Universidad Nacional de Ingeniería

Facultad de Ingeniería Química y Textil

Departamento Académico de Ingeniería

Química

Laboratorio de Química Orgánica (QU 328 D)

Informe N° 6

Cromatografía de columna y capa fina

Integrantes

Alumno 1.-Alata Ferril Fabrizzio Alessandro 20190413D

Alumno 2.-santos ponte kevin Antonio 20192231K
Alumno 3.-Zumaeta Davila, Gianmarco 20192684E

Profesor responsable

- Mg. Ing. Emilia Hermoza Guerra

Periodo Académico 2022-2

Fecha de realización: 17/11/2022

Fecha de Presentación: 24/11/2022

Lima - Perú
Facultad de Ingeniería Química y Textil 1
Departamento Académico de Ingeniería Química 1
Laboratorio de Química Orgánica (QU 328 D) 1
1. Objetivos 3
2. Fundamento teórico 3
3. Ecuaciones químicas y mecanismos de reacción 4
4. Datos 4
5. Diagrama de flujo del proceso 7
5.1. Cromatografía de columna de extracto de huacatay 7
5.2. Cromatografía de capa fina de papilla de alúmina 9
6. Resultados 11
6.1. Para el experimento: Cromatografía de columna de extracto de huacatay 11
6.1.1. Datos experimentales 11
6.1.2. Observaciones experimentales 11
6.1.3. Resultados experimentales 13
6.1.4. Discusión de resultados 13
6.2. Para el experimento: Cromatografía de capa fina de papilla de alúmina 13
6.2.1. Datos experimentales 13
6.2.2. Resultados experimentales 13
6.2.3. Discusión de resultados 14
7. Conclusiones 14
8. Anexo 14
9. Referencia bibliográfica 15
 CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA Y DE CAPA FINA

1. Objetivos
● Entrenar en técnicas de separación e identificación de pigmentos naturales por
cromatografía.
● Conocer las distintas técnicas cromatográficas.
● Conocer los fundamentos físico-químicos implicados en los procesos de
separación por cromatografía.
2. Fundamento teórico
La cromatografía es una técnica utilizada para la separación de compuestos que
permite la purificación e identificación de los mismos.Esta técnica se basa en la
diferencia de polaridades (Zubrick, 2014).
Los diferentes tipos de cromatografía pueden ser:
Cromatografía de capa fina (TLC):
Es ideal cuando se utilizan cantidades pequeñas de las especies o cuando se llevan a
cabo reacciones a pequeña escala. Mediante esta técnica podría incluso seguirse el
curso de una reacción (Zubrick, 2014).

Cromatografía de columna:
Implica llevar a cabo la técnica en una columna de adsorbente, lo cual facilita el
proceso. Los compuestos que son llevados a través de la columna son lavados por
completo y separados en diferentes matraces. El adsorbente utilizado puede ser
alúmina o sílica gel (Pavia, 2005).

En todo proceso de cromatografía pueden diferenciarse dos fases: la fase móvil y

estacionaria:

Fase estacionaria (adsorbente): permanece inmóvil. Esta permite el paso del

diluyente sobre sí mismo, con el objetivo de propiciar el contacto entre las dos fases
de la mezcla. Puede ser un sólido, gel o un líquido. (Zubrick, 2014).

Fase móvil: corresponde al fluido que moviliza las sustancias que se pretenden
separar o identificar a través de la fase estacionaria en una dirección definida
(Zubrick, 2014).

Factor de retardo (Rf):

Es un valor correspondiente al cociente entre la distancia recorrida por el solvente en
el plato y la distancia recorrida por la mancha de solución también en el plato.
(Zubrick, 2014).
 Diferencia entre absorción y adsorción
La adsorción es el proceso mediante el cual una sustancia es retenida sobre la
superficie de un sólido mientras que la absorción se refiere a la retención de una
sustancia dentro de los poros del sólido, modificándolo químicamente. (Skoog, 2015).

3. Ecuaciones químicas y mecanismos de reacción

En el primer experimento: Extracto orgánico + Alúmina + n-hexano
En el segundo experimento: Silica gel + solvente(n-hexano o acetona pura)

4. Datos

Tabla 1. Hoja de seguridad n-hexano

Fórmula Pictogramas de Propiedades Identificación Consejos de
química seguridad fisicoquímicas de peligros prudencia

C6H14 Estado físico: Líquido y No manipular la

Líquido vapores muy sustancia antes de
inflamables haber leído y
Olor y aspecto: Puede ser comprendido todas
Incoloro-Olor mortal en caso las instrucciones de
como a Gasolina de ingestión y seguridad
 penetración en Llevar guantes/gafas
Punto de fusión: las vías de protección
Aprox. -95°C respiratorias EN CASO DE
Punto de Provoca CONTACTO CON
inflamación: irritación LA PIEL (o el pelo):
-22°C cutánea Quitar
Puede provocar inmediatamente toda
pH de solución somnolencia o la ropa contaminada.
acuosa: vértigo Enjuagar la piel con
No determinado Se sospecha que agua [o ducharse]
perjudica a la EN CASO DE
Solubilidad en fertilidad INHALACIÓN:
tubo sellado a Puede provocar Transportar a la
25°C: <0.1 g/L daños en los persona al aire libre
GHS02, órganos y mantenerla en una
GHS07, (sistema posición que le
GHS08, nervioso) tras facilite la
GHS09 exposiciones respiración
prolongadas o EN CASO DE
repetidas (en exposición
caso de manifiesta o
inhalación) presunta: Consultar
Tóxico para los a un médico
organismos
acuáticos, con
efectos nocivos
duraderos
Tabla 2. Hoja de seguridad Gel de Sílice 60
Fórmula Pictogramas de Propiedades Identificación Consejos de
química seguridad fisicoquímicas de peligros prudencia

SiO2 No es necesario Estado físico: Esta sustancia La evaluación de

Sólido-Polvo no reúne los esta sustancia
criterios para ser determina que no es
Olor y aspecto: clasificada PBT ni mPmB
Incoloro-blanco conforme al
Reglamento no
Punto de fusión: 1272/2008/CE
No determinado
Punto de
inflamación:
No combustible

pH de solución
acuosa: 7 en 100
g/L a 20°C

Solubilidad en
 tubo sellado a
25°C: insoluble en
agua

Tabla 3. Hoja de seguridad acetona

Fórmula Pictogramas de Propiedades Identificación Consejos de
química seguridad fisicoquímicas de peligros prudencia

C3H8O Estado físico: Líquido y Mantener alejado de

Líquido vapores muy fuentes de calor,
inflamables chispas, llama
Olor y aspecto: Provoca abierta o superficies
Incoloro-Levement irritación ocular calientes. No fumar
e dulce como grave EN CASO DE
frutado Puede provocar CONTACTO CON
somnolencia o LOS OJOS:
Punto de fusión: vértigo Enjuagar con agua
GHS02, Aprox. -94.8°C cuidadosamente
GHS07 Punto de durante varios
inflamación: minutos. Quitar las
-17°C lentes de contacto
cuando estén
pH de solución presentes y pueda
acuosa: hacerse con
5-6 solución 365 facilidad. Proseguir
g/L a 20°C con el lavado
Almacenar en un
Solubilidad en lugar bien ventilado.
tubo sellado a Mantener el
25°C: miscible en recipiente cerrado
cualquier herméticamente
proporción
5. Diagrama de flujo del proceso

5.1. Cromatografía de columna de extracto de huacatay

Enrollar una porción del tubo de Sujetar el tubo de cromatografía

cromatografía con un papel con las pinzas por la zona enrollada.

Introducir una porción de Tapar el orificio inferior del tubo

algodón en el interior del tubo cromatográfico y verter ⅔ de volumen
cromatográfico con ayuda de de n-hexano en la columna del tubo.
una bagueta.
Echar alúmina poco a poco Retirar el dedo índice de la parte
sobre el volumen de n-hexano inferior del tubo luego de que deje de
manteniendo un nivel por gotear el n-hexano; después verter 1mL
debajo del solvente. de pigmento de huacatay.

Verter volumen de n-hexano Recoger el pigmento de color

y dejar gotear el solvente sobre amarillento en otro tubo de ensayo
un tubo de ensayo apoyado en justo cuando desciende hacia la parte
otro recipiente. inferior del tubo cromatográfico.
Para recoger el segundo volumen
pigmento, se usa hexano-acetona
5:1 y después acetona pura.

5.2. Cromatografía de capa fina de papilla de alúmina

Preparación de la papilla(acuoso) Lavar y secar los portaobjetos

Depositar sobre toda la placa, la papilla Calentar en una estufa a 105°C

Punto de aplicación del pigmento Colocar en una mezcla de hexano

a 1 cm

Colocar en hexano puro Medida del portaobjetos

 6. Resultados

6.1. Para el experimento: Cromatografía de columna de extracto de huacatay

6.1.1. Datos experimentales

Volumen de Volumen de Volumen de Volumen de Masa de

n-hexano usado n-hexano - acetona usado pigmento de alúmina
acetona 5:1 huacatay
usado

2 mL 1 mL 2 mL 1 mL 5 gr.

6.1.2. Observaciones experimentales

Figura 1.
Adición de n-hexano sobre el extracto de huacatay

Nota. Se demoró más tiempo de lo debido para hacer descender un pigmento inicial de
huacatay.
 Figura 2.
Descripción del primer pigmento de huacatay obtenido

Nota. El color del primer pigmento obtenido es amarillo pálido, transparente y de un volumen
menor a 0.5 mL.

Figura 3.
Segundo pigmento obtenido

Nota. Para obtener el segundo pigmento, se usó en primer lugar n-hexano - acetona 5:1 y se
observó que no descendía nada; pero cuando se agrego cierto volumen de acetona el
pigmento logró desprenderse fácilmente y llegar en menos tiempo a la parte inferior del tubo
cromatográfico. El color del pigmento es un amarillo más intenso.
 6.1.3. Resultados experimentales

Volumen de 1er pigmento recogido Volumen de 2 do pigmento recogido

0.2 mL 0.4 mL

6.1.4. Discusión de resultados

● En este experimento, se usó n-hexano para la obtención del primer pigmento(amarillo
pálido). El color pálido se explica por la baja polaridad del n-hexano, lo cual no
permite una correcta solubilidad en agua(sustancia polar) produciendo que el agua
siga unido al compuesto orgánico. Además, debido a su baja fuerza de elución, no
logra desplazar en totalidad las moléculas orgánicas de su unión con el
adsorbente(alúmina) y por ello, es que baja una menor cantidad de pigmento.
● Cuando se agregó la acetona pura, se comprobó que se recoge un pigmento con mayor
tonalidad de amarillo; esto es debido a que dicho solvente es más polar que el
n-hexano debido a la presencia de 1 grupo carbonilo en su estructura que se elimina
las moléculas de agua para separar el compuesto orgánico.

6.2. Para el experimento: Cromatografía de capa fina de papilla de alúmina

6.2.1. Datos experimentales

Compuesto hexano y acetona(5:1) hexano y acetona(3:1) hexano puro

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 1.1 1.8 -

𝑝𝑜𝑟 𝑢𝑛 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡o

D𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 4.15 6 6.2

𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡e

6.2.2. Resultados experimentales

Determinación del Factor de retardo
𝑅𝑓 = (𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑢𝑛 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 /𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡e)
1. (hexano y acetona (5:1)
𝑅𝑓 = 2.1/ 4.15= 0.5
𝑅𝑓 = 3.2 / 4.15= 0.62

2. ( hexano y acetona (3:1)

𝑅𝑓 = 3.3 /6 = 0.55
𝑅𝑓 = 5.1 / 6= 0.85
3. hexano puro
(No se encontró coloración por encima de la siembra)

6.2.3. Discusión de resultados

En el hexano no se notó el color amarillo indicando 2 cosas que el color amarillo es muy
nítido o en la siembra fue hecha con fuerza donde se impide el avance de los colores
En n-hexano puro no se logró visualizar ningún tipo de color
Al colocarlo en el envase con mezclas de hexano con acetona y hexano puro, el punto de
color verde empieza a descomponerse en distintos tonalidades, en amarillo en la mezcla de
n-hexano con acetona en proporción de 3:1.

7. Conclusiones
● Se logra conocer dos técnicas cromatográficas para poder identificar
sustancias orgánicas las cuales son cromatografía de capa fina y cromatografía
de columna ambas teniendo usos específicos.
● Se logra conocer los fundamentos físico-químicos para la implementación de
las técnicas de cromatografía y su posterior aplicación para la identificación de
compuestos.
8. Anexo
La Cromatografía de capa fina y sus aplicaciones al campo textil
En este trabajo se describen los fundamentos de la técnica cromatográfica de capa
fina, situándose en el esquema general de la cromatografía, analizando someramente
los fundamentos de dicha técnica; se hace especial hincapié en la descripción de las
técnicas y procedimientos operatorios, así como de los equipos básicos de trabajos,
atendiendo más a la simplicidad de los mismos, que a una descripción detallada de los
pertenecientes a las distintas casas. Se destacan por su utilidad las placas preparadas
por distintas firmas comerciales aptas para el empleo inmediato, con lo que se reduce
aún más el equipo necesario. Se hace especial referencia a los colorantes textiles,
poniendo énfasis en el grupo de los dispersos, en donde las separaciones
cromatográficas son más espectaculares y menos difundidas.

Las aplicaciones de la cromatografía de capa fina al campo textil son tan amplias que
no pretendemos resolver ni una pequeña parte de los problemas que se pueden
presentar, pues actualmente sería cuestión de una monografía bastante abultada y por
otra parte nunca exhaustiva, baste decir que en el campo de los colorantes se logran
separaciones insospechadas y en tiempos de 15-30 minutos, pero su utilidad no se
ciñe a la separación de colorantes sino también a productos auxiliares de todo tipo,
hidrolizados de fibras naturales del tipo del Mohair, Lana, etc., productos naturales
extraídos de la lana (lanolina, cholesterol, lanosterol), fungicidas bactericidas,
 blanqueadores ópticos, etc., en estas aplicaciones sólo insistiremos en algún aspecto
especial.
a. - Colorantes. La T. L. C. se aplica a todos los tipos de colorantes ácidos azoicos
para lana sobre capas de sílica-gel G o alúmina con un 2,5'% de carbonato sódico
como sustancias reactiva y como eluyente la mezcla formada por acetato de
n-butanol-piridina-agua (30: 46 : 25). Ruiz y Laroche emplean el mismo tipo de
adsorbentes y como eluyentes n-butanol-etanol-agua (2 : 1 : 1) (9 : 1 : 1) (6 : 4 : 4)
con el primero de los eluyentes lograron separar Acid Orange 52 y Acid Yellow 69.
Druding utiliza el procedimiento T. L. C. para la separación de tintas de escribir
(colorantes hidrosolubles), que es una adaptación de empleado por Reilley y Sawyer;
como eluyente se utiliza metanol, la tinta utilizada es Sheffer «Script», negra, azul,
verde y púrpura, preparándose la mezcla de adsorbente con 10 g. de gel de sílice y 23
ml. de agua destilada, activándose las placas -portas de microscopía- durante 1 hora a
llO°C y se desarrollan en frascos de 200 ml con 10 ml de etanol del 95%, los valores
del Rf se resumen en la tabla IV.

9. Referencia bibliográfica
● Areal Guerra, R., & Bessa Feixas, J. (1966). La cromatografía de capa fina y
sus aplicaciones al campo textil.
● Pavia, D; Lampman, G; Kriz, G; Engel R.(2005). Organic laboratory
techniques, a small scale approach; 2da edición. Thimson.
● Skoog, D.A., West, D.M., Holler, J. Stanley R. C. (2015) Fundamentos de
química analítica. Novena edición. México D.F.Cengage Learning
Latinoamérica.
● Zubrick, J. (2014) The Organic Chem Lab Survival Manual. 9a edición. Wiley.