Practica 7

Hemocultivos y Catéteres

I. Introducción
Los hemocultivos son el principal examen de laboratorio para el diagnóstico de
bacteriemias o fungemias; es una herramienta para detectar la presencia de
microorganismos patógenos vivos en circulación periférica. El resultado del mismo
direcciona apropiadamente la terapia antibiótica.
La contaminación de hemocultivos cuando la sangre es colectada, es una fuente de falsos
positivos los cuales pueden llevar al paciente a una resolución adversa y un desperdicio de
recursos hospitalarios.
La invasión de la sangre por microorganismos, usualmente ocurre por uno de dos
mecanismos, drenaje proveniente de un foco primario de infección a través del sistema
linfático, o por la entrada directa de agujas u otros aparatos endovasculares contaminados
como catéteres o material injertado.
La utilización de los catéteres intravasculares con fines diagnósticos o terapéuticos es cada
vez más frecuente en pacientes con patologías agudas o crónicas graves. Las infecciones
asociadas a catéter constituyen la principal causa de bacteriemia nosocomial y están
relacionadas con una alta morbilidad y mortalidad.
Los microorganismos que producen con más frecuencia las infecciones asociadas a
catéteres son aquellos cuyo hábitat es la piel. 60% de los casos están producidos por
diferentes especies de estafilococos aunque Enterococcus sp esta aumentando en los
últimos años. Otros microorganismos involucrados son los bacilos Gram negativos y
diferentes especies del genero Candida

II. Procesamiento
a) Tipo de muestra: Sangre venosa o arterial

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b) Botellas aerobias de hemocultivo con agar (SCD) soya casein digest o para organismos
fastidiosos puede ser (BHI) Caldo infusión cerebro corazón suplementado con
peptonas. Contiene anticoagulante SPS.
c) Diferenciar entre botellas de hemocultivo de adulto, pediátrica y neonatal
d) Relación de volumen entre la sangre-caldo es 1:5 a 1:10

III. Procedimiento de Hemocultivo

1) Las botellas o medios de cultivo utilizadas en el laboratorio ya han sido inoculadas e

incubadas por 18-24 horas. Solamente botellas aerobias serán utilizadas
2) Observe la apariencia de la botella de medio de cultivo previo a mezclar. La evidencia
visual de crecimiento puede incluir turbidez del medio, colonias discretas en la
superficie del agar o en el sedimento, hemolisis, o producción de gas. Algunos medios
no pueden ser visualizados
3) Prepare y lea la tinción de Gram de la siguiente manera
a. Mezcle gentilmente el contenido del frasco
b. Desinfecte el tapón de la botella con algodón impregnado con alcohol al
70% y déjelo actuar al menos 1 minuto
c. Rompa el sello de metal de subcultivo estéril haciendo un movimiento
brusco y remueva la porción inferior de la aguja de vacutainer
d. Sosteniendo una gaza alrededor de la aguja, insértela en la porción
central de la tapa del frasco que fue desinfectada previamente
e. Remueva la porción superior de la aguja de vacutainer exponiendo la
parte más larga de la aguja ensamblada
f. Invierta el frasco y permita que caigan una o dos gotas en un porta
objetos (evite tocar la aguja con la superficie del porta objeto) y
extiéndalo con un asa estéril
g. Cubra con seguridad la porción superior de la aguja vacutainer insertada
en el frasco, dejándola allí.

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 h. Deje secar el extendido en la lámina porta objeto y fíjela al calor,
coloréela por Gram y examínela bajo inmersión
i. Reporte el resultado del Gram
4) Después de determinar la morfología celular de cualquier bacteria presente, realice los
subcultivos de la manera siguiente:
a. Determine el medio de cultivo y las pruebas a realizar
b. Remueva el tapón de la aguja insertada en el frasco
c. Invierta el frasco y con pequeños movimientos permita que caiga dos gotas
dentro del medio de cultivo o sobre algún test directo
d. Cubra de nuevo la aguja del frasco y luego realice el estriado en la placa por el
método de Frobisher
e. Incube el medio de cultivo u otro test realizado según las condiciones adecuadas
5) En los días posteriores, revise los medios de cultivo y describa la morfología colonial
en cada medio de cultivo. No se realiza cuantificación
6) Realice cualquier test adicional y reporte sus resultados
7) Registre la identificación del aislamiento

IV. Selección de Medios de cultivo de Siembra según hallazgos celulares

Morfología celular Medio de cultivo

- Cocos Gram positivos - G.sangre (CO2)
- Bacilos Gram negativos o cocobacilos (largos) (similar a - G.sangre/McConkey
Enterobacterias) (api strip)
- Cocobacilos pequeños Gram negativos o bacilos - G.Chocolate (CO2)
pleomorficos (similar a Haemophilus)
- Diplococos Gram negativos - G.Chocolate (CO2) / G.sangre
- G.sangre
- Bacilos Gram positivos - G.sangre
- Levaduras - G.sangre/ McConkey/ PEA
- Bacilos Gram negativos y cocos Gram positivos - G.Chocolate
- No se observaron bacterias

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V. Interpretación de cultivo

Identifique cualquier microorganismo en el crecimiento. La sangre es un fluido corporal

normal estéril. Se debe realizar prueba de sensibilidad a cualquier microorganismo aislado
y este puede ser realizado directamente en la sangre

Categorización de los gérmenes:

Grupo A, Nunca son contaminantes : S.pneumoniae, P. maltocida, L.
monocytogenes, H. influenzae, N. meningitidis, N. gonorrhoeae, Brucella sp,
HACEK, fusobacterium, bacteroides, M. tuberculosis
Grupo B, Raramente contaminantes: S. aureus, Enterobacterias, S. pyogenes, S.
agalactiae, Streptococcus grupo C o G, Candida albicans, BGNNF (PAE y
Acinetobacter baumanii)
Grupo C, Solo la mitad de las veces son significativos: S. viridans, Clostridium,
Candida tropicalis, Parasilopsis.
Grupo D, Generalmente son contaminantes: Staphylococcus coagulasa negativa, P.
acne, Bacillus

IV. Reporte

El reporte preliminar debe ser realizado después de las 24 horas de incubación en todos los
hemocultivos.
Un reporte de cultivos positivos debe ser enviado al médico tratante. El reporte preliminar
consiste en la reacción al Gram y morfología de cualquier organismo observado.
Un reporte preliminar del cultivo “Negativo en 24” horas es enviado junto con todos los
cultivos negativos. Un nuevo reporte debe realizarse si proviene de un cultivo negativo y
luego se convierte en positivo.
Diariamente debe observarse la turbidez. Realizar resiembra obligatoria a las 24 horas,
también puede realizarse al 3er dia y una última resiembra el 7mo dia antes de descartar

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Reporte final o Definitivo
Debe incluir la identificación definitiva de cualquier microorganismo aislado (Sin
cuantificar) y resultados de pruebas de sensibilidad
Cultivos positivos: Se aisló (Nombre de Género y especie bacteriana) junto a su
antibiograma
Cultivos negativos son reportados “No hubo crecimiento al 7mo día”

V. Test de susceptibilidad
Antibiograma directo del frasco:
o Bacilos Gram negativos, Enterobacterias:
Imipenem, cefotaxime, piperatazobactam, ciprofloxacina, amikacina, gentamicina

o Cocos Gram positivos: Estafilococos:

Oxacilina, rifampicina, trimetroprima-sulfa, ciprofloxacina, vancomicina, gentamicina

CATETERES

I. Procesamiento
Tipo de muestra: Punta de catéter

II. Procedimiento
Métodos de Cultivo
Cultivo Semicuantitativo, Metodo de Maki
a) Rotar el catéter en la placa de agar sangre
b) Significativo: Recuento mayor de 15 UFC

Cultivo Cuantitativo, Método Brun Buison

a) Vortexear el catéter en 1ml de caldo
b) Diluir 1:100 en solución fisiológica
c) Significativo: Recuento mayor de 100 UFC/ml

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III. Bacteriemia relacionada a catéter
1. Cultivo Cuantitativo simultaneo, Sangre a través del catéter vs sangre periférica
a) Recolectar sangre con anticoagulante SPS
b) Sembrar en agar en profundidad
Interpretación:
Sangre catéter/sangre periférica: mayor de 5-10 Bacteriemia relacionada a Catéter

2. Método Diferencial de tiempos de positivización (sistemas automatizados)

a) Recolectar igual volumen de sangre periférica y de sangre de catéter
b) Inocular en frasco de hemocultivo
Interpretación:
Mayor a 120 minutos : Bacteriemia relacionada a catéter
75-120 minutos : Dudosa
Menor a 75 minutos : No relacionada a catéter

Cuestionario

Mencione 4 medios de cultivo líquido que puede emplearse para realizar un

hemocultivo

¿En qué consiste el medio doble de Ruiz Castañeda?

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