UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS Y

BIOTECNOLOGÍA

CARRERA DE INGENIERÍA EN ALIMENTOS

INFORME #2

DATOS INFORMATIVOS:

Asignatura: Biología General

Semestre: Segundo Paralelo: “A”
Carrera: Alimentos Fecha de entrega:
15/11/2022
Integrantes: Arelis Montoya, Juan Asaquibay, Jennifer Collaguazo, Sebastián Morocho,
Andrea Campaña

1.INTRODUCCIÓN

Existe una gran variedad de tinciones las cuales pueden ser aplicadas dentro de varios campos,
estás técnicas de tinción han sido desarrolladas con el fin de aprovechar las ventajas que
brindan los microscopios, permitiendo destacar las características morfológicas de los
microorganismos. Las tinciones pueden clasificarse como simples cuando la muestra es teñida
solo de un color y se utiliza un solo colorante, la tinción es diferencial, cuando se puede
visualizar más de un color ya que se utiliza más de un colorante como en la tinción Gram, la
tinción específica, cuando se utilizan anticuerpos marcados con una molécula fluorescente para
de esta manera identificar una estructura celular específica. Ciertas técnicas de tinción como la
Gram requieren previamente un proceso de fijación de las muestras, con el fin de conservar la
arquitectura química y estructural de las células.

La tinción Gram es una tinción diferencial, debido a que se utilizan os colorantes y permite
clasificar a las baterías en dos grupos, las bacterias Gram positivas y las baterías Gram
negativas, el fundamento de esta tinción se basa en las características de la pared celular de las
bacterias, que es lo que le confiere propiedades específicas a cada microorganismo, por un lado
las bacterias Gram positivas tienen una pared celular gruesa formada por peptidoglicano, pero
no cuentan con membrana externa, mientras que las Gram positivas tienen una capa delgada
de peptidoglicano y además tiene una membran lipídica externa, para esta tinción se coloca un
colorante primario que es el cristal de violeta el cual tiene afinidad con el peptidoglicano de la
pared celular, luego se agrega Lugol como fijador, después una mezcla de alcohol-cetona,
debido a que las Gram positivas tienen mayor cantidad de peptidoglicano pueden retener con
más fuerza el complejo cristal violeta-yodo que se forma, lo cual no sucede con las Gram
negativas, finalmente se coloca safranina como colorante secundario el cual sirve para teñir las
bacterias que no pudieron retener el complejo, de esta forma se observa en el microscopio que
las bacterias Gram positivas se tiñen de un color azul obscuro a morado, mientras que las Gram
negativas se observan de un color rosado a rojo (López et al., 2014).

2. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL:

Realizar tinciones bacterianas mediante la utilización de técnicas sencillas para la posterior

observación en el microscopio de microorganismos estableciendo comparaciones entre las
bacterias eucariotas y procariotas.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

Identificar mediante la observación en el microscopio si las bacterias son Gram (positivas) o

Gram (negativas).

Comprender el correcto procedimiento para las tinciones de tal manera que se logre obtener
los resultados requeridos.
3. METODOLOGIA
4.DATOS Y RESULTADOS

Tabla 1.

Muestra Lente usado Observación Argumento

Tinción simple 100 x Tinción simple con
azul de metileno de
Staphylococcus
aureus, nos
proporciona
información sobre
la forma y la
agrupación en
racimos.

Riego 100 x Se puede observar

dos tipos de
bacterias bacilos
gramnegativos
causantes de
infecciones.

Yogurt (griego) 100x Se puede observar

el movimiento
“browniaco”
(Choque de las
moléculas de agua
en continua
agitación
microscópicas).
Bacteria 100x En este cultivo se
Ambiental pudo encontrar
microorganismos
recuperados de este
cultivo ambiental.

Fuente: Laboratorio de Biología General FCIAL

5. DISCUSIÓN

La tinción de Gram forma parte de una tinción diferencial, la misma que es una de las técnicas
de coloración más fáciles y empleadas en microbiología, utiliza cristal violeta, Lugol, alcohol
96% y safranina, colocados con tiempos de 30 segundos a 1 minuto, capaz de permitir la
identificación de características propias de los microorganismos, así como distinguir entre
bacterias Gram positivas y negativas en las muestras seleccionadas (Christian, 2021). Por tal
razón en la práctica realizada todas las muestras fueron observadas con mayor prioridad con el
objetivo 100x el cual fue utilizado con aceite de inmersión con el fin de evitar la presencia de
aire entre el objetivo y la preparación (Christian, 2021).

En la tabla 1, la imagen correspondiente al yogurt observado con el objetivo 100x, permite la

observación de estreptococos y estafilococos ´´4 o más esferas juntas´´, así también
lactobacilos (bacilos microaerófilos) todos Gram positivos, responsables de la formación de
ácido láctico como producto de la fermentación de azucares. Según Gilani, (2021), el yogurt
es uno de los alimentos que derivan de la simbiosis entre dos bacterias, el streptococcus
thermophilus y el lactobacillus bulgaricus estimuladas la una a la otra.

En la imagen correspondiente a agua de riego, mediante el correcto uso del microscopio y

información recopilada ha sido posible la identificación de bacterias contenidas en la muestra
como lo puede ser E. coli y E. cloacae (Corrales. et al., 2018). Las mismas que son dos tipos
de bacterias Gram negativas, pertenecientes al género enterobacter, presentes como microbiota
local y morfología de cocos o bacilos (Puerta et al, 2010).

Mientras tanto en la imagen de riego realizada con Gram las bacterias se mantienen Gram
negativo siendo mayormente identificadas como pseudomas, alcaligenes, flavocaterium
(Álvarez, L. 2019). Puesto que su reconocimiento total no puede generarse por la gran cantidad
de estas presentes y de manera muy aglomerada entre sí. No obstante, debido a la muestra
ambiental realizada con tinción simple fue mucho más observable la identificación de las
bacterias presentes permitiendo de esa manera corroborar la presencia de las bacterias
anteriormente dichas.

6. CONCLUSIONES

- Se realizó diferentes tinciones como; Tinción de Gram y Tinción simple se diferencia en

que la Tinción simple es aquella que se refiere al uso de un solo colorante para crear contraste
entre la bacteria y el medio que lo rodea. Este tipo de tinción es sencilla ya que aporta
información de la forma de la célula, el tamaño y la forma de agruparse. Mientras que en la
Tinción de Gram se utiliza más de un colorante a más de ser útil para evidenciar la forma,
tamaño y a la forma de agruparse de los microorganismos sirve para distinguirlos entre Gram
positivos y Gram Negativos dependiendo del color que adopten después de la coloración.

- Se identificó mediante la utilización del microscopio cuales eran las bacterias Gram
positivas y Gram negativas. Las Gram positivas se clasifican por el color que adquieren
después de aplicarles un proceso químico denominado tinción Gram, se tiñen de azul cuando
se les aplica dicha tinción mientras que las Gram negativas se tiñen de rojo y sus
características son únicas.

- Se determinó que la tinción es un proceso por el cual las moléculas de un colorante se

absorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los
microorganismos y poder realizar la observación en microscopio óptico obteniendo los
resultados requeridos.

7. RECOMENDACIONES

- Poner en práctica la tinción diferencial Zhiel Neelsen, siendo esta una técnica de coloración
que de igual manera nos permite la identificación de microorganismos basándose en las
propiedades de la pared celular.

- Adicional la práctica de tinción simple a partir de la fucsina fenicada o carbolfucsina cuya

propiedad permite su Unión en ácidos carbónicos existentes en la pared celular seria.

- Considerar que la toma de muestra con el asa sea minúscula, realizando el frotis de manera
adecuada para poder fijar bien la muestra y no ocasionar una sobresaturación.

8. CUESTIONARIO:

1. Indique las limitaciones de la tinción Gram

La tinción Gram no solo sirve para bacterias, sino también para algunos parásitos y hongos, sin
embargo, este tipo de tinción tiene algunas limitaciones, es así que en la tinción de Gram en
tejido existen algunos microorganismos que no se colorean, como por ejemplo la Legionella ,
Treponema pallidum, Bartonella spp y Leptospira, otra de sus limitaciones es que la tinción de
Gram se puede perder en tejidos descalcificados o que se encuentran en formol por largos
tiempos, lo que puede dar como resultado falsos negativos, es decir las limitaciones se dan por
las características de la muestra, el protocolo de tinción y también debido a que algunas
bacterias no poseen pared celular (Jiménez & Vélez, 2012).

2. Mencione 4 aplicaciones de la Tinción Gram

La tinción Gram se aplica para determinar los tipos de microorganismos presentes en una
muestra o alimento, para de esta manera saber si las baterías que se encuentran en los mismos
son de carácter dañino para la salud o a su vez ayudan a que el alimento adquiera sus
propiedades organolépticas.

- Se identifican algunas bacterias que participan en la fermentación de vegetales y en la

acidificación de embutidos.
- Otras bacterias tienen aplicación en la elaboración de vino, debido a que producen la
fermentación maloláctica que permite afinar y suavizar los vinos.
- Elaboración de yogurt, quesos, entre otros, debido a la presencia de lactobacillus
(CEUPE, 2022).
- La tinción Gram también se utiliza para determinar si una persona tiene una infección
bacteriana, mostrando so la prueba es Gram positiva o Gram negativa, también se utiliza
para diagnosticar infecciones causadas por hongos (MedlinePlus, 2022).

3. ¿Cuál es el propósito de identificar bacterias Gram positivas y Gram negativas en un

alimento?
El propósito de identificar bacterias Gram positivas y Gram negativas en un alimento es que se
puede identificar si es que el alimento se encuentra contaminado, además de acuerdo al grado
de resistencia permite que los especialistas desarrollen actividades de promoción de salud sobre
las buenas prácticas de manipulación y elaboración de los alimentos dentro del campo
industrial, es así como la identificación de Gram negativos como la Escherichia o pseudomonas
entre otras bacterias que participan en distintos fenómenos de alteración de un alimento nos
indican un que el alimento no es inocuo, por lo tanto no se debería consumir para prevenir el
riesgo de alguna Enfermedad Transmitida por Alimentos contaminados (Méndez, 2020).

4. ¿Qué función cumple el Lugol en la tinción Gram? Explique.

Dentro de la tinción Gram el Lugol cumple la función de mordiente, es decir que este impide
que el cristal de violeta salga, formándose un complejo cristal violeta – yodo que satura los
espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana (López et al., 2014).
9. BIBLIOGRAFÍA:

CEUPE. (13 de noviembre de 2022). Ciencias. Obtenido de Clasificación de las bacterias

alimentarias: https://www.ceupe.com/blog/clasificacion-de-las-bacterias-
alimentarias.html

Christian. (2021a). Observación de microbios: microscopios, colorantes y tinciones.

Microbiología. https://microbiologia.net/microbiologia/microscopios-colorantes-
tinciones/
Christian. (2021b). Tinciones y Colorantes principales. Microbiología.
https://microbiologia.net/microbiologia/tinciones-colorantes/
Corrales Ramírez, L. C., Sánchez Leal, L. C., & Quimbayo Salamanca, M. E. (2018).
Microorganismos potencialmente fitopatógenos en aguas de riego proveniente de la
cuenca media del rio Bogotá. Nova, 16(29), 71-89.
Gilani, N. (2013, junio 13). Tipos de bacterias del yogur. eHow en español.
https://www.ehowenespanol.com/tipos-bacterias-del-yogur-lista_310186/
Jiménez, G., & Vélez, A. (2012). Tinción de Gram de tejido: alcances y limitaciones.
Medicina & Laboratorio, 18(11), 11–12.
López, L., Hernández, M., Colín, C., Ortega, S., Cerón, G., & Franco, R. (2014). Las
tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación En Discapacidad,
3(1), 10–18.
MedlinePlus. (13 de noviembre de 2022). Biblioteca Nacional de Medicina. Obtenido de
Tinción de Gram: https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/tincion-de-
gram/#:~:text=%C2%BFPara%20qu%C3%A9%20se%20usa%3F,para%20diagnostic
ar%20infecctiones%20por%20hongos.
Méndez, M. (2020). Caracterización de agentes bacterianos aislados en brotes de
enfermedades transmitidas por alimentos. Medisan Revista Médica de Santiago de
Cuba, 24(2).