TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico de La Paz

Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica
Agosto – diciembre, 2022

Regulación genética del gen GNS

N -acetilglucosamina 6-sulfatasa
Bioquímica del nitrógeno y regulación genética
Dra. Reyna de Jesús Romero Geraldo

Álvarez Silva, Mildred Joselyn

Bareño Morales Morelia #17310383, l17310383@gmailcom
Grupo “G”
Fecha: 2022-11-29
Resumen

La N-Acetilglucosamina 6-Sulfatasa (EC 3.1.6.14) es una enzima de tipo lisosomal que se encarga de catalizar la

reacción de hidrólisis de los grupos 6-sulfato de unidades N-Acetilglucosamina 6-Sulfato del compuesto conocido como

heparán sulfato, el cual es un glucosaminoglucano formado por la unión de α-glucosamina, de sulfatada como de acetilada,

y ácidos idurónico y glucurónico. La deficiencia en esta enzima produce las enfermedades de tipo lisosomal debido a la

acumulación de ciertos compuestos, en este caso, los glucosaminoglucanos, también llamados mucopolisacáridos,

generando una enfermedad conocida como mucopolisacaridosis. Por tanto, se pretende investigar la regulación de la enzima

participante y el impacto que esta tiene. Como consecuencia la mucopolisacaridosis es una enfermedad de tipo lisosomal

hereditaria (autosómica recesiva) resultante de la deficiencia de algunas enzimas lisosomales en la degradación de los

correspondientes mucopolisacáridos o glucosaminoglucanos asociados a la membrana, en donde radica su función

estructural. Esta enfermedad se clasifica en 4 tipos, donde aquel de interés es el tipo 3, de igual manera clasificado en 4

tipos: A, B, C y D. El caso D corresponde a la enzima EC 3.1.6.14, la cual, es codificada por el gen GNS, del cual su

expresión errónea produce estos trastornos, aumentando los niveles de heparán sulfato. Este síndrome es una enfermedad

degenerativa, acumulativa, genética, incurable y mortal, incluso se le ha llegado a considerar un Alzheimer infantil debido a

que afecta al sistema nervioso central desde el nacimiento; el heparán sulfato acumulado se puede encontrar en la matriz

extracelular y en las glucoproteínas de la superficie celular.

Palabras clave:

Mucopolisacaridosis, terapias génicas, sanfilippo D, codificación, regulación de Gen GNS.

Introducción y objetivos

TecNM/ITLP – Ingeniería bioquímica [2022] - 2

 TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO
Instituto Tecnológico de La Paz
Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica
Agosto – diciembre, 2022
Los mucopolisacáridos (glucosaminoglucanos y
proteoglucanos) son polímeros de unidades repetidas de
disacáridos, los cuales pueden estar compuestos de N-
acetilgalactosamina o bien de N-acetilglucosamina o
derivados de estos; estos poseen un carácter ácido debido a
la presencia de grupos carboxilato o sulfato (Anthony et
al., 2013). Por su parte, la mucopolisacaridosis (MPS)
pertenece a un grupo de enfermedades que se generan por
deficiencias enzimáticas, caracterizadas
acumulación lisosomal de sustancias intermedias del
metabolismo de los mucopolisacáridos
glucosaminoglicanos (GAG), estas son macromoléculas
que proporcionan soporte estructural a la
extracelular y son parte importante de los procesos de
regulación y comunicación celular (Suárez et al., 2016).
El síndrome de Sanfilippo se presenta cuando el cuerpo no
presenta o tiene deficiencia de enzimas que son necesarias
para descomponer cadenas largas de moléculas de azúcar
heparán sulfato (Rappaccioli, 2022), este síndrome se
compone de un grupo de trastornos de almacenamiento
lisosomal causados por una degradación alterada de
sulfato de heparán. Hasta el momento se han identificado
cuatro subtipos, cada uno causado por la deficiencia de
una enzima diferente: heparán N-sulfatasa (tipo A), -N-
acetilglucosaminidasa (tipo B), acetil coenzima A: -
glucosaminida acetiltransferasa (tipo C)
acetilglucosamina-6-sulfatasa (tipo D).
El heparán sulfato se compone de unidades de ácido D-
glucurónico con subunidades de N-acetilglucosamina (α-
glucosamina) de manera repetida y alternada, incluso
puede contener residuos de D-glucosaminos sulfatados o
acetilados, además, es capaz de unirse a ciertas proteínas
conocidas por sus siglas en inglés como HSBP (Heparan
Sulfate-Binding Proteins) cuyas funciones son las anterior
mencionadas, resaltando factores de desarrollo o
crecimiento.
Este compuesto debe regularse, ya que los
glucosaminoglucanos en exceso conlleva a ciertos
trastornos metabólicos (Fauci et al., 2016), por ejemplo, el
catabolismo del heparán sulfato es llevado a cabo en una
hidrólisis de las unidades N-acetil-D-glucosamina 6-
sulfato (específicamente en sus grupos 6-sulfato); dicha
por la
reacción es catalizada por la enzima N-acetilglucosamina
6-sulfatasa (EC 3.1.6.14) de nombre sistemático N-acetil-
o
D-glucosamina-6-sulfato de 6 sulfohidrolasa, que es
codificada por el gen GNS, cuyo destino a la expresión
matriz
son los lisosomas, lugar del catabolismo de estos
glucosaminoglucanos (Andermann et al., 2007). El
síndrome de Sanfilippo tiene una herencia autosómica
recesiva. Por último, el déficit de N acetilglucosamina 6-
sulfatasa conduce a la MPS IIID causado por mutaciones
en el gen GNS situado en el cromosoma 12q14.3 (Fedele,
2015).
La característica principal de la MPS III es la
degeneración del sistema nervioso central (SNC), que
produce retraso mental e hiperactividad, que generalmente
comienza durante la infancia, aunque existe cierta
heterogeneidad con respecto a la gravedad y la edad de
inicio (Fedele, 2015). Por tanto, el objetivo de este
y N-
proyecto, es investigar y estudiar el mecanismo de
expresión y regulación del gen GNS así como el síndrome
que este causa.
Desarrollo
Generalidades de la enfermedad
El síndrome de Sanfilippo es un trastorno metabólico de
origen genético que se caracteriza por ser poco frecuente
entre los humanos (más abundante en infantes). La causa
TecNM/ITLP – Ingeniería bioquímica [2022] - 2
 TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO
Instituto Tecnológico de La Paz
Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica
Agosto – diciembre, 2022

es la deficiencia en la degradación de ciertos hidratos de esta da como resultado la acumulación de sustrato no

carbono en el organismo (azúcares), provocando trastornos degradado y el trastorno de almacenamiento lisosomal
en el cerebro y en el sistema nervioso (National Institute of mucopolisacaridosis tipo IIID (síndrome de Sanfilippo D),
Neurological Disorders and Stroke, 2004). El impacto esta enzima interfiere en la degradación de los diferentes
social que el síndrome de Sanfilippo o MPS IIID se debe mucopolisacáridos presentes en el organismo. El
a que es una enfermedad hereditaria de carácter metabolito degradado se encuentra como constituyente
autosómico recesivo con consecuencias devastadoras, la ubicuo en las glucoproteínas y la membrana basal; la
calidad de vida de las personas que lo padecen es mala presencia del mismo en los lisosomas induce el acto de la
(Red de San Filippo, 2015). En cuanto a incidencia y enzima EC 3.1.6.14 para comenzar el catabolismo de este,
prevalencia el síndrome de sanfilippo afecta a uno de cada evitando así la acumulación de glicosaminoglicanos en los
50.000 nacimientos. Estudios en infantes que padecen la organelos anteriormente mencionados (Benetó et al., 2020;
enfermedad establecen algunos síntomas que comienzan a NCBI, 2022).
observarse a partir de los 4-6 años, entre los que incluyen
Tabla 1. Características de la enzima
hiperactividad, trastornos del sueño, cólera, agresividad y
pánico (Suárez et al., 2016). Como se mencionó Sustrato Unidades de N-acetil D-
anteriormente, la enfermedad resulta de un patrón de glucosamina 6-sulfato+
herencia autosómico recesivo lo que significa que las 2 H2O
copias del gen mutado deben provenir del padre y de la
Producto Unidades de N-acetil D-
madre para que esta enfermedad llegue a desarrollarse
glucosamina + Sulfato
(Fedele, 2015).

Generalidades de la enzima Segundos mensajeros Ca+2

El síndrome de Sanfilippo, o mucopolisacaridosis (MPS) pH óptimo 5.7

tipo III, es uno de los cuatro trastornos de almacenamiento

pl 8.6
lisosomal neurodegenerativos cuyos síntomas se deben a
la degradación lisosomal incompleta del sulfato de Tamaño de AA 552
heparán (Fedele, 2015). Todas las enzimas implicadas en
Peso Molecular (kDa) 62.082
la degradación del sulfato de heparán son hidrolasas ácidas
excepto la heparán-α-glucosaminida N-acetiltransferasa
(HGSNAT) (Andrade et al., 2015). Esta enzima de tipo
lisosomal se encarga de catalizar la hidrólisis de grupos 6-
sulfato de unidades de N-acetil-D-glucosamina 6-sulfato
correspondientes a heparán sulfato y queratán sulfato
generando sus correspondientes unidades de
monosacáridos, así como grupos sulfato. La deficiencia de

TecNM/ITLP – Ingeniería bioquímica [2022] - 2

 TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO
Instituto Tecnológico de La Paz
Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica
Agosto – diciembre, 2022

Figura 1. Estructura tridimensional de N

acetilglucosamina 6-sulfatasa (UniProt BLAST).

Generalidades del gen

Mecanismo y regulación de la expresión del gen
La enzima es codificada por el gen GNS, este gen se
La expresión del gen será inducida en presencia de
encuentra presente en el cromosoma 12 el cual se
mucopolisacáridos (provenientes de su propia biosíntesis)
encuentra regulado a nivel de estructura de la cromatina,
donde la producción de heparán sulfato/queratán sulfato
donde esta sufre de alteraciones en función de los factores
provocarán la activación de esta secuencia genética
de transcripción que se unen a la secuencia genética o
mediante los mensajeros intracelulares, en este caso Ca +2
ADN del gen en sí (Berk et al., 2005; NCBI, 2022).
pasará de su forma inactiva a activa alterando la estructura
Tabla 2. Parámetros del gen GNS. de su barrera (cromatina) mediante la pérdida de la
composición octamérica de los nucleosomas en algunos
Localización (cromosoma) 12q14.3
exosomas, haciendo la cromatina más flexible, los factores
No. total de exones 14 de la transcripción (TFIID, TFIIA, TFIIB, TFIIH y TFIIE)
se unirán al inicio de la región promotora (caja TATA) con
Posición (pb) 65,107,222 - 65,153,226
el desenrollamiento del ADN y la introducción y

Región codificante (pb) 65,110,521 - 65,153,056 activación de la ARN polimerasa II (fosforilada por
TFIIH). Tras realizarse la etapa de iniciación y creada la
Ejemplos de proteínas con SP1 (dedos de Zn) ARNm se continúa con la elongación donde se adicionan
las que interactúa (factores CREB1 (cremallera de nucleótidos a la hebra de ARNm, asegurándose la ARN
de transcripción) Leu) polimerasa que la secuencia de nucleótidos añadida sea la
TFE3 (hélice-lazo-hélice) correcta; posterior a ello ocurre la terminación, donde
termina la transcripción de esta molécula mensajera (al
llegar al codón de terminación del gen) y se separa del
Localización celular Lisosoma
ADN. Este ARNm sufre diversos procesos en el
organismo eucariota durante su etapa de maduración
(Iwasa y Marshall, 2014).
Como se mencionó en la tabla 2, el gen se encuentra
dentro del cromosoma 12 y contiene un total de 14 exones. En función de la presencia de glucosaminoglucanos en los
El segmento de ADN que compone este gen carece de lisosomas, el gen GNS será activado promoviendo la
región operadora (dentro de su promotor), por lo que no es modificación en la cromatina para que puede comenzar su
regulado de manera negativa; en cambio, posee una región transcripción y posteriormente su traducción con la enzima
potenciadora, la cual interactúa con un activador en una N-acetilglucosamina 6-sulfatasa; en caso contrario, si no
regulación positiva. hay sustratos a degradar el gen permanecerá inactivo a
través de esta barrera (Audesirk, Audesirk y Byers, 2013).

TecNM/ITLP – Ingeniería bioquímica [2022] - 2

 TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO
Instituto Tecnológico de La Paz
Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica
Agosto – diciembre, 2022

Síndrome de Sanfilippo D a nivel genético exones 2 y 3 del gen GNS, lo cual tendría como
consecuencia el empalme indirecto o incorrecto de los
El síndrome de Sanfilippo tipo D es causado por
exones correspondientes, de manera que las secuencias a
mutaciones en el gen GNS, se caracteriza por la
codificar no serán las deseadas e incluso el error se llevará
acumulación de glicosaminoglicanos, como heparán
a nivel de ARNm, tomando en cuenta que se lleve la
sulfato, en el depósito lisosomal, resultado de la
transcripción, resultando en un proteína incompleta
deficiencia de la enzima N-acetilglucosamina 6-Sulfatasa
(Fedele, 2015). Hasta el día de hoy el mecanismo por el
(encargada de la degradación del mucopolisacárido) la
cual ocurre esta eliminación se desconoce, sin embargo, se
cual es expresada por el gen GNS por lo que su deficiencia
considera a través de pruebas que una causa podría ser una
se deriva a partir de la codificación de esta secuencia
superposición de un dinucleótido en el punto de ruptura
genómica (Andrade et al., 2015). De acuerdo a estudios se
(Beesley et al., 2007). Dentro de la secuencia a leer de
predice que la causa de esta deficiencia se da a nivel
ADN puede haber cambios en las regiones codificantes,
postranscripcional, con la interrupción en la traducción de
aquellas que la ARN polimerasa se encargará de codificar,
la proteína (enzima) correspondiente; sin embargo,
el ADN puede sufrir mutación con respecto a
también existen casos con mutaciones a nivel de ADN
desplazamiento de la región de terminación, deteniendo la
donde se transcribe esta falla al ARNm y posteriormente
codificación antes de transcribir la secuencia completa de
una incorrecta expresión del producto biológico. Destacan
ARNm; lo anterior puede deberse de igual manera al super
distintas formas de mutación en diversos estudios, entre
posicionado de alguna secuencia de nucleótidos como en
estas la mutación sin sentido, mutación por error de
el caso anterior (Bosschaart et al., 2010).
codificación, mutación por desplazamiento de pauta de
lectura, eliminación o ausencia de grupos y terminación
prematura de lectura de secuencia (Diggelen et al., 2008).

Mutación a nivel transcripcional

Dentro de la secuencia de ADN en diversos casos se

presentan alteraciones en la forma de pérdida de Figura 2. Elaborado en BioRender
componentes básicos, entre los que se encuentran
nucleótidos, pares de bases (pb) o inactividad de la sección Mutación a nivel de traducción

promotora. La mayoría converge en la expresión
incompleta del producto biológico, ya sea al nivel de la
proteína en sí, o al nivel del ARNm que se transcribe o que
posteriormente se traducirá. Una de las mutaciones podría
estar ubicada en la región promotora y podría afectar la
transcripción, o podría estar situada en lo profundo de un
intrón y afectar el corte y empalme, o una mutación
debida a la pérdida de una región comprendida entre los
Los primeros estudios de posibles alteraciones dentro de la
secuencia genómica GNS determinaron una mutación en
una región específica, el codón 355(Arg) de una región
codificante en el exón 9 del ARNm del gen (mutación
R355X) mediante una comparación en la secuencia de un
paciente con MPS IIID con la de un sujeto de control (sin
enfermedad). La alteración en este codón afecta a nivel
traduccional, puesto que, la cadena mensajera comenzará a

TecNM/ITLP – Ingeniería bioquímica [2022] - 2

 TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO
Instituto Tecnológico de La Paz
Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica
Agosto – diciembre, 2022

ser traducida por el ribosoma terminando de manera almacenamiento lisosómico, denotando una reducción en
prematura la traducción en 355, lo que implica una mucopolisacáridos así como actividad del GNS,
traducción incompleta de la proteína, la cual carece de determinando así la eficacia de este proceso como
aproximadamente 40% de los grupos COOH- terminales alternativa (Chou et al., 2019)
que la enzima tendría en condiciones normales (Cao,
Hegel & Mok, 2003).
Conclusiones
La dificultad en el estudio de las posibles causas de este
caso clínico se debe a que, las mutaciones que lo causan
no se limitan a 1 o 2 codones específicos, sino que en Referencias bibliográficas
función de la rama de herencia a tratar se conocen aún más
Andrade, F., Aldámiz‐Echevarría, L., Llarena, M., &
regiones de mutación en el gen el hecho de que la
Couce, M. L. (2015). Sanfilippo syndrome:
enfermedad, si bien es similar a nivel sintomático, difiere
Overall review. Pediatrics International, 57(3),
significativamente a nivel genético, puesto que se hereda
331-338.
de los ancestros. A pesar de la variación en la posición de
los codones mutados, la consecuencia converge en la
Anthony-Cahill, S. J., Appling, D. R., Mathews, C.K. y
expresión incompleta de la enzima, puesto que también se
Van Holde, K. E. (2013). Bioquímica. Pearson.
han realizado pruebas en otros organismos (Andermann et
al., 2007). Beesley, C. E., Concolino, D., Filocamo, M., Strisciuglio,
P. & Winchester, B. G. (2007). Identification and
Tratamientos
characterisation of an 8.7 kb deletion and a novel
nonsense mutation in two Italian families with
A pesar de la antigüedad de la enfermedad, no se ha
Sanfilippo syndrome type D
encontrado ninguna cura posible, debido a la diversidad en
(mucopolysaccharidosis IIID). Molecular
de la misma enfermedad. Sin embargo, se han realizado
Genetics and Metabolism, 90, 77-80.
pruebas a nivel genético para combatir esta enfermedad,
https://doi.org/10.1016/j.ymgme.2006.07.014
un ejemplo es la implementación de una chaperona con
motivos de una terapia génica, el ejemplo estudiado es la
Benetó, N., Vilageliu, L., Grinberg, D., & Canals, I.
chaperona JSF-3358, cuyas pruebas en los fibroblastos de
(2020). Sanfilippo syndrome: molecular basis,
células con MPS IIID han resultado en un 40% de
disease models and therapeutic approaches.
actividad del gen GNS así como mayor supervivencia para
International journal of molecular sciences,
la célula huésped (Wang, 2019). Con respecto a un nivel
21(21),7819.
molecular, se ha intentado una terapia mediante la
inserción in vivo de la enzima EC 3.1.6.14 de un sujeto de Berk, A., Darnell, J., Kaiser, C. A., Krieger, M., Lawrence
control dentro de células con MPS IIID, los resultados Zipursky, S., Lodish, H., Matsudaira, P., Scott,
recientes sugieren una reducción de marcadores de

TecNM/ITLP – Ingeniería bioquímica [2022] - 2

 TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO
Instituto Tecnológico de La Paz
Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica
Agosto – diciembre, 2022

M. P. (2005). Biología Celular y Molecular. Sanfilippo syndrome type D: natural history and
Editorial Médica Panamericana. identification of 3 novel mutations in the GNS
Gene. Archives of neurology, 64(11), 1629-1634.
Bosschaart, N., Bos Terpstra, F., Bertolli Avella, A. M. et
al. (2010). Mucopolysaccharidosis Type IIID: 12 National Institute of Neurological Disorders and Stroke.
New Patients and 15 Novel Mutations. Human (2004).
Genome Variation Society, 31(5), 2-13.
Rappaccioli Salinas, R. (2022). Síndrome de Sanfilippo.
https://doi.org/10.1002/humu.21234
Revista Médica Sinergia, 7(11), e911.
Cao, H., Hegele, R. A. & Mok, A. (2003) Genomic basis https://doi.org/10.31434/rms.v7i11.911
of mucopolysaccharidosis type IIID (MIM
RED SAN FILIPPO. (s. f.). Sindrome de Sanfilippo.
252940) revealed by sequencing of GNS
Recuperado 20 de noviembre de 2022, de
encoding N-acetylglucosamine 6-sulfatase.
http://www.redsanfilippo.org/?page_id=43
GENOMICS, 81,
2-5.https://doi.org/10.1016/s0888-
Suarez, J., Gómez, P., Arias, J., Contreras, G., (2016).
7543(02)00014-9
Mucopolisacaridosis: características clínicas,
diagnóstico y de manejo. 26 de mayo del 2020, de
Diggelen, O. P. ,Poorthuis, B. J., Ruijter, G. J. G.,
scielo Sitio web:
Valstar, M. J. & Wijburg, F. A. (2008).
https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?
Sanfilippo syndrome: a mini review. J Inherit
script=sci_arttext&pid=S0370-
Metab Dis, 31,240-
41062016000400012
252.https://doi.org/10.1007/s10545-008-0838-5

Suarez, J., Gómez, P., Arias, J., Contreras, G., (2016).

Fauci, A. S., Hauser, S. L., Jameson, J. L., Kasper, D. L.,
Mucopolisacaridosis: características clínicas,
Longo, D. L. y Loscalzo, J. (2016). Principios de
diagnóstico y de manejo. 26 de mayo del 2020, de
Medicina Interna Vol 2. McGraw-Hill.
scielo Sitio web:
Fedele, A. (2015). Sanfilippo syndrome: causes, https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?
consequences, and treatments. The Application of script=sci_arttext&pid=S0370-
Clinical Genetics, 8, 269. 41062016000400012
https://doi.org/10.2147/TACG.S57672

Iwasa, J. y Marshall, W. (2014). Biología Celular y

Molecular. McGraw-Hill

Jansen, A. C., Cao, H., Kaplan, P., Silver, K., Leonard, G.,
De Meirleir, L., ... & Andermann, E. (2007).

TecNM/ITLP – Ingeniería bioquímica [2022] - 2