PRACTICA DE LABORATORIO 2

RECUENTO DE
STHAPYLOCOCCUS AUREUS
*
*Gram-positivo
*Diámetro oscila entre 0.5 – 1.5 micras
*Agrupados en pares, tetradas o formando racimos
*Anaerobio facultativo
*Son inmóviles
*Catalasa positiva, coagulasa positivo, y oxidasa negativo
*S Aureus
*S. Luqdunensis

*S. intermedius

*S. epidermis
*S. saprophyticus
* Biofilm

* Cápsula

* Pared celular

* Enzimas
La especie más virulenta del género, Staphylococcus aureus, es una de
las causas más frecuentes de infecciones bacterianas y también es una
causa importante de intoxicación por alimentos y síndrome de choque
tóxico (SCT).

Staphylococcus aureus es un mo capaz de producir componentes

superficiales llamados toxinas y producir enzimas extracelulares.

Produce enterotoxinas
La enfermedad por S. aureus puede deberse, principalmente o
mayormente a una infección como tal del germen

*
La enfermedad por S. aureus puede deberse, principalmente o
mayormente a la producción de toxinas sin infección (Toxicosis
“pura, como la intoxicación alimentaria).como tal del germen

*
La enfermedad por S. aureus puede deberse, principalmente o
mayormente a la producción de toxinas sin infección (Toxicosis
“pura, como la intoxicación alimentaria).como tal del germen

*
La enfermedad por S. aureus puede deberse a una
combinación de infección y producción de toxinas en un sitio
distante, como en el síndrome de Choque tóxico

*
*Alimentos crudos
*Alimentos con tratamiento térmico y manipulados
*No muestra capacidad Psicrotrofa

*Presencia de 106 UFC/g indica manipulación incorrecta

*
*AGAR BAIRD PARKER
*Triptona , fuente de nitrogeno y aa
*Extracto de carne, fuente de carbono y nitrógeno
*Extracto de levadura, aporta vitaminas del complejo B
*Piruvato sódico, estimulan el crecimiento
*Glicina, estimulan el crecimiento
*Cloruro de litio, inhiben el crecimiento de los gérmenes
grannegativos
*Agar, agente solidificante
*EMULSION YEMA DE HUEVO Y TELURITO DE POTASIO
*Emulsión yema de huevo, permite demostrar la actividad
lecitinásica, PRODUCE EL HALO
*Telurito potásico, inhibe a los grampositivos
*AGAR SALADO MANITOL
*extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente
de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales,
*Manitol, es el hidrato de carbono fermentable,
*cloruro de sodio, (7.5% en alta concentración) es el agente
selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante,
*rojo fenol es el indicador de pH.
(S -) no fermentan manitol (S. aureus) fermentan manitol
*
INFUSION CEREBRO CORAZON
*Extracto de cerebro de ternera
*Extracto de corazón de buey
*Triptona, proveen la fuente de carbono,
*nitrógeno sulfuro y vitaminas
*Dextrosa, actúa como fuente de energía
*Cloruro de sodio, mantiene el balance osmótico
*del medio.
*Fosfato disódico, actúa como buffe
*
*
*Pesar25 g del alimento en
forma aseptica

*Añadir 225 ml de
diluyente
*Mezclar manualmente cada dilución
agitándola 25 veces en 7 segundos
*Mezclado en vortex

*Partiendo de las diluciones

decimales, sembrar, por
duplicado, en placas Baird Parker,
mediante extensión en superficie.
*Con el Drigalki extender la nuestra en la
superficie del medio de cultivo
*Incubar a 35ºC durante 24 a 48 horas.
*Después de la incubación, examinar las placas para ver
la presencia de colonias sospechosas de S. aureus
*
*A partir de la serie de diluciones decimales y por
duplicado, escoger las placas que contengan entre 20 y
200 colonias
*Colonias negras con halo blanco
Nº col confirmadas
Nº de colonias = Col presuntivas x dilución x ----------------------------
Nº col analizadas
*
 *
Bacteria G+ G+ G+
Lugol Alcohol
acetona Fucsina
Cristal
Violeta
G- G- G-
Gram-negativa Gram-positiva

Staphilococcus
*
Cocos Gram-positivos

Staphilococcus
 *

*Escoger colonias negras con

halo blanco típicas de
acuerdo al número de
colonias contadas por
placa.
 *
Determinar el número de colonias a evaluar, tomando en
cuenta el número de colonias típicas de S. aureus
obtenidas en el agar Baird-Parker
Cuenta total de colonias Colonias sospechosas a
sospechosas en una caja caracterizar
representativa bioquímicamente
Menos de 50 UFC 3
51-100 UFC 5
101-200 UFC 7
 *
*Reinocular cada una de las
colonias seleccionadas,
utilizando asa bacteriológica
recta estéril, en 5 mL caldo
infusión cerebro corazón
*(Diluiren la paredes del tubo
de ensayo que contienen BHI)
 *
*Incubar los tubos a 35
ºC por 24 h

*Inocular cepas de S
Aureus (control +)

*Inocular cepas de S,
epidermis (control -)
 *
*A un tubo con 0,3 ml.
de plasma de conejo
EDTA reconstituido,
agregar 0,3 ml. de la
suspensión del m.o. que
desarrollo en caldo
BHI.
*Incubar los tubos a 35 ºC

*Examinar los tubos

después de 6 h, de no
presentarse formación de
coágulo, prolongar el
período de incubación
hasta 24 h
La reacción es
positiva cuando el
coágulo formado es
firme.
 *

VALOR CARACTERÍSTICA
negativa No se observa formación de coágulo
1+ (positiva) Formación de coágulos pequeños
desorganizados
.
2+ (positiva) Formación de coágulo
. pequeño organizado
)
3+ (positiva) Formación de un gran coágulo organizado
4+ (positiva) Todo el contenido del tubo está coagulado. Al
invertir el tubo este coágulo se mantiene en el
fondo del mismo.
3+ (positiva) 4+ (positiva)
*