GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

ANÁLISIS INSTRUMENTAL I

Ing. Catalina Vasco, PhD

Ing. Christian Sandoval, MSc.
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

Escuela Politécnica Nacional

Facultad de Ingeniería Química y Agroindustria
Departamento de Ciencias Nucleares
Semestre 2018 – A
Actualizado en marzo de 2018

2
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

ÍNDICE

1. INTRODUCCIÓN 4

2. SEGURIDAD EN EL LABORATORIO 4

2.1. ACERCA DEL ESTUDIANTE 4

2.2. ACERCA DE LOS REACTIVOS QUÍMICOS 5
2.3. ¿CÓMO REACCIONAR EN CASO DE ACCIDENTES? 7

3. INSTRUCCIONES GENERALES 9

4. EVALUACIÓN 9

5. BIBLIOGRAFÍA BÁSICA 9

6. PRÁCTICAS DE LABORATORIO 10

6.1. P1. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA 10

6.2. P2. ESPECTROFOMETRÍA UV-VISIBLE 13
6.3. P3. EXTRACCIÓNES SÓLIDO-LÍQUIDO 14
6.4. P4. EXTRACCIÓN LÍQUIDO – LÍQUIDO 16
6.5. P5. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ULTRA-ALTA RESOLUCIÓN UPLC 19
6.6. P6. CROMATOGRAFÍA DE GASES 21
6.7. P7. ABSORCIÓN ATÓMICA (AA) 22
6.8. P8. ESPECTROMETRÍA DE INFRARROJOS 22

3
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

1. INTRODUCCIÓN
Ingeniería Química es una disciplina que traslada los resultados obtenidos en el laboratorio al
diseño de procesos industriales que permiten transformar las materias primas en productos
elaborados, los cuales pretenden mejorar la calidad de vida del ser humano. Es por ello una
disciplina mundialmente reconocida desde hace muchos años.

Conocer acerca del trabajo en el laboratorio es por tanto importante en la formación del
ingeniero, pues ello le permite acercarse a los fenómenos físicos y químicos de manera
controlada antes de ponerlos en práctica a nivel industrial. Además, cabe recalcar que muchos
de los datos que sirven como sustento para un diseño son obtenidos de experiencias en
laboratorio.

Este manual ha sido diseñado con el propósito de poner en práctica la teoría adquirida en esta
asignatura. Además, de que el estudiante adquiera la experticia necesaria para desenvolverse en
un laboratorio de manera segura y con el conocimiento necesario para poder reaccionar ante un
incidente con base en las fichas de seguridad de cada uno de los reactivos utilizados. El
estudiante trabajará con una gran variedad de reactivos químicos, aprenderá acerca de sus
características, manejo, y disposición final.

Adicionalmente, las prácticas de laboratorio pretenden desarrollar el espíritu investigativo y

crítico del estudiante. Al final de esta asignatura podrá reconocer la diferencia entre variables de
diseño y de respuesta de un diseño experimental y determinar cómo estas variables interactúan
con base en los resultados de la experimentación.

2. SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
La seguridad es muy importante al momento de trabajar en un laboratorio, como ya se mencionó
el estudiante estará en constante contacto con reactivos químicos los cuales deben ser
manejados con base en sus fichas de seguridad para evitar cualquier incidente. A lo largo de esta
sección se mencionarán algunas reglas a seguir durante el trabajo en las prácticas
experimentales.

2.1. Acerca del Estudiante

• Es obligatorio el uso de equipos de protección personal, entre ellos: mandil de manga larga,
guantes de nitrilo, mascarilla para vapores orgánicos y gafas de seguridad. No se permite el
uso de zapatos abiertos, licras y ropa corta o suelta que pueda engancharse durante un
experimento o prender sobre una llama.
• NO utilizar lentes de contacto, ni siquiera bajo las gafas de seguridad. Los irritantes
químicos pueden introducirse bajo los lentes y causar daños irreparables a los ojos.
• En caso de tener cabello largo, mantenerlo alejado de la llama y recogerlo.
• Las mochilas, ropa, etc. deberán ser colocados en los estantes para dichos objetos.
• El trabajo en el laboratorio debe ser realizado con seriedad, las bromas están estrictamente
prohibidas. Además, el estudiante no deberá realizar ninguna actividad diferente a la
práctica.
• La presencia de personas ajenas a la práctica está estrictamente prohibida.
• No se permite fumar, comer o beber en el laboratorio.
• El uso de computadores portátiles y celulares (salvo autorización del profesor de la
materia) están prohibidos.

4
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

• Siempre al terminar la práctica lavarse las manos con abundante agua y jabón.
• Tomar la cantidad de reactivo que vaya a utilizar. Los reactivos son costosos, y no
conviene gastarlos innecesariamente.
• Después de utilizar cualquier equipo (balanza, pH-metro, agitador, etc.) se debe cerciorar
que estén limpios y apagados.
• Durante la realización de las prácticas, el puesto de trabajo debe mantenerse LIMPIO Y
SECO.

2.2. Acerca de los Reactivos Químicos

De acuerdo con su uso los reactivos químicos se pueden clasificar de diversas maneras, una de
ellas es con base en la pureza de estos. Dentro de esta clasificación se puede mencionar:

Grado técnico: Los reactivos de grado técnico se emplean generalmente para análisis
cualitativo ya que su pureza no está comprobada, también se los conoce como grado comercial,
pues son el tipo de reactivo que se utiliza en un proceso industrial.

Grado USP (United States Pharmacopeia): Estas substancias tampoco son aconsejables para
su uso en procesos analíticos, sin embargo, cumplen las especificaciones que exigen las
normas de los Estados Unidos en cuanto a contenidos máximos de contaminantes no
peligrosos.

Grado Reactivo o Analítico (ACS): Estos reactivos cumplen las especificaciones del Reagent
Chemical Committee of the American Chemical Society (ACS), se pueden emplear en el trabajo
analítico generalmente se presentan con una etiqueta donde aparecen los porcentajes máximos
de impureza permitidos por dicha entidad internacional.

Grado estándar primario: Son reactivos de alta pureza y los resultados de los análisis
realizados sobre ellos aparecen en las etiquetas. Se emplean como patrones primarios en la
preparación de soluciones estándares.

Otros reactivos químicos: Son substancias que se preparan para su uso en aplicaciones
específicas, como solventes para espectroscopia y para cromatografía líquida de alta eficiencia.
En las etiquetas llevan la información pertinente.

Es importante que el estudiante conozca esta clasificación puesto que de acuerdo con la práctica
a realizar se requerirá que los reactivos tengan un grado de pureza determinado.

Los reactivos químicos por otra parte también pueden clasificarse por su peligrosidad, esta
clasificación es muy importante para conocer cómo manejar una substancia y cómo reaccionar
en caso de algún incidente.

Explosivos: Son substancias que pueden explotar al estar en contacto con una llama o
fuente de ignición. Ej.: trinitro tolueno (TNT), nitroglicerina.

Comburentes: Son substancias y preparados que al estar en contacto con otros

particularmente con los inflamables originan una reacción fuertemente exotérmica. Ej:
peróxidos, permanganatos

Inflamables: Son compuestos que se pueden encender fácilmente incluso sin aporte de
energía, tienen generalmente bajos puntos de ignición. También se incluyen las
substancias gaseosas que sean inflamables a presión atmosférica y los reactivos que al
entrar en contacto con agua o aire húmedo desprenden gases inflamables en cantidades
peligrosas. Ej: gasolina, tolueno


5
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

Tóxicos: Sustancias que por inhalación, ingestión o penetración cutánea pueden

ocasionar efectos para la salud graves, agudos o crónicos, e incluso la muerte. Ej:
monóxido de carbono, cianuro

Nocivos: Sustancias que por inhalación, ingestión o penetración cutánea puedan

acarrean riesgos para la salud que se pueden tratar. Ej: humos de combustión

Corrosivos: Sustancias que en contacto con los tejidos vivos puedan ejercer sobre
ellos una acción destructiva. Ej: Ácido Sulfúrico

Irritantes: Sustancias que por inhalación, ingestión o penetración cutánea puedan

entrañar riesgos de gravedad limitada. Ej: Amoníaco

Peligrosos para el medio ambiente: Sustancias y preparados cuya utilización presente

o pueda presentar riesgos inmediatos o diferidos para el medio ambiente. Ej: cianuro
de sodio, asbesto, arsénico, metales pesados

Carcinógenos o mutagénicos: Sustancias y preparados que por inhalación, ingestión

o penetración cutánea puedan producir cáncer, aumento de su frecuencia o alteraciones
en el material genético de las células

De acuerdo con esta información se presentan a continuación las normas para trabajar con
reactivos en el laboratorio.

• Está terminantemente prohibido sacar reactivos del laboratorio.

• Antes de usar cualquier reactivo químico se debe chequear sus propiedades (flamabilidad,
toxicidad, etc.) en manuales, libros, fichas de seguridad etc. De manera general, todo
reactivo (sólido o líquido) debe ser manejado con cuidado.
• Los productos químicos NUNCA se tocan directamente con las manos
• Los líquidos nunca se pipetean con la boca, para ello se proporcionará al estudiante de
propipetas en caso de que se lo requiera.
• Siempre manipular el equipo caliente con guantes de asbesto o pinzas para evitar
quemaduras.
• Usar frecuentemente la campana de extracción (encender los extractores) cuando se realice
mezclas y actividades específicas.
• No colocar solventes volátiles en vasos, ni por cortos períodos de tiempo.
• Los líquidos que se van a utilizar deben ponerse primero en un vaso de precipitación, para
luego medirlos en la probeta y luego ponerlos en el recipiente de reacción. Nunca poner
directo del frasco al recipiente de medida ni introducir pipetas en los mismos se
pueden contaminar los reactivos que tienen un alto costo comercial o producir
reacciones indeseadas.
• Nunca se debe desatender un experimento mientras se calienta o reacciona rápidamente.
AVISE inmediatamente al profesor cualquier ACCIDENTE, por mínimo que sea.
• Cuando un sistema esté en etapa de mezclado, medición de volúmenes, reacción o
calentamiento no se lo debe mirar a corta distancia.
• Lubricar siempre los tubos de vidrio, termómetros y embudos antes de introducirlos en los
tapones o corchos. Recuerde que el mal uso del equipo y su montaje es el primer paso para
un accidente.
• Añadir siempre los ácidos al agua, nunca lo contrario.
• Una vez utilizados tapar inmediatamente los frascos de los reactivos.
• Los desechos deben ser dispuestos tal como el profesor lo indique, generalmente, los
sólidos se desechan en el basurero, los líquidos en el lavabo para lo cual se deja correr una
gran cantidad de agua. Los líquidos insolubles, y sólidos o líquidos tóxicos o peligrosos se
guardan en recipientes adecuados.

6
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

• NO apuntar a nadie, ni a sí mismo, al abrir los frascos de reactivos y los embudos de

separación.
• Tener cuidado al trabajar con sustancias inflamables, hacerlo en lugares ventilados y lejos
de fuentes de calor (mecheros, reverberos, muflas, resistencias, serpentines eléctricos, etc.)
Nunca calentarlas aún en cantidades pequeñas con o cerca de una llama; a menos que el
solvente esté en un frasco bajo reflujo o unido a un sistema de destilación. No verter
solventes inflamables de un recipiente a otro cuando se halle cerca una llama.
• Nunca calentar sistemas cerrados.
• Nunca pesar los sólidos (especialmente NaOH, es altamente corrosivo) directamente en el
plato de la balanza; usar siempre un recipiente de vidrio o papel.
• NO REETIQUETAR ninguna botella o recipiente.

2.3. ¿Cómo reaccionar en caso de accidentes?

Para evitar un incendio: Seguir paso a paso las indicaciones dadas por él o la ayudante,
cuando exista advertencia de productos altamente inflamables seguir las instrucciones dadas
respecto a cuándo encender mecheros, cuando apagarlos y recordar a los otros tales
indicaciones, verificar que las mangueras estén en buen estado para evitar fugas, alejar los
reactivos de la llama. Note siempre la posición del extintor, ducha y botiquín de primeros
auxilios

Fuego en el laboratorio: Cerrar la entrada de gas inmediatamente, evacuar el laboratorio por la

salida principal o por la salida de emergencia si no es posible por la principal. Avisar a todos los
compañeros de trabajo sin que se extienda el pánico y conservando siempre la calma.

Fuego pequeño: Cerrar la entrada de gas inmediatamente, si el fuego es pequeño y localizado,

apagarlo utilizando un extintor adecuado, arena o cubriendo el fuego con un recipiente de
tamaño adecuado que lo ahogue. Retirar los productos químicos inflamables que estén cerca del
fuego. No utilizar nunca agua para extinguir un fuego provocado por la inflamación de un
disolvente.

Fuego grande: Cerrar la entrada de gas inmediatamente, aislar el fuego utilizar los extintores
adecuados Si el fuego no se puede controlar rápidamente, avisar a los bomberos y evacuar el
edificio.

Fuego en el cuerpo: Si se incendia la ropa estirarse en el suelo y rodar sobre sí mismo para
apagar las llamas. No correr ni intentar llegar a la ducha de seguridad si no está muy cerca. Es
responsabilidad ayudar a alguien que se esté quemado Cubrirlo con una manta anti fuego,
conducirlo hasta la ducha de seguridad, si está cerca o hacerle rodar por el suelo. No utilizar
nunca un extintor sobre una persona Una vez apagado el fuego, mantener a la persona tendida y
proporcionarle asistencia médica.

Quemaduras: Las pequeñas quemaduras producidas por material caliente, baños, placas o mantas
calefactores, etc, se tratarán lavado la zona afectada con agua fría durante 10 - 15 minutos. Las
quemaduras más graves requieren atención médica inmediata. No utilizar cremas y pomadas grasas
en las quemaduras graves.

Cortes: Los cortes producidos por la rotura de material de cristal son un riesgo común en el
laboratorio. Estos cortes se tienen que lavar bien, con abundante agua, corriente, durante 10
minutos como mínimo. Si son pequeños y dejan de sangrar en poco tiempo, lavarlos con agua y
jabón y taparlos con una venda u oposito adecuado. Si son grandes y no paran de sangrar,
requiere asistencia médica inmediata.

Derrame de productos químicos sobre la piel: Los productos químicos que se hayan vertido
sobre la piel han de ser lavados inmediatamente con agua corriente abundante, como mínimo

7
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

durante 15 minutos. Las duchas de seguridad instaladas en los laboratorios serán utilizadas en
aquellos casos en que la zona afectada del cuerpo sea grande y no sea suficiente el lavado en un
fregadero. Es necesario sacar toda la ropa contaminada a la persona afectada lo antes posible
mientras esté bajo la ducha. Recuerda que la rapidez en el lavado es muy importante para
reducir la gravedad y la extensión de la herida. Proporcionar asistencia médica a la persona
afectada.

Corrosiones en la piel:

• Por ácidos: Cortar lo más rápidamente posible la ropa. Lavar con agua corriente
abundante la zona afectada. Neutralizar la acidez con bicarbonato sódico durante 15-20
minutos. Sacar el exceso de pasta formada, secar y cubrir la parte afectada con
linimento óleo – calcáreo o parecido.

• Por álcalis: Lavar la zona afectada con agua corriente abundante y aclararla con una
disolución saturada de ácido bórico o con una disolución de ácido acético al 15%. Secar
y cubrir la zona afectada con una pomada de ácido tánico.

Corrosiones en los ojos: En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos) Cuanto
antes se lave el ojo, menos grave será el daño producido. Lavar los dos ojos con agua corriente
abundante durante 15 minutos como mínimo en una ducha de ojos y, si no hay, con un frasco
para lavar los ojos. Es necesario mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para
facilitar el lavado debajo de los párpados. Es necesario recibir asistencia médica, por pequeña
que parezca la lesión.

Ingestión de productos químicos: Antes de cualquier actuación concreta pedir asistencia

médica. Si el paciente está inconsciente, ponerlo en posición inclinada, con la cabeza de lado,
con la lengua hacia fuera. Si está consciente, mantenerlo apoyado. Preparar para practicarle la
respiración boca a boca. No proporcionar bebidas alcohólicas precipitadamente sin conocer la
identidad del producto ingerido. El alcohol en la mayoría de los casos aumenta la absorción de
los productos tóxicos. No provocar el vómito si el producto ingerido es corrosivo.

Inhalación de productos químicos: Conducir inmediatamente a la persona afectada a un sitio

con aire fresco. Requiere asistencia médica lo antes posible. Al primer síntoma de dificultad
respiratoria, iniciar la respiración artificial boca a boca. El oxígeno se ha de administrar
únicamente por personal entrenado. Continuar la respiración artificial hasta que el médico lo
aconseje. Tratar de identificar el vapor tóxico. Si se trata de un gas, utilizar el tipo adecuado de
máscara para gases durante el tiempo que dure el rescate del accidentado. Si la máscara
disponible no es la adecuada, será necesario mantener la respiración el máximo posible mientras
se esté en contacto con los vapores tóxicos.

Derrames de reactivos químicos: Si el derrame es pequeño limpiar inmediatamente cualquier

sustancia derramada (excepto mercurio u otra sustancia peligrosa, las cuales deben ser
reportadas al encargado). En caso de derrames ácidos, dependiendo de las dimensiones del
derrame, pueden usarse toallas de papel y espolvorearse bicarbonato de sodio. Lavar con
abundante agua y secar el área. Si los derrames son alcalinos entonces conviene espolvorear
bicarbonato de sodio, o lavar con ácido acético diluido. Lavar el área con abundante agua y
secar.

IMPORTANTE: NO bloquear los pasillos, ni las salidas para que las personas puedan
circular fácilmente por el laboratorio y salir en caso de emergencia. El incumplimiento de
cualquiera de las reglas antes mencionadas involucra la expulsión del laboratorio y la no
realización de la práctica. Si tiene alguna duda pregunte, no ponga en riesgo su vida ni la
de los demás.

8
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

3. INSTRUCCIONES GENERALES
• Las prácticas del Laboratorio de Análisis Instrumental son semestrales y tienen como co-
requisito la materia de Análisis Instrumental.
• Para aprobar el laboratorio, cada estudiante deberá realizar TODAS las prácticas, presentar
un informe por cada una de ellas. Para recuperar una práctica no realizada se deberá
presentar una solicitud con la justificación correspondiente validada por la oficina de
Bienestar Estudiantil en el plazo máximo de 48 horas.
• Durante la práctica se evaluará el fundamento teórico y el procedimiento como parte de la
participación, cabe indicar que el coloquio puede ser individual o grupal.
• Las prácticas de laboratorio comienzan a la hora indicada. El coloquio se tomará 5 minutos
después. En caso de retraso no se podrá rendir el coloquio.
• La práctica solo se podrá realizar en presencia del profesor y/o del ayudante.
• Las prácticas se realizarán en grupos a los cuales se les entregará el material correspondiente
el mismo día de su realización, TODOS los miembros del grupo serán responsables del
material, cualquier pérdida, extravío o deterioro del mismo deberán reponerlo con uno de las
MISMAS CARACTERÍSTICAS.
• Los informes deberán ser presentados según el formato establecido. La bibliografía se
redactará según el formato de tesis de la FIQA (APA 6ta edición).
• La discusión debe tratar sobre los resultados, analizar sus posibles causas y compararlos con
otras investigaciones desarrolladas acerca del tema (bibliografía).

4. EVALUACIÓN
Cada práctica se calificará sobre 10 puntos en los cuales se evaluará la participación, el informe
y el coloquio como se detalla en la Tabla 1.

Elemento de Descripción del Elemento de Evaluación % Nota % Nota

Evaluación Bim I Bim II
Informes de
De acuerdo con las instrucciones generales 70 70
laboratorio
Se evalúa los conocimientos referentes a cada
Coloquios 30 30
práctica.
TOTAL 100 100

5. BIBLIOGRAFÍA BÁSICA
• Skoog Douglas., Principios de Análisis Instrumental, Cenagel, Sexta Edición, México,
2008.

9
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

6. PRÁCTICAS DE LABORATORIO
6.1. P1. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
Preguntas antes de empezar la práctica

• ¿Qué función cumple el eluyente?

• ¿Qué es el Rf en cromatografía?
• ¿Cómo se calcula el Rf?
• Breve descripción de la práctica.
• ¿Qué es la Silicagel G?
• ¿Cómo se prepara la placa de cromatografía de capa fina?
• ¿Qué tipos de revelado conoce?
• ¿Qué es la cámara de ultravioleta? ¿Pará qué sirve? ¿Cuál es su principio?
• En que longitud de onda del ultravioleta absorben el Naftaleno, Diesel, Tolueno y
Benceno.

NOTA: El día de la práctica los estudiantes deberán traer hojas de espinaca frescas, una
regla de 30 cm y un lápiz de grafito.

Objetivos

• Separar los distintos pigmentos vegetales presentes en la espinaca por medio de

cromatografía de capa fina.

• Identificar sustancias no coloreadas por medio de cromatografía de capa fina con el uso de
revelado UV y revelado químico.

Materiales y Reactivos

Separación de Pigmentos Naturales

Materiales y Equipos * Reactivos

Placas de vidrio recubiertas con silica gel Hojas de espinaca
1 mortero Solvente de extracción (Acetona:
1 embudo de vidrio Éter de petróleo 1:1)
1 vaso de precipitación Eluyente (Benceno: Acetona 7:3)
1 tubo Capilar
1 tubo de ensayo
Papel Aluminio
Papel Filtro
Cámara de desarrollo
* En este apartado se detalla la cantidad de material de vidrio que se requiere lo cual no debe constar en el informe escrito
Está información es únicamente para ayuda del ayudante de la materia

Separación de Aminoácidos

Materiales y Equipos * Reactivos

Cámara de desarrollo Eluyente (Hidróxido de amonio 34% v/v: etanol
Placas de vidrio recubiertas con silica gel 3:7)
2 vasos de precipitación Soluciones de aminoácidos 8% p/v (usar como
2 tubos Capilares solvente isopropanol: agua 1:5)
Rociador Solución reveladora (ninhidrina 0.2% p/v)
* En este apartado se detalla la cantidad de material de vidrio que se requiere lo cual no debe constar en el informe escrito
Está información es únicamente para ayuda del ayudante de la materia

10
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

Separación de substancias no coloreadas

Materiales y Equipos * Reactivos

Cámara Ultravioleta Eluyente (Hexano)
Cámara de desarrollo Muestras (Naftaleno, Diesel,
Placas de vidrio recubiertas con silica gel Tolueno, Benceno)
4 vasos de precipitación
4 tubos Capilares
* En este apartado se detalla la cantidad de material de vidrio que se requiere lo cual no debe constar en el informe escrito
Está información es únicamente para ayuda del ayudante de la materia

Procedimiento

Separación de Pigmentos Naturales

1. Colocar en un mortero trozos de hojas de espinaca previamente lavadas y secadas,

moler las hojas de espinaca, y añadir paulatinamente el solvente de extracción hasta
formar una pasta que adquiera una coloración verde intenso.

2. Colocar en el embudo de vidrio papel filtro y colocar la pasta, recoger el extracto en un

vaso de precipitación.

3. Colocar el extracto en un tubo de ensayo y tapar con papel aluminio o tapa.

4. Con la ayuda de un lápiz trazar líneas paralelas en la placa cada 3 cm. Tener en cuenta
de no dañar su superficie. Aplicar el extracto a 2 cm del extremo inferior de la placa con
el uso de un capilar para ello mantener el capilar en posición vertical respecto a la placa
y dejar fluir el extracto hasta lograr una mancha bien concentrada.

5. En la cámara de desarrollo colocar el eluyente y saturar la cámara de desarrollo por 20

minutos junto con la placa cromatográfica.

6. Colocar la placa cromatográfica sobre el eluyente, de manera que éste no llegue a tocar
las marcas con la muestra, esperar que el eluyente suba por la placa, y arrastre los
componentes del extracto.

7. Analizar y determinar los componentes separados por cromatografía de capa fina. Y

determinar sus Rf.

Separación de Aminoácidos

1. Con la ayuda de un lápiz trazar líneas paralelas cada 3 cm empleando un lápiz. Tener en
cuenta de no dañar la superficie de la placa. Aplicar las muestras de aminoácidos a 2 cm
del extremo inferior de la placa con el uso de un capilar para ello mantener el capilar en
posición vertical respecto a la placa y dejar fluir el extracto hasta lograr una mancha
bien concentrada.

2. En la cámara de desarrollo colocar el eluyente y saturar la cámara de desarrollo por 20

minutos junto con la placa cromatográfica.

3. Colocar la placa cromatográfica sobre el eluyente, de manera que éste no llegue a tocar
las marcas con la muestra, esperar que el eluyente suba por la placa, y arrastre las
muestras.

11
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

4. Luego de que la fase móvil haya ascendido ¾ partes de la placa, retirarla y marcar
inmediatamente el frente del solvente. Dejar que el solvente se evapore al ambiente.

5. Rociar la placa con la solución reveladora y esperar 30 min hasta que la reacción se
lleve a cabo. Analizar y determinar los componentes y determinar sus Rf.

Separación de substancias no coloreadas

1. Con la ayuda de un lápiz trazar líneas paralelas cada 3 cm. Asegurarse de no dañar la
superficie de la placa. Aplicar las muestras a 2 cm del extremo inferior de la placa con
el uso de un capilar para ello mantener el capilar en posición vertical respecto a la placa
y dejar fluir el extracto hasta lograr una mancha bien concentrada.

2. En la cámara de desarrollo colocar el eluyente y saturar la cámara de desarrollo por 20

minutos junto con la placa cromatográfica.

3. Colocar la placa cromatográfica sobre el eluyente, de manera que éste no llegue a tocar
las marcas con la muestra, esperar que el eluyente suba por la placa, y arrastre las
muestras.

4. Luego de que la fase móvil haya ascendido ¾ partes de la placa, retirarla y marcar
inmediatamente el frente del solvente. Dejar que el solvente se evapore al ambiente.

5. Llevar la placa cromatográfica a la cámara ultravioleta y señalar las marcas con lápiz.
Analizar y determinar los componentes y determinar sus Rf.

12
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

6.2. P2. ESPECTROFOMETRÍA UV-VISIBLE

Preguntas antes de empezar la práctica

• Explicar la Ley de Lambert y Beer

• Explicar el funcionamiento del espectrofotómetro
• Cuál es la zona del espectro visible y cuál del ultravioleta.
• Tipos de celdas utilizadas en espectrofotometría.

Objetivos

Adquirir la destreza en la preparación de soluciones de diferente concentración, usar varios tipos

de espectrofotómetros, construir curvas de calibración y determinar la concentración de una
solución de colorante.

Materiales, Equipos y Reactivos

Materiales y Equipos * Reactivos

4 matraces aforados de 100 mL Agua destilada
2 vasos de precipitación de 500 mL Solución de colorante Azul BRL 50 ppm
3 pipetas aforadas de 10, 25 y 50 mL
1 piceta con agua destilada
1 pera de succión.
Espectrofotómetros
* En este apartado se detalla la cantidad de material de vidrio que se requiere lo cual no debe constar en el informe escrito
Está información es únicamente para ayuda del ayudante de la materia

Metodología

1. Preparar soluciones de 10, 20, 30 y 40 ppm de colorante a partir de la solución madre de

50 ppm.

2. Con la solución madre determinar el espectro de absorción en el espectro UV/VIS en la

región visible entre los 400 y 700 nm. Se debe cuidar de que la solución no esté
concentrada (la máxima absorbancia no debe ser mayor de 2). Si la solución está muy
concentrada diluir y volver a realizar la determinación del espectro, caso contrario
determinar la longitud de onda de máxima absorbancia del colorante.

3. Realizar lecturas de la absorbancia para todas las soluciones y con ello construir la
curva de calibración del colorante (Gráfica absorbancia vs concentración).

4. Determinar la concentración de soluciones de colorante que serán proporcionadas

durante la práctica.

5. Medir la absorbancia de las soluciones preparadas en los otros espectrofotómetros

disponibles en el laboratorio y comparar los resultados entre sí.

13
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

6.3. P3. EXTRACCIONES SÓLIDO-LÍQUIDO

Preguntas antes de empezar la práctica

• ¿Qué factores influyen en la extracción sólido líquido?

• ¿Describa el proceso de extracción sólido – líquido?
• ¿El aceite obtenido se puede usar con fines alimenticios? ¿Qué proceso adicional se
debe realizar para poder hacerlo (Describa el proceso)?

Nota: los estudiantes deberán traer al menos 20 g de clavo de olor (no en polvo)

Objetivo

Estudiar la extracción sólido-líquido por medio del Soxhlet y el efecto del tamaño de partícula
sobre el rendimiento de la extracción.

Introducción

La extracción sólido – líquido también conocida como lixiviación es el proceso en el cual un

líquido pasa a través de un sólido granulado para extraer una substancia de interés. Es aplicada
en muchos campos de la industria como puede ser alimenticia (extracción de aceites esenciales)
o la industria metalúrgica (extracción de metales como el cobre). A nivel de laboratorio se
puede estudiar este fenómeno mediante un extractor Soxhlet (Figura 6.3.1) que permite el
contacto continuo del solvente con el analito a extraer. Algunos parámetros que influyen en la
extracción son: tipo de solvente, tiempo de contacto, temperatura, tamaño de la muestra, entre
otras.

Figura 6.3.1. Equipo de extracción soxhlet

14
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

Materiales, Equipos y Reactivos

Materiales y Equipos * Reactivos

Equipo Soxhlet Hexano
Rotavapor 15g clavo de olor
1 mortero con pistilo
2 cartuchos de papel filtro
Algodón
* En este apartado se detalla la cantidad de material de vidrio que se requiere lo cual no debe constar en el informe escrito
Está información es únicamente para ayuda del ayudante de la materia

Metodología

1. Tomar 5 gramos de la muestra y triturarla con ayuda del mortero.

2. Colocar los 5g triturados en uno de los cartuchos de papel filtro, y colocarlo en el

equipo soxhlet.

3. Colocar 5g de muestra no triturada en el segundo cartucho y colocarlo en el equipo.

4. Colocar el solvente de extracción en los balones de destilación del equipo, con cuidado
de no perder el mismo.

5. Encender el equipo según las instrucciones proporcionadas por el profesor y esperar

durante una hora y media hasta que el solvente extraiga los aceites de la muestra

6. Retirar el contenido del balón de destilación y trasvasarlo en un rotavapor para

recuperar el solvente de extracción.

7. Pesar el contenido final, calcular los costos y el rendimiento, compararlos entre sí y con
la bibliografía.

15
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

6.4. P4. EXTRACCIÓN LÍQUIDO – LÍQUIDO

Preguntas antes de empezar la práctica

• ¿Qué es el coeficiente de distribución o de reparto?

• ¿Qué condiciones debe reunir el disolvente ideal para emplearlo en una extracción
líquido-líquido?
• ¿Por qué las extracciones líquido-líquido se suelen repetir varias veces?
• Realizar un diagrama de flujo que resume las principales etapas de la práctica,
indicando qué hay en cada capa (¿fase acuosa u orgánica? ¿ácida o básica?). Colorear
en rojo la fase que contiene el rojo de metilo (RM).
• ¿Cuál es la influencia del pH en la extracción? Explique por qué se añade HCl en la
primera parte de la práctica y por qué se añade NaOH en la segunda parte.
• En la extracción con embudo de decantación ¿cómo se puede saber cuál es la fase
acuosa y cuál la orgánica?

Introducción

El rojo de metilo es un colorante orgánico de uso común en el laboratorio químico como

indicador ácido-base. Este compuesto es un ácido débil que en disolución acuosa presenta el
equilibrio ácido – base que se muestra en la Figura 6.4.1. Esta molécula es no polar (insoluble
en agua), pero al reaccionar con una base fuerte (como el NaOH) se transforma en una sal iónica
y polar que se disuelve fácilmente en agua. En otras palabras, en función del pH el equilibrio de
la disolución se desplazará en un sentido u otro, pudiéndose encontrar en su forma neutra o en
su forma iónica (insoluble y soluble en agua respectivamente)

Figura 6.4.1. Estructura del rojo de metilo en medio básico y medio ácido

Objetivo

Determinar la influencia del pH en la extracción del rojo de metilo desde una disolución acuosa
a un disolvente orgánico y viceversa.

Materiales, Equipos y Reactivos

Materiales y Equipos * Reactivos

4 matraces de 250 mL 10 mL de rojo de metilo (0,5 g/L)
1 embudo de separación 20 mL de cloroformo
20 mL de HCl 0,2 M
200 mL de NaOH 0,1 M
* En este apartado se detalla la cantidad de material de vidrio que se requiere lo cual no debe constar en el informe escrito
Está información es únicamente para ayuda del ayudante de la materia

16
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

Metodología

Extracción del Rojo de Metilo de la Fase Acuosa

1. Comprobar que el embudo de decantación funciona correctamente y que no hay

pérdidas por la llave ni por el tapón.

2. Colocar el embudo de decantación en el aro metálico e introducir 10 mL de la

disolución acuosa básica de rojo de metilo

3. Añadir en el embudo 20 mL de cloroformo.

4. Tapar embudo con firmeza para que no se salga líquido al invertir, y sácalo del aro
sujetando firmemente el tapón y el cuello del embudo con una mano y la llave con la
otra. Agitar la mezcla durante 30 s, es importante orientar el vástago del embudo a una
zona libre del laboratorio.

5. Invertir el embudo y abrir la llave para dejar salir posibles gases.

6. Cerrar la llave y agitar nuevamente durante 30 s para que las dos fases se pongan en
contacto, abrir la llave para dejar salir posibles gases, cerrarla y repetir el proceso una o
dos veces.

7. Al finalizar la agitación, colocar el embudo de nuevo sobre el aro, aflojar el tapón para
igualar presiones, y dejar reposar hasta que exista una separación nítida entre las fases.

8. Observar la posición de cada fase y su coloración.

9. Añadir en el embudo 5 mL de una disolución de HCl 0.2M.

10. Repetir el proceso de extracción, volviendo a agitar y dejando reposar adecuadamente.

Observar de nuevo la coloración y la posición de cada fase.

11. Colocar un matraz Erlenmeyer de 250 mL bajo el embudo. Extraer la fase inferior (más
densa) al abrir la llave. Cuando queden aproximadamente 1-2 mL en el embudo se
cierra la llave, se levanta el embudo del aro y se le imprime un ligero movimiento
circular para que las gotas retenidas en las paredes desciendan. Se deja reposar de nuevo
y se separa.

Extracción del rojo de metilo de la Fase Orgánica

1. Colocar el embudo de decantación en el aro metálico y verter en su interior la fase

orgánica obtenida en el experimento anterior.

2. Añadir sobre esta fase 100 mL de una disolución acuosa de NaOH 0,1 M.

3. Realizar la extracción, como en el experimento anterior, y dejar reposar hasta la

separación completa de las 2 fases.

4. Observar la posición de cada fase y su coloración. Compáralas con las situaciones de la

experiencia anterior.

5. Recoger la fase inferior en un matraz Erlenmeyer de 250 mL.

17
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

6. Si aún no se ha extraído bien el rojo de metilo, repetir la extracción con tantas

fracciones de 100 mL de NaOH 0,1 M como sean necesarias.

7. Recoger todas las porciones de fase orgánica en un matraz Erlenmeyer y las de fase
acuosa en otro.

18
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

6.5. P5. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ULTRA-ALTA

RESOLUCIÓN UPLC
Preguntas antes de la práctica

• ¿En qué se basa la cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) y ultra alta eficiencia
(UPLC)?
• ¿Cuáles son las diferencias entre HPLC y UPLC?
• ¿Cómo está constituido un equipo de HPLC y UPLC?
• ¿Qué tipo de muestras se pueden inyectar?
• ¿Qué detectores se utilizan comúnmente en esta técnica?
• Indique aplicaciones de esta técnica en la industria
• Importancia de la presión y temperatura en cromatografía líquida
• Interpretación y forma de cromatogramas

Nota: los estudiantes deberán traer la cantidad de pimiento necesaria para el desarrollo de
la práctica.

Objetivo

Conocer las técnicas de cromatografía líquida de alta eficiencia y de ultra alta eficiencia

Materiales, Equipos y Reactivos

Materiales y Equipos * Reactivos

1 mortero Agua tipo HPLC
1 matraz Erlenmeyer 100 mL 10 g pimiento
1 balón de aforo 50 mL 30 mL ácido meta fosfórico al 3%
Centrífuga 5 mL homocisteína 0,2%
Bomba de vacío
Filtros 0,45 µm
UPLC
* En este apartado se detalla la cantidad de material de vidrio que se requiere lo cual no debe constar en el informe escrito
Está información es únicamente para ayuda del ayudante de la materia

Extracción de Vitamina C del pimiento

1. Pesar 10 g de pimiento y moler en un mortero.

2. En un matraz de 100 mL colocar el pimiento con 30 mL de ácido meta fosfórico al 3 %

y 5 mL de homocisteína al 0,2 %, colocar el matraz en un baño ultrasonido durante 15
min.

3. Filtrar el extracto y aforar a 50 mL con agua HPLC y centrifugarlo a 5500 rpm durante
10 min, recoger el sobrenadante.

4. Durante la extracción y en todos los procedimientos mantener la muestra fría y

protegida de la luz.

Cuantificación

5. Tomar aproximadamente 1 mL del extracto filtrarlo a 0,45 µm e inyectar la muestra al

UPLC.

19
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

6. Fijar las condiciones de operación del equipo UPLC marca WATERS de acuerdo con
los siguientes datos:
• Tipo de Separación: Isocrática y en fase reversa
• Fase móvil: 20 mM KH2PO4 (pH 2,5)
• Flujo: 0,3 mL/min
• Detección: 240 nm
• Volumen de Inyección: 0,7 µL
• Temperatura: 20 °C
• Tiempo de corrida: 1 min
• Columna ACQUITY UPLC® C18 (2,1 mm * 50 mm * 1,7 µm)

7. Para la construcción de la curva de calibración preparar soluciones de estándar de Ácido

Ascórbico a concentraciones de 0,05, 0,1, 0,2 y 0,4 mg/mL en ácido meta fosfórico y
homocisteína. Para las soluciones se seguirá el mismo proceso de cuantificación
descrito anteriormente. Con las áreas y concentraciones de las soluciones se trazará la
curva de calibración, se determinará la ecuación de la curva y el contenido de vitamina
C en la muestra original.

20
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

6.6. P6. CROMATOGRAFÍA DE GASES

Preguntas antes de empezar la práctica

• ¿En qué se basa la cromatografía de gases (CG)?

• ¿Cómo está constituido un equipo de CG?
• ¿Qué detectores se usan comúnmente en CG?
• ¿Qué características tiene que tener una muestra para poder ser analizada por CG?
• ¿Si una muestra no es volátil, que procedimiento se puede realizar para ser analizada
por CG?
• Indique aplicaciones de la CG en la industria

Nota: los estudiantes deberán traer para la práctica un frasco pequeño de aceite esencial
de clavo de olor por todo el curso (Se lo puede adquirir en la Casa de los Químicos).

Materiales, Equipos y Reactivos

Materiales y Equipos * Reactivos

Cromatógrafo de gases Muestra de aceite esencial de clavo
3 balones de aforo de olor obtenido en la práctica de
separación sólido – líquido.
Muestra patrón de aceite esencial
de clavo de olor
Muestra comercial de aceite
esencial de clavo de olor
Acetato de etilo
* En este apartado se detalla la cantidad de material de vidrio que se requiere lo cual no debe constar en el informe escrito
Está información es únicamente para ayuda del ayudante de la materia

Metodología

1. De acuerdo con la consistencia del aceite, se preparan soluciones de este con el uso de
acetato de etilo como solvente.

2. Inyectar las tres muestras en el cromatógrafo, se utilizará un método interno

desarrollado en el Departamento de Ciencias Nucleares.

3. Comparar los cromatogramas obtenidos, identificar el pico de eugenol (principal

constituyente del aceite) en cada uno y comparar cualitativamente los cromatogramas.

21
 Guía de Prácticas de Laboratorio - Análisis Instrumental

6.7. P7. ABSORCIÓN ATÓMICA (AA)

La práctica consistirá en una clase demostrativa en el laboratorio del Departamento de
Metalurgia Extractiva. Durante la clase se evaluarán los conocimientos acerca de Absorción
Atómica, por lo que deberán investigar sobre esta técnica antes de recibir la clase demostrativa.
Al final de la conferencia se tomará un coloquio, que será evaluado sobre 4 puntos y los otros 6
puntos corresponderán a la presentación del informe que consistirá en la revisión bibliográfica
de todo lo relacionado a Absorción Atómica.

El coloquio estará basado en las siguientes preguntas, sin embargo, también se evaluarán
preguntas específicas relacionadas con la clase demostrativa:

Principales elementos de la tabla periódica que se pueden analizar por absorción atómica.
Principio de absorción atómica.
Esquema básico del equipo (Partes principales).
Condiciones en las que debe estar la muestra para realizar un análisis en absorción atómica.
¿Cuáles son las interferencias que se podrían dar durante un análisis de absorción atómica?

6.8. P8. ESPECTROMETRÍA DE INFRARROJOS

La práctica consistirá en una clase demostrativa en el laboratorio del CIAP. Durante la clase se
evaluarán los conocimientos acerca de esta técnica espectrofotométrica, por lo que deberán
investigar sobre esta técnica antes de recibir la clase demostrativa.

Al final de la clase se tomará un coloquio, que será evaluado sobre 4 puntos y los otros 6 puntos
corresponderán a la presentación del informe, el cual consistirá en analizar los espectros
obtenidos de las distintas muestras sólidas y líquidas analizadas durante la práctica y una
investigación bibliográfica acerca de la técnica.

El coloquio estará basado en las preguntas específicas relacionadas con la clase demostrativa.

22