PRÁCTICA DE LABORATORIO: 04

TÍTULO: CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA UV/VIS DE UNA SUSTANCIA

CURSO: Instrumentación y Análisis
GRUPO: A11 CICLO: V
SECCCIÓN: “A”
ESTUDIANTES:

• Aguilar Chirinos, Juan Leonardo

• Aguilar Lara, Makensy Alonso (COORDINADOR)

• Alvarado Alvarado, Melanie Gracie

• Anticona Sanchez, Alhely Solange

• Arroyo Centurion, Lizet Cathery

• Arteaga Sandoval, Tania

• Atoche Medina, Daniela Alexandra

• Aybar Geldres, Jenifer

• Azañedo Atoche, Yender Krosvy

DOCENTES:
Mg. Q.F. María Virginia Gonzalez Blas De Herrera
Mg. Q.F. Carlos Sopán Benaute
TRUJILLO – PERÚ
2021
 Práctica 04: CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA UV/VIS DE UNA SUSTANCIA

Competencia específica a desarrollar:

El estudiante aplicara la ley de Lambert-Beer y el método de la curva de calibración, en el análisis cuantitativo

de una sustancia mediante mediciones espectrofotométricas.
Fundamento.

Los métodos espectroscópicos de análisis están basados en la medida de la radiación electromagnética que
es absorbida o emitida por una sustancia. La absorción de radiación EM depende:
a) Del medio, es decir, de su composición cualitativa y cuantitativa.
b) La longitud de la trayectoria óptica en el medio.

Esta dependencia esta expresada mediante la ley de Beer. Es importante tomar en cuenta las suposiciones que
se hacen al obtener esta ley; ellas son:

1. La radiación incidente es monocromática.

2. Los centros absorbentes (moléculas e iones) actúan independientemente unos de otros, sin tomar en
cuenta su número o tipo.
3. La absorción está limitada a un volumen de corte seccional uniforme.

La siguiente expresión define la absorbancia A y es la presentación matemática más simple de la ley de Beer:

𝑷
𝒍𝒐𝒈 𝟎 = 𝑨 = a b C
𝑷

𝑨= a b C …. (1)

Dónde:

ϵ, ó , absortividad molar; propiedad característica de la sustancia correspondiente a la cantidad de radiación que

absorbe a una longitud de onda determinada por unidad de concentración, de unidades L mol-1 cm-1,
b, longitud de trayectoria óptica (anchura de la celda que contiene la dilución de la sustancia y
C, concentración del absorbente en moles/litro. Usualmente muy diluidas.

Para poder aplicar la ley de Lambert-Beer es necesario seleccionar previamente una longitud de onda máxima
(λmax)puesto que tanto A como ε varían con ella. Para ello se obtiene previamente el espectro de absorción de
la sustancia, que consiste en una representación de los valores de absorbancia frente a la longitud de onda
expresada en nanómetros (nm).

La ley de Lambert-Beer, permite la determinación de concentraciones de disoluciones problema, a partir de una

curva de calibración o recta de calibrado, obtenida midiendo las absorbancias para determinada sustancia y
concentraciones de disoluciones patrón. A la longitud de onda de máxima absorbancia, pues el error de
medición es mínimo y la sensibilidad máxima. La ley de Beer es válida para la sección lineal de la curva para esa
sustancia a esas concentraciones, la relación debe ser una recta que pase por el origen de los ejes cartesianos
(Gráfico 1). https://youtu.be/voHkIO73vew
 A menudo se observan desviaciones de esta Ley debido a diversos factores:
• Concentración. Sólo es aplicable a disoluciones diluidas (<10 M); en disoluciones concentradas
la distancia entre partículas absorbentes es tan pequeña que se produce una modificación en la
distribución de cargas de las mismas, lo que se traduce en una alteración en la capacidad de absorción a
una longitud de onda determinada. Este efecto se puede eliminar mediante dilución.
• Desviaciones instrumentales por uso de radiación no monocromática, la ley Beer está definida para
radiaciones con una sola longitud de onda.
• Falta de uniformidad de la muestra o especie absorbente, o presencia de impurezas.
• Desviaciones químicas, por reacciones del absorbente con el disolvente, como en el caso del dicromato
en disoluciones no amortiguadas.
Se debe concluir que para evitar las fuentes de error reales el límite superior de concentración debe estar entre
10−5 a 10−2 y para eliminar errores no detectables se deben trazar curvas de calibración trabajando en
condiciones similares a las soluciones estándar, así como las ensayo.
Aparatos y reactivos.

• Espectrofotómetro Genesys 10S UV-VIS

• Cubetas de polietileno
• Solución Stock (KMnO4 100 mg/L ó 100 ppm)
• Agua destilada

Procedimiento de la Práctica: https://youtu.be/6VkOKpvEyP8

Recta de calibración: https://youtu.be/Rw5jGyCwRGw
1. Preparación de la solución stock de KMnO4 100 ppm
Se pesó 29.222 g de KMnO4 con pureza de 99% equivalente a 28.99 g de KMnO4 q. p. y se aforó a 100 mL
2. Preparación de la soluciones patrón (Analito):
Se medirá alícuotas de la solución Stock de 0.625, 1.25, 2.5, 3.75 y 5.0 mLy se trasvasara a sendas fiolas de
25 mL; aforándose con agua destilada.
Se obtendrá soluciones de concentraciones 2.5, 5.0, 10.0, 15.0 y 20.0 ppm.
3. Seleccionar la longitud de onda de máxima absorbancia anteriormente determinada; 528 nm..
4. Calibración al 0% T: con el espectrofotómetro en modo Transmitancia, y la salida de luz cerrada se presionara
el 0% T.
5. Calibración al 100%T: con el espectrofotómetro en modo Transmitancia, la salida de luz abierta y con la
cubeta conteniendo aproximadamente 3 mL de agua destilada colocada en el equipo se presiona la tecla
 100%T.
6. Medición de Absorbancia de la solución patrón: Se selecciona la opción Absorbancia (A) e introducir en el
espectrofotómetro la cubeta conteniendo aproximadamente 3 mL de la solución patrón, registrar la lectura.
Continuar con la medición de la Absorbancia de las otras soluciones patrón siempre en orden ascendente de
concentración.
Utilización de datos.
1. Graficar la absorbancia vs concentración para obtener la curva de calibración. Ver video
https://youtu.be/jzoX8pwU-T8
2. Establecer la ecuación experimental para la ley de Beer.
3. Determinar la concentración de las soluciones problema.
 PRÁCTICA 4. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA UV/VIS DE UNA
SUSTANCIA

I. OBJETIVOS

• Aplicar la ley de Lambert-Beer y el método de la curva de calibración.

• Determinar la absortividad molar a través de la ley Lambert-Beer.
• Graficar la absorbancia vs concentración a través del método de la curva de calibración.
• Determinar las concentraciones de las soluciones de KMnO4 en estudio.
• Comparar las concentraciones a obtener de la ley de Lambert-Beer y la de curva de
calibración para identificar el más exacto.

II. PRESENTACIÓN DE DATOS

Solución Stock (KMnO4 100 mg/L o 100 ppm)

TABLA 1. “Espesor de la cubeta espectrofotométrica”.

Espesor de la cubeta (cm)

Cubeta 1

TABLA 2. “Absorbancias de acuerdo a las concentraciones medidas en el

espectrofotómetro UV/Visible de la solución de KMnO4 a 100 ppm (λ máxima=526nm)”.

Concentración A
(ppm)
2.5 0.0789
5 0.1377
10 0.3129
15 0.4646
20 0.6864
25 0.8367

TABLA 3. “Concentraciones problemas a determinar por las absorbancias obtenidas”.

Concentración (ppm) A
M1 0.8176
M2 0,3113
III. ANÁLISIS DE DATOS

Cálculos de la absortividad Molar (a) para todas las soluciones de KMnO4

A = abc

De acuerdo a la concentración y absorbancia, se calcula su (a) para determinar su

promedio final que se usará en todas las muestras.

Para el a1:
A = abc
a = A/(bxc)
a = 0.0789 / (1 x 2.5)
a = 0.0316
Para el a2:
A = abc
a = A/(bxc)
a = 0.01377 / (1 x 5)
a = 0.0275
Para el a3:
A = abc
a = A/(bxc)
a = 0.3129 / (1 x 10)
a = 0.0313
Para el a4:
A = abc
a = A/(bxc)
a = 0.4646 / (1 x 15)
a = 0.0310

Para el a5:
A = abc
a = A/(bxc)
a = 0.6864 / (1 x 20)
a = 0.0343

Para el a6:
A = abc
a = A/(bxc)
a = 0.8367 / (1 x 25)
a = 0.0335
 TABLA 4. “Promedio de absortividad molar de acuerdo a las concentraciones y
absorbancias dadas del KMnO4”.

Concentración (ppm) A a=A/(bc)

2.5 0.0789 0.0316
5 0.1377 0.0275
10 0.3129 0.0313
15 0.4646 0.0309
20 0.6864 0.0343
25 0.8367 0.0335
PROMEDIO 0.0315

IV. ILUSTRACIÓN DE RESULTADOS

CURVA DE CALIBRACIÓN
0,9 0,8367

0,8
y = 0,0345x - 0,026 0,6864
0,7 R² = 0,9963
0,6
Absorbancia

0,4646
0,5
0,4 0,3129
0,3
0,2 0,1377
0,0789
0,1
0
0 5 10 15 20 25 30
Concentración (ppm)

GRÁFICA 1. “Concentración (ppm) vs Absorbancia (A)”.

V. RESULTADOS

❖ Cálculos de la Curva de calibración

Ecuación de la recta: y = 0.0345 x – 0.026

Determinación de la concentración de la solución problema 1 y 2, referente a la curva

de calibración.

Para la M1:
y = 0.0345 (M1) - 0.026
0.8176 = 0.0345 (M1) - 0.026
M1= 24.45 ppm

Para la M2:
y = 0.0345 (M2) - 0.026
0.3113 = 0.0345 (M2) - 0.026
M2 = 9.78 ppm

❖ Cálculo de la concentración a través de la Ley de Lambert-Beer (1):

Para la M1:
A=abc
0.8176 = 0.0315 x 1 x M1
M1= 25.95 ppm

Para la M2:
A = abc
0.3113 = 0.0315 x 1 x M2
M2 =9.88 ppm
 VI. DISCUSIÓN

La Ley de Lambert relaciona el espesor de la muestra de análisis con la relación entre la

potencia incidente sobre la muestra y la potencia transmitida por la muestra. Si todos los
factores que intervienen en la medición se dejan constantes y se varía el espesor de la
muestra tenemos que: al aumentar el espesor, la potencia de la luz transmitida disminuirá,
aumentando la absorbancia.
La Ley de Beer relaciona la concentración de la especie absorbente con la relación de la
potencia del haz transmitido por el medio absorbente y la potencia del haz incidente. Todo
aumento en la concentración de la especie absorbente habrá de aumentar el número de
fotones absorbidos.
Una curva de calibración es la representación gráfica que relaciona una señal instrumental
en función de la concentración de un analito y define un intervalo de trabajo en el cual, los
resultados a informar tienen una precisión y exactitud conocida que ha sido documentada
en la validación del método.
Los resultados obtenidos nos quieren decir, que una mejor manera de saber las
concentraciones de las soluciones de KMnO4, es por intermedio de la curva de calibración,
ya que esto ayuda a tener mejor validación de los datos y se daría a conocer con mayor
precisión y exactitud al momento de realizar los cálculos previstos. (1)

VII. CONCLUSIONES

• Se aplicó la ley de Lambert-Beer y el método de la curva de calibración.

• Determinó la absortividad molar promedio a través de la ley Lambert-Beer y fue
a = 0.0315.
• Se graficó la absorbancia vs concentración a través del método de la curva de calibración
y obtuvimos como ecuación de recta: y = 0.0345 x – 0.026 y con R2 = 0.9963.
• Se determinó las concentraciones de las soluciones de KMnO4. Donde, la ley de
Lambert-Beer fueron M1 = 25.95 ppm y M2 = 9.88 ppm. Y en el método de curva de
calibración, fueron M1 = 24.45 ppm y M2 = 9.78 ppm.
• Se concluyó que las concentraciones del método de curva de calibración fueron más
exactas que al usar la Ley Lambert-Beer.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Douglas A. Skoog. Principios de Análisis Instrumental. 2008. 1063 p.