DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE ÁCIDO

ASCÓRBICO POR ESPECTROFOTOMETRÍA DE

ULTRAVIOLETA VISIBLE (UV-VIS)

AUTORES:

CRISTHIAN DAVID CHAVES VARGAS

MIGUEL ALEJANDRO RAMOS MARTINEZ

 1. RESUMEN

La práctica comenzó repartiendo la construcción de la curva de

calibración entre los 6 grupos en el laboratorio realizando los
cálculos para preparar las soluciones y todas se atoraron en su
respectivos balones aforados con ácido fosfórico 0,05 N y
solución madre 100 ppm fue preparada pesando 0.1 g de ácido
ascórbico en 100 mL, después con esta se preparó la solución
de 50 ppm en 100 ml y a partir de esta se prepararon las
demás: 5,7,10,15,20,25,30 ppm 10 ml cada una,además de un
blanco que se preparó con H2O luego el profesor a nuestro
grupo explicó cómo utilizar se espectrofotómetro UV-vis para
esto abrió el equipo y explicó que las celdas tienen 4 caras 2
rugosas por donde se agarra el objeto y 2 lisas entonces la
parte rugosa se coloca en la parte metalica del portaceldas
ademas de eso nos indicó que no se debe llenar por completo
estas celdas, antes de llenar una se hizo un lavado con H2O y
al colocarlas se repitió 3 veces el barrido nos correspondió la
solución 15 y 20 ppm y respectivamente el promedio al realizar
los 3 barridos fue de 0,877 y 1,042 nm y nos explicó que entre
más concentrada sea la solución el espectrofotómetro tendrá
menos precisión en nuestro caso nos dio el ejemplo con la
solución 20 ppm ya que su barrido daba dos valores luego de
cada grupo colocar su promedio de los 3 barridos en el tablero
finalizó la práctica.

2. INTRODUCCIÓN

La ley de Beer o ley de Lambert y Beer menciona el valor de la

absortividad como característico de cada sustancia y se
emplea cuando la concentración de la solución en estudio está
dada en partes por millón o por miligramos; pero si la
concentración es molar, la a se constituye por ε y la constante
se denomina absortividad molar. A = bc

En los aparatos más sencillos la escala está dada en porciento

de transmitancia: %T = (T) (100) . Al graficar la respuesta como
absorbancia en relación con la concentración, se obtiene una
línea recta (a). En cambio si se grafica porciento de
transmitancia contra concentración se obtiene una curva (b), la
equivalencia de porciento de transmitancia (%T) a absorbancia
A se emplea en la relación: 𝐴 = 2 − ㏒ (%𝑇).

● Figura: Relación de la respuesta y la concentración [C]

 Se dice que se cumple con la ley de Beer, cuando al graficar la
concentración y respuesta en absorbancia, se obtiene una
línea recta, en cambio, cuando no se obtiene una línea recta, al
graficar absorbancia contra concentración, se dice que existe
una desviación de la ley de Beer. Cuando la desviación es
hacia el eje de las ordenadas, es positiva, y negativa si dicha
desviación es hacia el eje de las abscisas.

Las desviaciones de origen físico se deben a cambios en el

medio, como son: índice de refracción, presión, temperatura y
solvente. Entre las de origen químico se encuentran cambios
en el equilibrio químico, incluyendo pH, la presencia de
agentes complejantes, reacciones competitivas entre iones
metálicos, etc. Por último, los instrumentales, como A [C] % T
[C] (a) (b) una radiación policromática, fuente de radiación
inestable, detectores deficientes, diafragma no controlado,
selección inadecuada de longitud de onda, defectos en la parte
óptica, etc.[1]

El ácido ascórbico, comúnmente llamado vitamina C, presenta

un aspecto de cristales blancos, con sabor ácido, sensible a la
luz y a ciertos metales pesados, es un tipo de vitamina
hidrosoluble y esencial, es sintetizado naturalmente por las
plantas superiores y algunos animales, con excepción de seres
humanos, y también puede ser sintetizado químicamente a
partir de glucosa, mediante una serie de reacciones
catalizadas por enzimas, es considerado uno de los más
potentes agentes antioxidantes del organismo; en humanos se
encuentra concentrado en cierto órganos como: ojos, hígado,
bazo, cerebro, glándulas suprarrenales y tiroides.

La determinación del ácido ascórbico por el método de

espectrofotometría, se basa en la reducción del colorante 2-6
diclorofenolindofenol, por el efecto del ácido ascórbico en
solución. El contenido de ácido ascórbico es directamente
proporcional a la capacidad de un extracto de muestra para
reducir una solución estándar de colorante determinada
espectrofotométricamente. “La espectrofotometría es el
conjunto de procedimientos que utilizan la luz para medir
concentraciones químicas” (Harris, 2001). Harris (2001)
menciona que la luz puede describirse en términos de
partículas y ondas; la longitud de onda ë , es la distancia entre
las crestas de dos ondas y la frecuencia í, es el número de
oscilaciones completas de una onda en un segundo.
La espectroscopia de uv-vis es utilizada tanto en el análisis
cuantitativo como cualitativo de especies orgánicas e
inorgánicas. A pesar de su escasa información estructural, es
aplicada para la determinación de la estructura e identificación
de sustancias por medio de mecanismos de reacciones
químicas, control de pureza, concentración y la medición
exacta de la constante de disociación de ácidos y bases.[2]

3. RESULTADOS

3.1 Representación gráfica de la relación experimental

entre concentración (eje x) y absorción de luz visible (eje
y).

3.1.2 Coeficiente de correlación lineal r:

R/-0,512140115

3.1.3 Determine la ecuación de la recta por el

procedimiento de mínimos cuadrados; tenga en cuenta las
incertidumbres para la pendiente, para el punto de corte y
para la absorbancia.

R/
𝑌 = 0, 0495 (10, 00 + ₋0, 08 𝑚𝐿)𝑋 + 0, 0767 (0, 500 + ₋0, 007)

3.2 A partir de la ecuación realice una gráfica (curva de

calibración linear o curva de trabajo) con los datos de la
concentración inicial y absorbancias corregidas.
3.3 A partir de la curva linear de trabajo, determine por
interpolación la concentración de ácido ascórbico de la
muestra problema.

R/ 237, 10 (±1, 03 𝑚𝐿)𝑝𝑝𝑚

3.4 A partir de la ecuación de la curva de calibración linear

determine la concentración de ácido ascórbico de la
muestra problema.

R/ 11, 66 (±1, 16 𝑚𝐿) 𝑝𝑝𝑚

3.5 Determine el error absoluto y el error relativo de la

muestra problema a partir de los datos de absorción y
ecuación de la curva de calibración linear.

R/Concentración: 11,66 ppm 𝑦 = 0, 0495 × (11, 66) + 0, 0767

0, 65387 𝑢𝐴 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙 = 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 0, 654 𝑢𝐴

Error absoluto: |0, 654 − 0, 65387| × 100 = 0, 013%

|0,654−0,65387|
Error relativo: 0,654
× 100 = 0, 0198%
 ANÁLISIS:

La espectroscopia de UV-VIS es utilizada tanto en el análisis

cuantitativo como cualitativo de especies orgánicas e
inorgánicas. Es aplicada para la determinación de la estructura
e identificación de sustancias por medio de mecanismos de
reacciones químicas, control de pureza, concentración y la
medición exacta de la constante de disociación de ácidos y
bases. La región espectral que comprende el uv para la
práctica, se encuentra a 243 nm longitud de onda absorción
máxima. Cuando una molécula orgánica absorbe radiación,
ocurren unas transiciones electrónicas(δ→δ*,n, n δ*,→) entre
sus orbitales. Las transiciones se deben a los electrones
implicados en enlaces de tipo σ o π y en pares no enlazantes
n de átomos de H, C, N, O.

Para absorber radiación en el ultravioleta, la molécula (analito)

tiene que tener un sistema clorofórmico, que está compuesto
por partes estructurales de la molécula responsable de una
determinada absorción de radiación electromagnética, como
los enlaces (C=C,C=N, N=N).

Desprotonación del ácido ascórbico

Para cuantificar el ácido ascórbico presente en la muestra, se

utilizó un espectrofotómetro de doble haz, que utiliza una
fuente de descarga de deuterio y una fuente de wolframio. La
fuente emite una radiación continua, que pasa por un
monocromador, el cual selecciona una longitud de onda
específica (la energía proveniente de la fuente debe realizar
primero el paso por el monocromador antes de atravesar la
muestra para que no se produzca una fotodescomposición de
la misma). Las celdas que contiene la muestra y el disolvente,
debe estar compuesta de un material que deje pasar la
radiación en la región ultravioleta. El material utilizado para las
celdas es cuarzo, ya que no absorbe en región ultravioleta.

El haz de radiación monocromática se divide en dos

componentes con potencias radiantes similares. Un haz pasa a
través de la muestra y el otro haz de radiación pasa a través
del blanco. Dos espejos giratorios,los cuales se encuentran
sincronizados con el sistema, permite el paso de la radiación
hacia el detector, el cual compara exactamente para la misma
longitud de onda las intensidades transmitidas por los dos
haces. El ácido ascórbico al recibir radiación ultravioleta,
produce transiciones electrónicas de 𝑛 → π * debido a que
presenta enlace doble (C=O). Esta transición es poco intensa,
y es el resultado del salto de un electrón de un orbital
molecular no enlazante del oxígeno a un orbital molecular
antienlazante π *. También presenta transiciones de π→π *,
para que suceda esta transición, se requiere una cantidad
mayor de energía o menor longitud de onda.

Para el doble enlace (C=C), se produce transiciones de π→π *

esto se debe a la excitación de los electrones que se
encuentran en el orbital molecular π del doble enlace,
produciendo un salto al orbital molecular. La banda de baja
intensidad(transición de n) no se puede observar debido a que
está cubierta por el pico demayor absorción (transición de 𝑛→
π *,) Normalmente una transición de este tipo proporciona una
señal de longitud de onda en el rango de 200-700 nm. La
longitud de onda de máxima absorción del ácido ascórbico
(teórico) es entre 243-267 nm. En la práctica se encontró un
máximo de absorción en 243 nm en la curva de calibración
regular.

Al observar en la estructura hay presente un sistema

conjugado, por el cual la nube electrónica se distribuye por lo
menos en cuatro centros atómicos ocasionando un
desplazamiento batocrómico.

Estructura Ácido Ascórbico

En una transición electrónica de tipo π→π *, el λ𝑚𝑎𝑥 Se

encuentra en 217 nm. Pero para un sistema conjugado como el
Ácido Ascórbico, se da un desplazamiento de la longitud de
onda de absorción entre 50 nm por debajo = 193 nm y sobre
50 nm = 293 nm. Por lo tanto el máximo de absorción de un
sistema conjugado de acuerdo al desplazamiento producido
por los enlaces conjugados del sistema está en el rango de
243. Debido a los estados electrónicos vibracionales y
rotacionales que presentan el ácido ascórbico, produce
múltiples transiciones vibracionales y rotacionales ocasionando
que las bandas discretas se derrumben por las cercanías de
las señales que producen la transiciones ya mencionadas,
formando un espectro de banda continúa.[3]

Para hallar la concentración de ácido ascórbico en una

muestra, se realizó una curva de calibración la cual se obtuvo
una concentración de 11, 66 (±1, 16 𝑚𝐿) 𝑝𝑝𝑚y se realizó una
curva de calibración linear para hallar una concentración de
237, 10 (±1, 03 𝑚𝐿)𝑝𝑝𝑚. La curva de calibración se realizó con
el fin de determinar la cantidad de analito presente en una
muestra problema. Los patrones (concentración conocida) de
calibración se miden bajo las mismas condiciones que se
utiliza en la solución que contienen la muestra (concentración
desconocida) donde por interpolación se puede obtener la
concentración del analito.

Por lo tanto, la concentración de ácido ascórbico en la muestra

de ácido fosfórico 0,05 N se obtuvo la señal de absorción,
concentración 11,66 ppm en el rango de absorbancia 0,65387
uA experimental y cercano a la muestra 0,654 uA a partir de
los cálculos realizados antes de la práctica, para poder realizar
una comparación ideal y específica entre los ejes de
concentración-absorbancia.

4. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

● 4.1 Proponga otros métodos analíticos para

determinaciones instrumentales. R/

[4]
● 4.2 Defina el método de cuantificación de patrón
interno y adición estándar.

R/ Método de la adición estándar: Es especialmente útil para

analizar muestras complejas (en trazas) en las que la
probabilidad de que se produzcan efectos debido a la matriz es
considerable.

Una de sus aplicaciones es la adición de diferentes volúmenes

de la disolución patrón a varias alícuotas de la muestra del
mismo tamaño; este proceso se le conoce como adición de
muestra.

Método del patrón interno: consiste en introducir en los

patrones y muestras una cantidad conocida de un elemento o
compuesto que no está presente en la muestra pero que tiene
un comportamiento similar al del analito.[5]

● 4.3 Qué es la sensibilidad.

La sensibilidad según la IUPAC es la relación que existe entre

la variación de la señal analítica o cambio en la respuesta
instrumental. Por tanto, la sensibilidad de un instrumento
analítico vendrá dada por la pendiente de la recta de calibrado
de dicho instrumento.[6]

● 4.4 Qué es el límite de detección.

R/ El límite de detección (LDD) se define habitualmente como

la cantidad o concentración mínima de sustancia que puede
ser detectada con fiabilidad por un método analítico
determinado. Intuitivamente, el LDD sería la concentración
mínima obtenida a partir de la medida de una muestra (que
contiene el analito) que seríamos capaces de discriminar de la
concentración obtenida a partir de la medida de un blanco, es
decir, de una muestra sin analito presente. El primer problema
aparece en la palabra fiabilidad, puesto que ésta implica la
introducción de la estadística en la propia definición de LDD y
en su cálculo posterior.[7]

● 4.5 Proponga un procedimiento para elaborar una

curva de calibración con adición estándar, para la
determinación de ácido ascórbico.

R/ Se incorpora una cantidad conocida de muestra con ácido

ascórbico a los patrones o estándares de la curva de calibrado
a cada uno de los recipientes se le añade un volumen distintos
de solución madre y un volumen igual de la disolución de la
muestra con ácido ascórbico como se ve en la siguiente figura.
luego se grafica la curva de calibración mediante la
extrapolación y la ecuación de la recta que es en este caso
Xm=a/b esta será la respuesta en valor absoluto ya que no hay
concentraciones negativas.[8]

● 4.6 Qué significado analítico tiene el coeficiente de

correlación en una curva de calibración.

R/ Para dos variables, la fórmula compara la distancia de cada

dato puntual respecto a la media de la variable y utiliza esta
comparación para decirnos hasta qué punto la relación entre
las variables se ajusta a una línea imaginaria trazada entre los
datos. A esto nos referimos cuando decimos que la correlación
examina las relaciones lineales. El coeficiente de correlación r
es un valor sin unidades entre -1 y 1. La significancia
estadística se indica con un valor p. Por lo tanto, Usualmente
las correlaciones se escriben con dos números clave: r = y, p =
.Cuanto más se aproxima (r) a cero, más débil es la relación
lineal. Los valores de r positivos indican una correlación
 positiva, en la que los valores de ambas variables tienden a
incrementarse juntos. Los valores de r negativos indican una
correlación negativa, en la que los valores de una variable
tienden a incrementarse mientras que los valores de la otra
variable descienden.[9]

● 4.7 Qué significado analítico tiene la pendiente en la

ecuación linear de una curva de calibración.

R/ La pendiente de la curva de calibrado lo que muestra es la

sensibilidad de la curva por ende en una curva de calibración
se debe apuntar a que sea lineal,es decir, que la sensibilidad
sea siempre la misma y no va a depender de la concentración,
las concentraciones deben tener una incertidumbre
insignificante.[10]

● 4.8 Qué aspectos de primeros auxilios debe tener

en cuenta al presentar un accidente por ingestión de ácido
ascórbico.

R/ En caso de ingestión consultar con un médico cuál es la

dosis permitida ya que para pacientes con cálculos renales
está contraindicada por lo que no se puede ingerir sin consultar
al médico, en casos normales si la dosis no es alta no es
necesario acudir al médico ya que este ácido es necesario.

5. CONCLUSIONES

● Los valores obtenidos de la estandarización fueron

identificados gracias al método del ácido fosfórico bajo las
condiciones 0,05 N y longitud de onda absorción máxima 243
nm.
● Las mediciones presentaron exactitud en cuanto a la ecuación
de la recta obtenida y absorbancia de la muestra 0,654 uA, se
incluyó los errores de incertidumbre según el número de
mediciones totales.
● La curva de calibración realizada ayudó a identificar fácilmente
el rango de concentración de la muestra problema, se obtuvo
mayor precisión y por interpolación se descartó la matriz en la
práctica.
● Los sistemas cromofóricos son los grupos responsables de la
absorción de la radiación electromagnética en la región
ultravioleta.
 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1.Magdalena García Fabila, ‘Apuntes para espectrometría de

radiación ultravioleta visible (UV-VIS), Universidad Autónoma Estado
de México, Octubre 2016. Recuperado 23 Julio 2022
http://ri.uaemex.mx/bitstream/handle/20.500.11799/68318/secme-181
4.pdf?sequence=1&isAllowed=y

2/3 Mayra A. Mora, Andrés, C. Jefferson, R. Lizeth, H. Determinación

de Ácido Ascórbico Por Espectrofotometría Uv, Universidad del Valle
Recuperado 23 Julio 2022
https://es.scribd.com/document/239654251/Determinacion-de-Acido-
Ascorbico-Por-Uv

4. Skoog, D.A., Holler, F.J., and Nieman, T.A. Principios de Análisis

Instrumental, McGraw-Hill, Madrid (2001). Introducción a las técnicas
instrumentales Orbitales Moleculares. Recuperado 23 Julio 2022
https://www.orbitalesmoleculares.com/introduccion-las-tecnicas-instru
mentales/

5.Instituto Tecnológico Ciudad de Madero, Análisis Instrumental, 12

Marzo 2010. Recuperado 23 Julio 2022
https://www.coursehero.com/file/74099578/RESUMEN-Patron-interno
-y-Adicion-estándar-1docx/

6. Apuntes-Química, Sensibilidad en química analítica. Recuperado

23 Julio 2022
https://apuntesde.es/sensibilidad-analitica/#:~:text=La%20sensibilida
d%20seg%C3%BAn%20la%20IUPAC,de%20calibrado%20de%20dic
ho%20instrumento.

7.Ricardo Boqué, Límite de Detección de un Método Analítico,

Universidad Rovira y Virgilia. Recuperado 23 Julio 2022
www.quimica.urv.cat/quimio/general/lod.pdf

8.Pablo Bower, Curvas de calibración por adición estándar,

Universidad Purdue. Recuperado 23 Julio 2022
https://www.jove.com/es/v/10201/method-of-standard-addition?langu
age=Spanish#:~:text=El%20m%C3%A9todo%20de%20adiciones%2
0est%C3%A1ndar,se%C3%B1al%20de%20absorbancia%20del%20
analito.

9.Coeficiente de correlación | Introducción a la estadística | JMP.

Recuperado 23 Julio 2022
https://www.jmp.com/es_co/statistics-knowledge-portal/what-is-correl
ation/correlation-coefficient.html

10.Universidad Nacional de Colombia, La pendiente en curva de

calibración | Course Hero. Recuperado 23 Julio 2022
https://www.coursehero.com/file/p1mtjad/La-pendiente-de-la-curva-de-calibra
do-lo-que-muestra-es-la-sensibilidad-de-la/#:~:text=of%2011%20pages.-,La
%20pendiente%20de%20la%20curva%20de%20calibrado%20lo%20que%2
0muestra,incertidumbre%20insignificante.Al%20hacer%20la
7. ANEXO HOJA RESULTADOS