de medir su efectividad.

Una vez terminado los tiempos de contacto se procedió a contar las bacterias sésiles adheridas a los cupones
raspando los mismos, tras ser impactado sin y con una dosis de biocida específica de 200, 350 y 500ppm.
El raspado de los cupones se hace con ayuda de un hisopo, que se vierte un vial de buffer para concentrar
la cantidad de resto sólidos, depósitos y biopelícula extraída del cupón. Luego, ese vial PBS se homogeniza
y extrae una alícuota de 1ml para iniciar al conteo de bacteria tanto APB y SRB por la técnica de dilución
seriada y NMP. Finalmente, una vez que termina la dilución se procede a la incubación a 37° de todas las
muestras (Control y dosis). Los tiempos de incubación varían dependiendo del tipo de bacterias, para las
APB son 14 días, mientras que para las SRB son 28 días.

3.3. Evaluación del sistema de inyección del biocida y su aplicación actual a nivel de campo

Para el desarrollo de este objetivo se realizó una revisión del estado del arte del tratamiento con biocidas;
inicialmente, se revisó los puntos de inyección del biocida según la indicación de los planos que permitiera
evaluar si son adecuados en función al proceso de producción de crudo. Seguidamente en campo, se
constató lo puntos propiamente, cuál era su condición de existencia o no y su uso respectivo. Finalmente,
se realizaron entrevistas con el personal encargado del tratamiento químico para aplicación actual del
biocida a nivel de campo. En los resultados, se dejará saber toda la información recabada hasta el momento,
así como las conclusiones y recomendaciones al respecto sobre el tratamiento químico con biocidas.

4. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

4.1. Análisis microbiológico mediante contaje de bacterias SRB y APB usando la técnica de dilución
seriada con la estadística de Número Más Probable.

Tal y como se indicó en la metodología, el conteo de bacterias para todas las muestras se realizó usando
medios de cultivo selectivos de crecimiento para bacterias SRB y APB a 37°C y aplicando dilución seriada
con NMP, técnica usada frecuentemente a nivel industrial por su bajo costo y facilidad de en la ejecución
e interpretación (Norma NACE TM0194-2014). La Tabla 7 muestra un resumen de los resultados
obtenidos, del análisis puntual realizado en este proyecto, de SRB y APB planctónicas, del agua contenida
en varios equipos de procesos, donde potencialmente se puede desarrollar el mecanismo de corrosión
microbiana (MIC). El contaje planctónico se realizó debido a que no se cuenta en estos equipos de cupones
o forma de colectar biopelículas para el contaje de bacterias sésiles, fundamentales para determinar la
susceptibilidad a MIC. Las bacterias planctónicas se determinaron para conocer la potencialidad del agua
37
al posible desarrollo de bacterias sésiles causantes de MIC, obviamente esto depende de muchos factores
entre ellos la concentración de nutrientes y no es una relación directa.

Separador de producción 1-V-200B y Tanque de reposo 1-T-620:

En líneas generales, se presentó muy bajo crecimiento de bacterias planctónicas mesófilas SRB y APB en
las muestras colectadas en el Separador de producción 1-V-200B y Tanque de reposo 1-T-620, al
compararse con el máximo permitido de 102 NMP/ml; lo cual podría indicar baja potencialidad del agua a
formar bacterias sésiles mesófilas, SRB y APB generadoras de MIC. La muestra de agua del Tanque de
Reposo 1-V-200B también fue incubada a la temperatura de operación del separador de 85 °C, para analizar
el desarrollo de bacterias SRB y APB termófilas y no se observó crecimiento.

La ausencia de crecimiento observada en esta evaluación puntual y usando medios de cultivos seletivos y
condiciones de 37 y 85°C, podría indicar lo siguiente:

1. Baja potencialidad del agua al desarrollo de bacterias SRB y APB mesófilas (37 °C) y termófilas
(85 °C) cultivables; lo cual refleja la acción de la temperatura de operación en estas bacterias para
el momento del muestreo, siempre y cuando se mantenga una operación continua a altas
temperaturas y sin fluctuaciones; es decir, si la operación se hace intermitente para las líneas de
flujo y los equipos de procesos o se deja el agua estancada a temperatura ambiente, puede variar el
crecimiento de bacterias a valores por encima de 10 2 NMP/ml; por lo tanto, el riesgo de aparición
del mecanismo de MIC por bacterias SRB y APB mesófilas podría ser significativo; ya que es la
condición más favorable para su desarrollo ante un agua conteniendo mayor de 100 ppm de SO4=,
6.6 de pH y entre 45000 y 50000 ppm de cloruros.
2. Es posible que existan otro tipo de bacterias no cultivables como las Archaeoglobus,
microorganismo que crece a altas temperaturas entre 60 y 95°C. Ellas son arqueas reductoras de
sulfato (SRA) que producen sulfuros en su proceso de reducción de sulfato y oxidación de la materia
orgánica. También puede estar presentes las Methanogens, microorganismo que produce matano
en su proceso metabólico en ausencia de O2 y produciendo una despolización catódica al consumir
el hidrógeno, resultando un aumento indirecto de la velocidad de corrosión; es por ello, conveniente
realizar pruebas adicionales usando Biología Molecular, fuera del alcance de este servicio, que
permitan identificar este tipo de bacterias, y cualquier otro no cultivable, en general no tan comunes
y agresivas como las SRB y APB mesófilas, pero se han determinado en estos sistema de producción
de crudo a altas temperaturas, como se mencionó anteriormente en la revisión realizada.
3. Las muestras colectadas son de tipo planctónicas. Se requiere de muestras sólidas, depósitos o
bipelícula que permitan el conteo de bacterias sesiles a estas condiciones de temperatura de
operación para confirmar la susceptibilidad a MIC.

Tanque Sumidero T-310 y Tanque de agua fresca:

Los equipos de procesos donde el agua se encuentra a condiciones de temperaturas ambiente, estancamiento
y nutrientes necesarios como el Tanque Sumidero T-310 y Tanque de agua fresca, reportaron el crecimiento
planctónico esperado > 102 NMP/mL; por tanto, quedan fuera de los criterios de aceptación que se manejan
a nivel internacional (Tabla 8). Es decir, que una fuente de contaminación bacteriana importantes en las
instalaciones de PETROTAL, es el agua contenida en estos tanques; siendo necesario abordar su
tratamiento microbiológico de manera efectiva y eficiente mediante un biocida que actúe a nivel de las
bacterias sésiles.

38
 Tabla 7. Resultados de la línea base de crecimiento bacteriano Planctónico.
Temperatura de incubación Tipo de bacterias / Planctónicas
Descripción de la
Items de la muestra (°C) Bacterias APB - Bacterias SRB -
muestra
NMP/ml NMP/ml
Fondo de Separador
de Producción 1-V- 37 0 0.36
200B

Comentarios: el crecimiento bacteriano en el separador de producción 1-V-200B, estuvo en

menor de 1.0 NMP/ml, muy por debajo del máximo permitido de 102 NMP/mL, tanto para las
bacterias APB como para las SRB.
Temperatura de incubación Tipo de bacterias / Planctónicas
Descripción de la
Items de la muestra (°C) Bacterias APB - Bacterias SRB -
muestra
NMP/ml NMP/ml
Fondo de Tanque de
37 0.92 10
Reposo 1-T-620

39
 Comentarios: el crecimiento bacteriano en el Tanque de Reposo 1-V-620 estuvo por debajo
del máximo permitido de 102 NMP/mL, tanto para las bacterias APB como para las SRB. Es
importante indicar que para las bacterias SRB se determinó un crecimiento de 10 NMP/ml
asociadas al desarrollo de bacterias de tipo SRB mesófila, que creciron a temperaturas de 37°C;
lo cual indica una posible potencialidad de esta agua a desarrollar bacterias SRB a nivel sésil, si
el agua del tanque disminuye su temperatura a condiciones ambientales. Las bacterias en general
pueden adecuarse a ciertas condiciones extremas y permanecer inactivas y una vez, que las
mismas reciben condiciones favorable de temperatura y nutrientres pueden proliferar
exponencialmente. Esta situación puede darse cuando un sistema (pozo, linea de flujo o equipos
de proceso) esta en operación, y por algún motivo deja de operar; también puede verse en los
sistemas donde la operación es intermintente.
Temperatura de incubación Tipo de bacterias / Planctónicas
Descripción de la
Items de la muestra Bacterias APB - Bacterias SRB -
muestra
(°C) NMP/ml NMP/ml
Fondo de Tanque de
85 0 0
Reposo 1-T-620
Efecto de alta T

Comentarios: el crecimiento bacteriano en el Tanque de Reposo a 85°C fue negativo tanto para
las bacterias APB como para las SRB, indicativos que a esta temperatura las bacterias termófilas
cultivables no crecen; pero se mantienen bajo condiciones latentes y una vez dadas las
condiciones inician su crecimiento; tal cual se observó con el ensayo a 37°C (mesófilas).
Temperatura de incubación Tipo de bacterias / Planctónicas
Descripción de la
Items (°C) Bacterias APB - Bacterias SRB -
muestra
NMP/ml NMP/ml
Tanque Sumidero T-
37 9.30E+04 2.40E+04
310 de la Fase CPFI

40
 Comentarios: el crecimiento bacteriano en el Tanque sumidero estuvo por encima del máximo
permitido tanto para bacterias APB como para SRB (9.30E+04 y 2.40E+04 NMP/ml,
respectivamente) a las condiciones de incubación de 37°C, que simula la condición de
temperatura ambiente que tiene el equipo (sumidero). Normalmente los sumideros tienen
condiciones de estancamiento, temperaturas óptima (37°C) de crecimiento para bacterias
mesófilas como las SRB y APB; adicionalmente, estos equipos reciben diferentes fluidos de
procesos que generan un ambiente con los nutrientes necesarios para el crecimiento de bacterias.
Es importante resaltar, que la condición de estancamiento propicia grandemente la posiblidad de
generarse una biopelícula en la interfase metal/solución que propician una corrosión interna
primero generalizada pero que va potenciando una posible falla localizada o por picadura, que
son los daños y morfología típicas de estos microorganismos asociados a MIC.
Temperatura de incubación Tipo de bacterias / Planctónicas
Descripción de la
Items (°C) Bacterias APB - Bacterias SRB -
muestra
NMP/ml NMP/ml
Fondo de Tanque de
sistema de Agua 37 9.30E+02 0
Fresca

Comentarios: el crecimiento bacteriano en el Tanque de agua fresca estuvo por encima del
máximo permitido para bacterias APB no asi para las SRB (9.30E+02 NMP/ml) a las condiciones
de incubación de 37°C, que simula la condición de temperatura ambiente que maneja dicho
tanque. La ausencia de crecimiento de SRB probablemente se debe a que en el punto de muestreo,
el agua fresca contenida en el tanque está aerobia. Por otro lado, el crecimiento de las APB era
como se esperaba ya que están dadas las condiciones de temperatura para estas bacterias
mesófilas. Además, es un estuario naural (agua de rio) como agua fresca, la cual contiene todos
los nutrientes orgánicos e inorgánicos que permiten el desarrollo óptimo de estos
microorganismos aerobios facultativos como las APB.

41
 Tabla 8. Criterios de aceptación para la densidad poblacional de bacterias.
(Máximo permisible)
Conteo de bacterias Conteo de bacterias
Tipo de bacterias
sésiles planctónicas
SRB ≤ 10 NMP/ml
2
≤ 102 NMP/ml
APB ≤ 102 NMP/ml ≤102 NMP/ml

Separador de Producción 1-V-200B Contaje sésil:

En la Tabla 9 se resumen el resultado obtenido del análisis microbiológico Sésil realizado a la arena extraída
del Separador de Producción 1-V-200B; esta muestra es importante y clave ya que permite poder inclinarse
al posible desarrollo del mecanismo de corrosión microbiana, o susceptibilidad a MIC. En líneas generales,
no se presentó crecimiento importante de bacterias sésiles SRB y APB, en dicho equipo de proceso que
maneja temperatura operacional promedio de 90 °C, por las mismas razones discutidas anteriormente.

Tabla 9. Resumen de resultados de la línea base de crecimiento bacteriano de tipo Sésil.

Temperatura de Tipo de bacterias / Sésiles
Item
Descripción de la muestra incubación de la Bacterias APB - Bacterias SRB -
s
muestra (°C) NMP/ml NMP/ml
Separador de Producción 1-
37 0.3 9.2
V-200B

Comentarios: para el análisis de crecimiento bacteriano asociado a MIC en esta muestra sésil del
Separador de Producción 1-V-200B, se obtuvo un crecimiento muy bajo; según el criterio de
aceptación manejado por INCORS (≤ 102 NMP/ml) tanto para las bacterias APB como las SRB.
Sin embargo, es importante indicar que para las bacterias SRB se determinó un crecimiento de casi
10 NMP/ml desarrolladas a condiciones de temperaturas de 37°C; lo cual estaban contenidas en
forma latente en la muestra recoletada.
Como se indicó anteriormente, las bacterias en general pueden adecuarse a ciertas condiciones
extremas y permanecer inactivas y una vez, que las mismas reciben condiciones favorable de
temperatura y nutrientres pueden proliferar exponencialemente. Esta situación puede darse cuando
un sistema (pozo, linea de flujo o equipos de proceso) esta en operación, y por algún motivo deja
de operar; también puede verse en los sistemas donde la operación es intermintente.
Adicionalmente, es probable que se requieran de pruebas adicionales (Métodos Microbiolócos
Moleculaes) para cuantificar bacterias como las arqueas reductoras de sulfato (SRA) y

42
 metanógenas que son bacterias que pueden crecen a altas temperaturas y condiciones extremas, no
cultivables con los medios de cultivos tradicionales.

Es importante considerar también que para el diagnóstico de MIC en cualquier sistema, los resultados
positivos de identificación de bacterias APB y SRB planctónicas o sésiles con medios de cultivos
enriquecidos es uno de los tres factores que deben considerar para este diagnóstico; Por lo tanto, un correcto
diagnóstico de MIC se logra mediante la observación de tres evidencias: 1) Presencia de microorganismos
causantes de corrosión o sus subproductos, siendo esto lo primero que debe analizarse 2) Productos y
depósitos de corrosión específicos como mackinawita, greigita y pirita de la corrosión relacionada con SRB
y 3) Morfologías de corrosión únicas; lo cual se debe hacer decapando la muestra y observándola al
microscopio óptico. Tradicionalmente, el diagnóstico de MIC ha dependido del método de crecimiento
dependiente del cultivo, como el método del número más probable (NMP); pero puede pasar como se ha
indicado anteriormente, que los métodos de microbiología convencionales no puedan proporcionar la
identificación completa de bacterias, requiriendo técnicas complementarias como los métodos moleculares.

4.2. Evaluación de la eficiencia del biocida contra bacterias sésiles a nivel de laboratorio.

En la Tabla 10, se muestran los resultados de la evaluación de eficiencia del Biocida BIO 03-CSMA sobre
bacterias sésiles contenidas en una biopelícula formada a nivel de laboratorio bajo condiciones más
agresivas de estancamiento y temperatura ambiente. Como se indicó en la metodología, las bacterias o
cultivo mixto utilizados para esta evaluación fueron extraídos del tanque sumidero T-310 y el biocida fue
evaluado a las dosis por choque de 200, 350 y 500 ppm con un tiempo de contacto de 2h. Adicionalmente,
se midió la dosis de 200ppm a 5 horas de tiempo de contacto

La enumeración de bacterias sésiles del cupón que no recibe tratamiento con el biocida “Control” permite
medir la eficiencia de matanza del biocida, determinándose un crecimiento bacteriano de APB en
1.50E+03NMP/ml y para las SRB en 7.50E+03 NMP/ml, que manifiestan un crecimiento considerable y
no aceptable según los criterios establecidos previamente.

Los resultados de la eficiencia del biocida reflejan una excelente respuesta (100% de Eficiencia) del
producto con las diferentes dosis de evaluación frente a tiempos cortos y más prolongados como las 5 horas.
Estos resultados, permiten definir la dosis más baja de 200ppm a 2 horas por choque como la dosis óptima
y eficiente que reduce el crecimiento bacteriano a los criterios aceptables considerados.

Como se indicó, esta evaluación de eficiencia del biocida se desarrolló a condiciones de temperatura óptima
de crecimiento de 37°C y de flujo estanco; por lo tanto debe funcionar adecuadamente como inyección por
choque de 200 ppm en el tanque de agua fresca y en el sumidero, según frecuencias establecidas por el
fabricante; pero deberían ser semanalmente; aunque esto se determina haciendo evaluaciones de curva de
matanza bacteriana con el tiempo. En el caso del agua de producción y de inyección donde la potencialidad
de crecimiento de bacterias mesófilas y termófilas de SRB y APB es bajo por la temperatura del agua, es
necesario realizar evaluaciones complementarias que permita la caracterización microbiológica de bacterias
termófilas no cultivables del tipo Archaeoglobus y Methanogens; para luego realizar la evaluación de la
eficiencia del biocida contra estas bacterias al igual que sus propiedades secundarias; principalmente
estabilidad térmica y compatibilidad con el inhibidor de corrosión y el secuestrante de O2. Está información
es de gran valor para conocer cómo será la eficiencia del producto en su aplicación al proceso.

Finalmente y para enfatizar, la aplicación del biocida en el agua de producción y de inyección va a depender
de la debida identificación, cuantificación y proliferación de bacterias. Una vez confirmada la presencia de
microorganismos realizar la aplicación del biocida en campo de forma correcta con los ajustes necesarios
de dosis y tiempo de contacto continuo o por choque. Para la implementación en campo, se requiere además
de la instalación de cupones de corrosión que permitan la formación de biopelículas para medir eficiencia
43
del biocida sobre las bacterias sésiles que se desarrollan en los cupones. La utilización de pruebas
complementarias que permitan la enumeración de bacterias termofílicas que proliferan a condiciones
extremas comúnmente en los sistemas asociados a la producción de crudo, es necesario para evaluar la
necesidad de usar biocidas bajo condiciones normales de operación y su eficiencia.

Tabla 10. Evaluación de Eficiencia del Biocida BIO 03-CSMA sobre bacterias sésiles
Tipo de bacterias / Sésiles Tiempo de
Choque
Descripción Bacterias Bacterias
%Eficiencia %Eficiencia del
de la muestra APB - SRB -
APB SRB Biocida
NMP/ml NMP/ml
(horas)
Muestra # 1:
Control 1.50E+03 7.50E+03 2
(Sin Biocida)

Tipo de bacterias / Sésiles Tiempo de

Choque
Descripción Bacterias Bacterias
%Eficiencia %Eficiencia del
de la muestra APB - SRB -
APB SRB Biocida
NMP/ml NMP/ml (horas)
Muestra # 2:
Concentración 0 0 100 100 2
200ppm

Tipo de bacterias / Sésiles Tiempo de

Choque
Descripción Bacterias Bacterias
%Eficiencia %Eficiencia del
de la muestra APB - SRB -
APB SRB Biocida
NMP/ml NMP/ml (horas)

44
 Muestra # 3:
Concentración 0 0 100 100 2
350ppm

Tipo de bacterias / Sésiles Tiempo de

Choque
Descripción Bacterias Bacterias
%Eficiencia %Eficiencia del
de la muestra APB - SRB -
APB SRB Biocida
NMP/ml NMP/ml
(horas)
Muestra # 4:
Concentración 0 0 100 100 2
500ppm

Tipo de bacterias / Sésiles Tiempo de

Choque
Descripción Bacterias Bacterias
%Eficiencia %Eficiencia del
de la muestra APB - SRB -
APB SRB Biocida
NMP/ml NMP/ml
(horas)
Muestra # 5:
Concentración 0 0 100 100 5
200ppm

45
4.3. Evaluación del sistema de inyección del biocida y su aplicación actual a nivel de campo

En la Figura 12, se observan los puntos de inyección de química específicamente para el biocida en tres
ubicaciones específicas según los planos, como: 1) Línea 8"-PW-A2-CPF1-154 de entrada a la bota
desgasificadora 1- B-600 adyacente al Tanque Skimmer 1-T-610, 2) Línea 8"-PW-A2-CPF1-158 de entrada
al Tanque de Reposo 1-T-620 y 3) Línea 8"-IW-A2-CPF1-301 de entrada a las Bombas 1-P-650A/B de
Inyección de Agua al pozo 2WD. No obstante, durante la evaluación en planta solamente se observó
operativo, pero sin inyección, el punto 1) a la entrada del tanque Skimmer con una configuración diferente
a la indicada en el plano. El biocida a base de THPS y sales de amonio cuaternario (Quats) se inyecta en el
1er punto justo antes de la inyección del secuestrante de O2 a base de bisulfito de amonio con una separación
de 15 a 20 cm aproximadamente y como a metro y medio aguas abajo del inhibidor de corrosión a base de
Imidazolinas (Figura 13), desconociéndose la compatibilidad entre los 3 productos suministrados por
diferentes casas tratantes y sus propiedades secundarias (estabilidad térmica a 90°C principalmente). Para
el momento de la evaluación no se estaba inyectando biocida en este punto.

1. Puntos de inyección de química en la línea 8"-PW-A2-CPF1-154 de entrada a la bota

desgasificadora 1- B-600 adyacente al Tanque Skimmer 1-T-610

2. Puntos de inyección de química en la línea 8"-PW-A2-CPF1-158 de entrada al Tanque de

Reposo 1-T-620

46
3. Puntos de inyección de química en la línea 8"-IW-A2-CPF1-301 de entrada a las Bombas 1-P-
650A/B de Inyección al pozo inyector 2WD

Figura 12. Puntos de inyección de química (Biocida)

Numeración de izquierda a derecha: 4 (Biocida), 5 (Secuestrante de O2) y 10 (Inhibidor de corrosión).

Puntos de inyección de biocida y secuestrante. Punto de inyección del inhibidor.

Figura 13. Punto de inyección del inhibidor de corrosión antes del tanque Skimmer colocado aguas
abajo de la inyección del Biocida y del Secuestrante de Oxígeno.

47
5. CONCLUSIONES

De acuerdo con la evaluación realizada durante el periodo 26/11 al 10/12/2020 y los resultados obtenidos,
se concluye lo siguiente:

1. En operación normal desde el pozo productor hasta el pozo inyector y bajo las condiciones de altas
temperaturas del agua asociada al crudo del Lote 95 (aproximadamente 90°C), operado por
PETROTAL, la potencialidad de crecimiento de bacterias cultivables mesófilas y termófilas del
tipo SRB y APB es baja; por lo tanto, pareciera poco probable que se presente MIC por estas
bacterias. No obstante, si esta condición de alta temperatura no se mantiene si es probable que se
presente MIC por SRB y se requiera la inyección del biocida.
2. Se requieren evaluaciones con técnicas no convencionales como biología molecular para determinar
bacterias no cultívables del tipo Archaeoglobus y Methanogens y confirmar la baja susceptibilidad
a MIC a altas temperaturas en las instalaciones de PETROTAL, desde el pozo productor hasta el
inyector, y la necesidad de usar o no biocidas en condiciones normales de operación a altas
temperaturas.
3. Como era lo esperado los sistemas con mayor potencialidad a MIC por bacterias mesófilas SRB y
APB son los relacionados con el tanque de agua fresca y el sumidero.
4. El biocida BIO 03-CSMA funciona eficientemente por choque a una dosis de 200 ppm contra un
cultivo mixto de bacterias SRB y APB mesófilas extraído del agua contenida en el tanque sumidero.
5. La dosis de 200 ppm con 2 horas de contacto por choque puede considerarse como la dosis óptima
y eficiente que reduce el crecimiento de bacterias a los criterios de crecimiento aceptables menores
de 102NMP/ml. Es posible que esta dosis sufra un ajuste fino cuando el tratamiento con el biocida
sea aplicado en campo, bajo las condiciones reales de procesos.
6. Los puntos de inyección del biocida esta muy cerca de los puntos de inyección del secuestrante de
O2 y del inhibidor de corrosión por lo cual podría haber problemas de compatibilidad entre estos
productos de diferentes casas tratantes.

6. RECOMENDACIONES

1. Realizar evaluaciones complementarias al agua de producción y de inyección que permitan la

caracterización microbiológica de bacterias termófilas no cultivables del tipo Archaeoglobus y
Methanogens, mediante biología molecular, y dependiendo de los resultados realizar la evaluación
de la eficiencia del biocida contra estas bacterias al igual que sus propiedades secundarias;
principalmente estabilidad térmica y compatibilidad con el inhibidor de corrosión y el secuestrante
de O2.
2. Instalar cupones de corrosión en las lineas de flujo y de inyección que permitan la formación de
biopelículas en campo y la determinación de bacterias sésiles junto con la eficiencia del biocida.
Adicionalmente, la obtención de depositos para la evaluación e identificación de los productos de
corrosión, la determinación de velocidad de corrosión por gravimetría y la morfología de ataque
para diferenciar los mecanismos de corrosión.
3. Iniciar el tratamiento del tanque de agua fresaca y sumidero inyectando por choque 200 ppm del
biocida BIO 03-CSMA con frecuencias a determinar por el fabricante mediante evaluaciones de
matanza en el tiempo. Este tratamiento debe ser aplicado en caso al agua de producción y de
inyección como contingencia en caso de generarse temperaturas óptimas de crecimientos de
bacterias mesófilas de SRB y APB.
4. Mantener siempre en control el crecimiento bacteriano en todas las instalaciones de PETROTAL
con valores ≤ 102 NMP/ml, para lo cual debe hacerse un monitoreo de bacterias SRB y APB usando
medios de cultivos especificos y/o evaluaciones mediante biología molecular.

48
 5. Realizar evaluaciones que permitan determinar la compatibilidad entre el biocida a base de THPS,
el secuestrante de O2 a base de bisulfito de amonio y el inhibodor de corrosión a base de
Imidizalinas.

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