El objetivo del práctico es determinar experimentalmente el contenido de cobre en una muestra de

vino, a través de espectroscopía de absorción atómica utilizando la técnica de adición estándar y

curva de calibración externa.

•Espectrofotómetro de Absorción Atómica •vaso 100 ml, embudos

Perkin-Elmer serie 3110.
Reactivos
•Lámpara de cátodo hueco de Cu, Aire
comprimido libre de aceite (comburente), •Agua destilada
acetileno (combustible), con sus válvulas •Soluciones patrón de Cu (100 mg/L) en agua
reguladoras respectivas
•Solución Sensitive Check (4mg/L)
•5 Matraces aforados de 50 mL y 5 de 10 mL.
•Vino
•Pipetas, buretas, frascos plásticos
•Muestra problemática

Se desarrollarán dos metodologías para poder realizar la determinación de cobre en la muestra de

vino, la primera corresponde a una curva de calibración ordinaria:
Se realizará a partir de una solución stock de 100mg/L en Cu y de ella se prepararán 5 soluciones en
un rango 1,0-15ppm de Cu, mediante la disolución en matraces aforaros de 50 mL. Por lo tanto, hay
que calcular para las 5 disoluciones necesarias para este rango cual es el volumen del estándar de
cobre que se debe utilizar.
Estas disoluciones ya preparadas se deben almacenar en frasquitos plásticos para evitar la
contaminación. Posterior a esto se leerá la muestra de vino, para lo cual se tomará la muestra
problema y veremos si esta hay de diluirla para que la absorbancia esté dentro del rango que entregue
la curva de calibrado. Se calculará la concentración correspondiente por triplicado y se estimarán los
datos estadígrafos.
Para la construcción de la curva de calibración se han elegido los siguientes puntos: 1 ppm, 3 ppm, 7
ppm, 10 ppm y 15 ppm para lo cual se utilizará esta relación: c1 x V1= C2 x V2 para cada una de las
concentraciones requeridas, recordando que el matraz volumétrico a utilizar es de 50 mL.
 𝐶2 ×𝑉2 1 𝑝𝑝𝑚×50 𝑚𝑙
Para 1 ppm: 𝑉1 = 𝑉1 = = 0,5 𝑚𝑙 Normalmente, la selección de los puntos en
𝐶1 100 𝑝𝑝𝑚
una curva de calibración depende del material volumétrico
Concentración Volumen (ml) con el cual se esté trabajando, en este caso se puede
(ppm) independizar de esta condición debido a que en esté caso se
1 0,5 ocupará bureta.
3 1,5
7 3,5 La tabla a continuación muestra los volúmenes del estándar
10 5,0 de 100 ppm de cobre que debemos tomar para construir la
15 7,5 curva de calibración:
Se puede realizar la curva de calibración con estos datos junto con las absorbancias arrojadas del
espectrómetro.
Para la determinación de cobre en una muestra de vino con la curva de adicción estándar, se
preparará un set de 5 matraces aforados de 10 ml conteniendo una igual cantidad de vino. Al primer
matraz no se le adicionará el estándar de cobre por lo que cada matraz tendrá las siguientes
alícuotas de cobre estándar
100 mg/L: 0,0.5,1,1.5 y 2 ml Muestra 1 2 3 4 5
Volumen de vino 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2ml
enrazando con agua
Volumen de 0 ml 0,5 ml 1 ml 1,5 ml 2 ml
destilada. Posterior a esto se
estándar 100 ppm
registra la absorbancia
obtenida de cada uno de los matraces para tener una ecuación lineal y así graficar absorbancia vs
volumen de estándar agregado.

El espectro de absorción atómica contiene un computador integrado, un mechero de flujo laminar en

donde se atomiza la muestra y bajo a este se encuentra un sistema de aspas que mezcla la muestra
con aire para pulverizarla (generar pequeñas gotitas de muestra).
También posee una manguera capilar donde se aspirará la muestra a analizar o los puntos de adicción
estándar/calibración externa. Siempre se debe colocar un vaso de agua donde se encuentra la
manguera mientras el equipo esté encendido ya que constantemente estará succionando solución.
Por otra parte, el equipo tiene un
compartimiento que se
encuentran las lámparas de
cátodo huecas, el compartimiento
tiene capacidad de hasta 4
lámparas para distintos analitos
que quisiéramos identificar, La
lámpara de cátodos hueca debe estar constituida por el material que queremos estudia.
Esta lámpara contiene un cátodo (en este caso de Cu) y un ánodo de wolframio, se le entrega una
energía que permite que el cobre pase al estado gaseoso en forma atómica y emita energía que va a
interactuar con los átomos que se encuentran en la llama en estado basal y, por tanto, una vez se
apaga la lámpara esos átomos que se
encuentran en estado gaseoso van a
regresar algunos al cátodo y otros van
a quedar pegados en el vidrio. Esto
último indica que la lámpara de cátodos
tiene una vida media promedio. Esa vida
media depende de cuanto se ha usado el
equipo.
Cada una de las lámparas tendrá una cantidad de corriente para funcionar, y esta cantidad que se
operará en el práctico es de 15 miliampere, esta se ajusta mediante el software del equipo.
Una vez instalada la lámpara de cátodo hueco procedemos a seleccionar esta dentro del software del
equipo, donde se muestra una tabla periódica de los elementos. Algunos elementos están en azul, que
son los que se pueden estudiar a partir de esta técnica en este espectrómetro.
Se seleccionará el elemento cobre, luego debemos tener en cuenta la longitud de onda requerida para
estudiar el mismo. Cual es la concentración de calibrado en rango lineal y como se realizará el ajuste
de la llama para poder estudiar al elemento en cuestión.
Toda esta información se encontrará en un libro o dentro del mismo programa del espectrómetro y
se reconocerá como libro de cocina. En estos libros se muestran cuales son las soluciones de calibrado,
cual es el rango de concentración y cual es la sensibilidad de cada una de las longitudes de onda, así
como también cuales son los posibles interferentes que pueden estar establecidos en ella,
Cuando se seleccione el elemento cobre, debemos tomar en cuenta que se encuentren todos los tickets
en verde (que el computador reconozca al equipo y que la presión de los gases es correcta). En este
práctico el gas oxidante será el aire. Luego, nos vamos a ajustes en donde podremos observar cual
es la lámpara que está en nuestro sistema, se enciende con un botón que aparece en la pantalla y nos
mostrará cuanta corriente se está entregando junto con la longitud de onda de trabajo.
Se seleccionará la longitud de onda 324,75 nm porque es una longitud que nos entrega una buena
sensibilidad.
Luego de esto, en el menú que se encuentra en la pantalla nos dirigiremos a la llama y la encenderemos
con el botón que se encuentra en el extremo inferior izquierdo y observamos como se prende. La llama
posee un color azul y se debe mantener estable. El equipo tiene un sistema de seguridad que apagaría
la llama en el caso de que exista una fuga de gas o que la presión no sea suficiente a la que se le indicó
al equipo.
Después del encendido de la llama, debemos ajustar la posición del mechero de
flujo laminar, esto se realizará a partir de una solución de 4 ppm de Cu+2
(solución sensitive check). Se introduce la manguera dentro de esa solución y se
observará que la llama tiene una coloración rojiza. Inmediatamente en la pantalla
arrojará la absorbancia y nos mostrará la posición de la llama correcta.
La posición del mechero se puede ajustar con una perilla que se encuentra a su lado, nos indicará la
profundidad y proximidad de la misma. Por otro lado, la perilla que se encuentra abajo ajusta la
altura del mechero respecto al detector. Una vez ajustado todo lo anterior no es necesario volverlo
a hacer en cada medición. Se apaga y se enciende de nuevo la llama para observar como se comporta
la muestra de cobre antes de empezar las mediciones.
Una vez preparados todos los estándares para la curva de estándar externo, las ubicaremos sobre
la platina del espectrómetro y cerraremos la tapa de la llama porque se está produciendo radiación
y debemos proteger nuestros ojos de esta.
El orden de las soluciones será en orden creciente de dilución, cada vez que vamos cambiando la
dilución se debe lavar con agua el sistema mediante la manguera.
Se aprieta “auto cero” para que reconozca el agua como cero unidades de absorbancia (o cercanos a
cero). Al ir midiendo las muestras, debemos asegurarnos que el equipo las este absorbiendo. Una vez
se estabilice la absorbancia o se quede entre dos números se saca la manguera y se lava el capilar
hasta llegar a un valor de absorbancia cercano a cero.

Cuando se tengan los datos de la curva de calibración externa, se procederá a construir una tabla de
la concentración del estándar de cobre en ppm en matraces de 50 ml y la absorbancia registrada a
la longitud de onda escogida. Se obtiene una ecuación lineal y se grafican los datos. A partir de este
se analizará la muestra de vino, con lo cual se toma un cierto volumen y se lleva a 3 matraces de 50
ml y se registra la absorbancia. Ejemplo:
Concentración Absorbancia Ecuación: y=0,0253x+0,1535
estándar de (324,8 nm)
cobre (ppm) En el caso de que la absorbancia que arroje el vino esté fuera
1 0,185 del rango de calibración, se tendrá que diluir la muestra. Como
3 0,230 ejemplo se puede tomar 10 ml y aforarlo en un matraz de 50
5 0,280 ml. De la ecuación lineal obtenida anteriormente, se evalúa en
10 0,388 ella los valores de absorbancia en el “Y” de cada matraz. Para
15 0,545 calcular la concentración se debe tomar en cuenta el factor de
dilución. Finalmente se calcula el coeficiente de variación y la
desviación estándar. Ejemplo: análisis de la muestra en triplicado:
Como la ecuación y=0,0253x+0,1535 se evalúa en y Muestra Absorbancia
0,300−0,1535 1 0,300
Para la primera muestra: 𝑥 = = 5,79 𝑝𝑝𝑚
0,0253
2 0,308
aplicando fator de dilución 𝐶1 × 𝑉1 = 𝐶2 × 𝑉2
3 0,311
𝐶1 × 5𝑚𝑙 = 5,79𝑝𝑝𝑚 × 50𝑚𝑙 𝐶1 = 57,9 𝑝𝑝𝑚
En el caso del método de adicción estándar, se debe recordar que se prepararon 5 matraces con
distintos volúmenes de estándar de cobre. En estos se debe determinar la absorbancia y la curva de
calibrado. Una vez obtenida la curva se debe reordenar la ecuación para poder obtener la
𝑎×𝐶
concentración de la muestra problema (Cx) 𝐶𝑥 = 𝑏×𝑉𝑠𝑡 donde Cst es la concentración del estándar,
𝑥
a es el intercepto y b la pendiente de la ecuación. El factor de dilución está considerado en la derivación
de la formula.
Método de adición estándar:
Muestra 1 2 3 4 5
Volumen de vino 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2ml
Volumen de 0 ml 0,5 ml 1 ml 1,5 ml 2 ml
estándar 100 ppm

Matraz 1 2 3 Ecuaciones:
1 0,401 0,309 0,298
1 Y=1,4071x+0,4267 R2=0,9944
2 0,698 0,589 0,648
2 Y=1,1863x+0,3473 R2=0,9906
3 1,198 1,010 1,009
3 Y=1,2754x+0,3469 R2=0,9940
4 1,802 1,498 1,601

𝑎×𝐶𝑠𝑡
𝐶𝑥 = 𝑏×𝑉𝑥
1 15,2 ppm
al aplicarlo con Y=1,4071x+0,4267 𝐶𝑥 =
0,4267×100
= 15,2 𝑝𝑝𝑚 2 14,6 ppm
1,4071×2,0
3 13,6 ppm
0,808
Contenido de cobre en vino X= 14,5±0,808 ppm 𝐶𝑉 = × 100 = 5,57%
14,5
Se va a determinar la cantidad de sodio en caldo de verduras mediante espectroscopía de emisión
atómica mediante una curva de calibración externa

-Fotómetro de llama Reactivos

-Matraces aforrados de 50 ml y 10 ml -Agua destilada
-Pipetas, buretas -Caldo de verduras triturado
-Vaso pp 100 ml, embudos -Soluciones patrón de Na (500 mg/L) en agua

Para la construcción de la curva de calibración externa para la determinación de sodio en una muestra
real, se utilizarán matraces de 100 ml y se utilizará un estándar de sodio de 500 ppm. El rango lineal
que se ocupará será de 10 hasta 100 ppm (10,30,50,80,100) por lo que se debe calcular la concentración
de dichos rangos para preparar la solución con volúmenes de (0.5,1,2,4,5) ml respectivamente.
Una vez construida la curva de calibración, se debe ajustar el instrumento. En primer lugar, se
enciende (tecla “ignición”) y optimiza la llama, la tecla ignición se debe mantener presionada hasta
que aparezcan las letras FLM.
Luego se debe tener presente que ya debe estar preparada la solución para calibrar el instrumento.
Para ello se aplicará una escala arbitraria donde el 0 (tecla “blanco”, girándola hasta 0) se realizará
aspirando blanco (agua miliQ) y el ajuste a 100 (tecla “fine”, girándola hasta 100) se definirá con el
control de sensibilidad utilizando la solución patrón más concentrada. Con esta última solución la
llama se tornará más amarilla por la presencia de sodio. Al finalizar el calibrado, la maguera se
introduce nuevamente al agua miliQ para lavarla.

Concentración (ppm) % de emisión Posterior a esto, se registrarán los valores de cada una de
10 16 las soluciones (% de emisión) y se hará la curva de
30 35 calibración con el valor de las concentraciones y de los % de
50 55 emisión. Ejemplo:
80 84
Y=0,9436x+7,0451
100 100
Para la preparación de la muestra problema se debe masar 100 mg por duplicado de la muestra
triturada de caldo de verduras en la balanza analítica y se va a re-suspender en un mínimo volumen
de agua (aprox 10 ml) para luego dejarlo en el baño de ultrasonido por 2 minutos. Posteriormente se
tomará esta solución y se pasará por un papel filtro, este filtrado se recogerá inmediatamente en un
matraz de aforo de 50 ml y se enraza con agua destilada.
Se tomará un aforo con el volumen necesario y se llevará a otro matraz de aforo de 50 ml para
obtener la solución de trabajo.

Se calcula la muestra por duplicado obteniéndose los siguientes datos (ejemplo)

Muestra % de emisión Se evalúan los resultados con la ecuación previamente calculada:
1 41,4
Y=0,9436x+7,0451 x= 36,4 ppm
2 43,7
Se aplica factor de dilución (si se utilizó 5 ml de alícuota)
𝐶1 × 𝑉1 = 𝐶2 × 𝑉2 → 𝐶1 × 5𝑚𝑙 = 36,4𝑝𝑝𝑚 × 50𝑚𝑙 →𝐶1 = 364𝑝𝑝𝑚
𝑚𝑔
𝐶1 = 364 × 0,05𝐿 = 18,2 𝑚𝑔 𝑒𝑛 0,1𝑔 ∴18200 mg de Na en 100g de caldo
𝐿

Se debe calcular desviación estándar y coeficiente de variación.

A partir de la tabla nutricional entregada al principio del práctico y con los resultados obtenidos se
debe analizar si es un buen método analítico y estimar otros parámetros de calidad analítica.