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Ciencias de las plantas 166 (2004) 333–340

Producción in vitro y caracterización química de St. John's

mosto (Hypericum perforatumL. cv 'Nuevo Tallo')

SMA Zobayeda, SJ Murcha,1, VPH Rupasingheb, PK Saxenaa,∗

aDepartamento de Agricultura Vegetal, Universidad de Guelph, Guelph, Ontario, Canadá N1G 2W1
bCentro Guelph de Alimentos Funcionales, Servicios de Laboratorio, Universidad de Guelph, Guelph, Ontario, Canadá N1H 8J7

Recibido el 23 de agosto de 2003; recibido en forma revisada el 2 de octubre de 2003; aceptado el 2 de octubre de 2003

Resumen

Hypericum perforatumL. (Hierba de San Juan) es una planta medicinal tradicional que se ha utilizado para el tratamiento de trastornos neurológicos y depresión.
Para investigar un sistema de crecimiento in vitro a gran escala para la hierba de San Juan cv 'New Stem', seis sistemas de cultivo diferentes, biorreactor de burbuja
tipo globo, biorreactor de inmersión temporal, biorreactor de inmersión en la zona de la raíz temporal, matraz Erlenmeyer, recipiente grande con medio gelificado
bajo la ventilación forzada (sistema LFV) y el recipiente magenta se compararon con plantas cultivadas en invernadero en cuanto a la eficiencia de producción de
biomasa y la acumulación de las moléculas bioactivas seleccionadas, hipericina, pseudohipericina e hiperforina. Después de 25 días en cultivo, se observó
significativamente más masa fresca de plantas en un sistema de biorreactor de burbuja tipo globo (BB) que en otros sistemas de cultivo in vitro o en el sistema de
invernadero. La masa seca de la planta estaba en un nivel similar en el biorreactor BB, el sistema LFV y el invernadero. clorofilasaybfueron más altos en las hojas de
plántulas cultivadas en recipientes grandes con ventilación forzada o en biorreactores temporales de inmersión en la zona de la raíz. En general, los niveles de
hipericina, pseudohipericina e hiperforina de las plántulas cultivadas en el sistema LFV y los niveles de hipericina y pseudohipericina en el recipiente magenta fueron
mayores o similares a los de las plantas cultivadas en invernadero. El medio gelificado (sistema LFV y recipiente magenta) tuvo concentraciones más altas de
hipericina y pseudohipericina que los cultivados en medio líquido. Juntos, estos resultados muestran que la hierba de San Juan se puede producir de manera
eficiente en una variedad de sistemas de cultivo in vitro para la producción aséptica de compuestos bioactivos.
© 2003 Elsevier Ireland Ltd. Todos los derechos reservados.

Palabras clave:biorreactor; ventilación forzada; hipericina; hiperforina; pseudohipericina; Hierba de San Juan

1. Introducción [3]. La estandarización de los productos naturales para la salud de la

Hierba de San Juan (Hypericum perforatumL.) es una alternativa a
base de hierbas naturales que se utiliza principalmente para el
tratamiento de la depresión en los casos en que se pueden recetar
antidepresivos estándar (como Prozac, Paxil, Zoloft y muchos otros). La
hierba de San Juan también se ha utilizado como planta medicinal
durante siglos debido a sus propiedades antiinflamatorias, sedantes,
analgésicas, diuréticas, antipalúdicas y vulnerarias (cicatrización de
heridas).[1]. Recientemente, se demostró que la hierba de San Juan tiene
potencial como nuevo fármaco contra el cáncer.[2]. Los productos
naturales para la salud de esta hierba perenne son actualmente uno de
los cinco fitofármacos más vendidos en América del Norte.
∗Autor correspondiente. Tel.: +1-519-824-4120x52495;
fax: +1-519-767-0755.
Dirección de correo electrónico:psaxena@uoguelph.ca (PK Saxena).
1Direcciónactual: Instituto de Etnobotánica, Jardín Botánico Tropical
Nacional, Hawái, 96741.
hierba de San Juan se basa principalmente en la cuantificación de tres
metabolitos secundarios, hipericina, pseudohipericina e hiperforina.[4].
Hasta la fecha, el material vegetal cultivado en el campo generalmente
se ha utilizado para la producción comercial de hierba de San Juan, pero
la calidad de estos productos puede verse afectada por diferentes
condiciones ambientales, contaminantes y hongos, bacterias, virus e
insectos que pueden alterar la concentración de metabolitos
medicinales.[5]. Southwell y Bourke[6]informaron recientemente que la
concentración de hipericina y pseudohipericina en las hojas de la hierba
de San Juan variaba hasta 50 veces en plantas cultivadas en verano e
invierno. Se informó una amplia variación de hipericina y
pseudohipericina (diferencias de 13 a 17 veces entre la más alta y la más
baja) en cápsulas de hierba de San Juan preparadas comercialmente.[7].
Recientemente, Murch et al.[8]informaron la pérdida completa de la
capacidad para producir hiperforina y las acumulaciones reducidas de
hipericina y pseudohipericina en plántulas de hierba de San Juan
cultivadas en un medio de cultivo suplementado con níquel. Metales
pesados, incluido el níquel.

0168-9452/$ – ver portada © 2003 Elsevier Ireland Ltd. Todos los derechos reservados.
doi:10.1016/j.plantsci.2003.10.005
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puede acumularse naturalmente en el suelo o puede tener su origen en
procesos industriales y mineros[9]. En el futuro, el cultivo y la
propagación de plantas medicinales en ambientes estériles uniformes
empleando tecnologías in vitro pueden resolver muchos de los
problemas actuales relacionados con el aseguramiento de la calidad.
El objetivo del presente estudio fue desarrollar un protocolo
optimizado para el crecimiento in vitro a gran escala de la hierba de
San Juan. Para lograr este objetivo, se establecieron y compararon
seis sistemas de cultivo in vitro diferentes (en medios de cultivo
gelificados y líquidos) con plantas cultivadas en invernadero para la
producción de biomasa y la concentración de hipericina,
pseudohipericina e hiperforina.
2. Materiales y métodos
2.1. Material vegetal
Semillas de hierba de San Juan (H. perforatumL. cv 'New
Stem') (Richters, The Herb Specialists, Goodwood, Ont.) se
esterilizaron superficialmente por inmersión en una solución de
etanol al 70 % durante 5 s, seguido de inmersión en una
solución acuosa al 30 % de hipoclorito de sodio al 5,25 %
( Colgate-Palmolive Inc., Toronto, Ont.) en agua con una gota de
Tween 20 por cada 500 ml durante 20 min, y tres enjuagues con
agua destilada estéril. Las semillas estériles se germinaron en
agar agua (8 gl−1; Fisher Scientific, Nepean, Ont.) en placas de
Petri. El pH del medio se ajustó a 5,7 antes del autoclave a 1,4×
104kg m−2durante 20 min y los cultivos se incubaron en la
oscuridad en una cámara de crecimiento a 24◦C durante 14 días.
Las secciones de hipocótilo etioladas se extirparon y se
subcultivaron en un MS modificado[10]medio que contiene
vitaminas B5[11], 30g−1sacarosa y 5 -mol l−1tidiazurón, pH 5,7
(TDZ; Sigma, St. Louis, MO) y solidificado con 3,0 gl−1goma
gellam (Sigma) para una inducción de 9 días seguida de
subcultivo en el mismo medio desprovisto de TDZ el día 10.
Después de 3 semanas, los brotes regenerados se transfirieron
a medio basal en recipientes Magenta (Magenta Corporation).
tion, Chicago, IL) para alargar y proporcionar el material
experimental.
2.2. Sistemas experimentales
Se usaron como explantes secciones de tallo de hierba de
San Juan con dos a tres nudos cada uno con cuatro a seis hojas.
Se compararon los siguientes sistemas de cultivo in vitro: (i)
biorreactor de burbuja tipo globo (BB) con medio líquido; (ii)
sistema de biorreactor de inmersión temporal (TI) (RITA, Cirad
Biotrop, Francia) con medio líquido; (iii) sistema de biorreactor
de inmersión temporal en la zona de la raíz (TRI) (modificado de
RITA, Cirad Biotrop) con medio líquido; (iv) matraz tipo
Erlenmeyer (sistema EF) (volumen de 250 ml, marca Pyrex,
Fisher Scientific) con medio líquido en un agitador (New
Brunswick Scientific, New Brunswick, NJ); (v) vaso grande con
medio gelificado bajo ventilación forzada (sistema LFV); y (vi)
Recipiente magenta (sistema MV) con medio gelificado y
sistema de tapado estándar (ventilación natural).
Las secciones de tallo también se plantaron en bandejas de plántulas
de 72 celdas equipadas con lana de roca comercial (Eco Enterprises,
Shoreline, WA) y se transfirieron a un invernadero. Se utilizó un
invernadero de un solo vano (Universidad de Guelph, Guelph, Ontario)
con orientación este-oeste durante el período de julio a agosto de 2002
para el trasplante y crecimiento de plantas cultivadas in vitro. Los
esquejes se cubrieron con láminas de plástico transparente durante los
primeros 5 días para aclimatar las plantas en las condiciones del
invernadero. Las temperaturas promedio del aire en el invernadero
durante los períodos de fotografía y oscuridad fueron 25.6 y 21.2◦C,
respectivamente. La intensidad de luz promedio (flujo de fotones
fotosintéticos (PPF)) en el invernadero durante el fotoperíodo (15–16 h)
fue de 175 -mol m−2s−1y el PPF diario integrado fue de 11,4 mol m−2. La
humedad relativa promedio fue de 74%. Solución nutritiva de Hoagland
de concentración media[12](pH 5,7) para regar las plantas una vez cada
24 h.
Los detalles de los protocolos de crecimiento se dan entabla 1. Los
sistemas de cultivo se seleccionaron para representar la diversidad de
enfoques informados en la literatura reciente en la que,

tabla 1
Descripción de diferentes sistemas de cultivo in vitro utilizados para la producción de biomasa de la hierba de San Juan

sistema de cultivo Tipo de Condición de crecimiento de la planta Medio Volumen del recipiente Tipo de aireación Caudales Número de
medio volumen (l) (ml min−1) explantes
(l) por buque
tipo globo Líquido Continuamente sumergido 1 2 Aireación forzada 100 50
biorreactor de burbujas en medio liquido
inmersión temporal Líquido inmersión en medio 0.5 1 Aireación difusiva – 25
biorreactor cada 3 h durante 5 min
Zona radicular temporal Líquido Inmersión en medio 0.5 1 Aireación difusiva – 25
biorreactor de inmersión cada 3 h durante 5 min
Matraz Erlenmeyer Líquido Sumergido continuamente 0.25 0.25 Aireación difusiva – 6
en medio liquido
Vaso grande con gelificado – 0.25 1 Aireación forzada 0,3–100 25
ventilación forzada
buque magenta gelificado – 0.065 0.4 Aireación difusiva – 10
Invernadero Lana mineral de roca – – Bandejas de plug de 72 celdas – – –

Para medios gelificados, gelrite (3,0 gl−1) se utilizó como agente gelificante.
 335

Fig. 1. Diferentes sistemas de cultivo in vitro utilizados en el presente estudio: (a) biorreactor BB (barra: 3 mm); (b) biorreactor TI (barra: 6 mm); (c) biorreactor TRI
(bar: 6 mm); (d) Matraz Erlenmeyer (barra: 8 mm); (e) sistema LFV (barra: 5 mm); (f) Recipiente magenta (barra: 10 mm).

biorreactor BB[13,14], biorreactor TI[15], biorreactor TRI
[dieciséis]y sistema LFV[17,18]se han utilizado para optimizar el
crecimiento in vitro.
El biorreactor BB consistía en un contenedor tipo globo (Figura
1a). Para generar pequeñas burbujas de aire, se colocó un rociador
fabricado especialmente en el fondo del recipiente y se conectó a
una bomba de aire (bomba Elite Air, Rolf C. Hagen Inc., Montreal,
Que.). Para el biorreactor TI (Figura 1b), la inmersión del medio
nutritivo se realizó cada 3 h durante 5 min. El biorreactor TRI fue
una modificación del biorreactor TI (RITA, Cirad Biotrop) (Figura 1c)
con una malla (10 mm de profundidad) en el fondo de la cámara de
cultivo superior. La inmersión del medio nutritivo se realizó cada 3 h
durante 5 min y solo
las raíces estuvieron directamente en contacto con el medio. Para el
sistema EF (Figura 1d), se incubaron matraces de 250 ml que
contenían 125 ml de medio líquido en un agitador a 100 rpm. El
sistema LFV (Figura 1e) utilizado en este experimento fue
modificado del sistema descrito por Zobayed et al.[18]. El recipiente
era un recipiente cilíndrico con un volumen de 1,0 l. Se conectó una
bomba de aire al recipiente a través de un disco de filtro (diámetro
45 mm; diámetro de poro 0,2 m, Millex, Millipore, Bedford, MA) para
evitar que los microbios entraran en el sistema y se usó un medidor
de flujo para controlar el flujo de aire. El disco de filtro de salida se
unió a la tapa del recipiente de cultivo. El caudal del sistema de
ventilación forzada fue inicialmente de 5 ml min−1
(0,3 renovaciones de aire h−1) y se incrementó gradualmente ev-
336 SMA Zobayed et al. / Ciencias de las plantas 166 (2004) 333–340
cada 3 o 4 días hasta un caudal máximo de 100 ml min−1
(6 renovaciones de aire h−1). Para el sistema de media tensión (
Figura 1f) los recipientes fueron sellados con Parafilm (American
National CanTM, Chicago, IL) y el número de intercambios de aire fue
de 0,5 h−1.
En todos los sistemas in vitro la densidad de siembra fue de 25
explantes l−1volumen del recipiente. Los cultivos se colocaron en
una sala de crecimiento con 35 -mol m−2s−1flujo de fotones
fotosintéticos y fotoperíodo de 16 h a 23◦C. En todos los
tratamientos, los materiales vegetales (brotes) se recolectaron el día
25 y se almacenaron a -76◦C para los análisis de concentraciones de
clorofila, hipericina, pseudohipericina e hiperforina. La eficiencia de
crecimiento (masa seca y fresca y tasa de producción de biomasa)
de las plántulas también se midió el día 25.
2.3. Determinación de hipericina, pseudohipericina e
hiperforina
La metodología fue modificada de los métodos descritos anteriormente.
[19,20]. Los materiales vegetales se recolectaron (aproximadamente 0,25 g de
muestras de peso fresco) en tubos Eppendorf de 1,5 ml inmediatamente
después de la cosecha y se congelaron en nitrógeno líquido.2y almacenado a
-70◦C hasta que se usaron para el análisis químico. Los tejidos congelados se
liofilizaron durante la noche (18 h) utilizando un sistema de secado por
congelación Labconco (10×10−3mbar,
− 40◦C) (Caltec Scientific Ltd., Toronto, Ontario). Las muestras se
pulverizaron y se transfirieron a un vial de 20 ml de color ámbar
para extracción con 5 ml de acetona-metanol (50:50, v/v) durante 30
min en un sonicador ultrasónico FS-14 (Fisher Scientific). Las
muestras se centrifugaron a 3000 rpm durante 10 min (centrífuga
de la serie GS-6, Beckman Instruments Inc., Palo Alto, CA) y se
filtraron a través de un filtro de jeringa de nailon de 0,2 m (Waters,
Mississauga, Ontario). Las muestras se almacenaron en viales de
vidrio ámbar con cierres de teflón herméticamente sellados para el
análisis de hiperforina. Todos los pasos de preparación de la
muestra se llevaron a cabo en condiciones de luz de baja intensidad
a temperatura ambiente. Se dispensó una segunda alícuota de
muestra en viales de vidrio transparente y se expuso a una fuente
de luz (a 15 cm de distancia de una luz de tungsteno de 100 W)
durante 30 minutos para completar la conversión de las
protoformas de hipericina y pseudohipericina, antes del análisis. .
Se inyectó una muestra de 20 l del extracto en un Phenomenex
Hypersil C18columna (3,0 -m; 4,6 mm×100 mm) con una C18
precolumna (4 mm×3 mm) (Phenomenex, Torrance, CA) en un
sistema HPLC Shimadzu que consta de un controlador de sistema
SCL-10A, un autoinyector SIL-10A y un horno de columna CTO-10A.
Los analitos se separaron isocráticamente utilizando la fase móvil
de 0,1 mol de acetato de trietilamonio y acetonitrilo (33:67, v/v) a 1
ml min.−1tasa de flujo. La hiperforina se cuantificó a 270 y 588 nm
óptimos para hipericina y pseudohipericina en el detector de matriz
de fotodiodos SPD-M10AV.
La recuperación de hipericina e hiperforina fue de al menos un 91 % y
de pseudohipericina de al menos un 65 %. La hipericina, la
pseudohipericina y la hiperforina se cuantificaron por comparación con
las curvas estándar de la muestra ajustadas por la recuperación en la
extracción.
2.4. Determinación de la concentración de clorofila
Se recolectaron muestras para la medición de clorofila de
cada tratamiento y para todas las estimaciones se sumergió
una masa medida de brotes con hojas en acetona helada al 80
% durante 3 días, se centrifugó a 300 rpm durante 10 min y se
calcularon las concentraciones de clorofila utilizando curvas de
absorción de luz. entre 400 y 700 nm usando un
espectrofotómetro (espectrofotómetro DU-65, Beckman
Instruments Inc., Fullerton, CA).
3. Análisis estadístico
Se prepararon cinco recipientes por tratamiento y el experimento
se repitió dos veces. La significación estadística se determinó
mediante un análisis de varianza (ANOVA) de una vía utilizando el
Protocolo de modelo lineal general de SAS (SAS versión 6.12, SAS
Institute Inc., Cary, NC). Las diferencias entre medias se evaluaron
con la prueba de separación de medias de Student-Newman-Keulls.
4. Resultados
Las plántulas cultivadas en el biorreactor BB y el sistema LFV
produjeron más biomasa que las cultivadas en todos los demás
sistemas in vitro (higos. 1 y 2A–E); todos los parámetros de
crecimiento fueron significativamente más altos en estos sistemas.
La masa fresca total por plántula en el biorreactor BB fue 2,5 veces
mayor que la observada para las plántulas cultivadas en el sistema
MV. Las plántulas cultivadas en el sistema LFV tenían hojas grandes
y verdes y una acumulación de masa seca comparativamente alta
(12,5 % de masa seca en este sistema en comparación con 10,7 % en
el biorreactor BB). Las plántulas de los biorreactores TI y TRI
tuvieron la siguiente mayor masa seca después de 25 días de
tratamiento, seguidas por el sistema MV y el matraz Erlenmeyer (
Figura 2B). Las diferencias entre los biorreactores TI y TRI fueron
significativas sobre la base de la masa fresca total; sin embargo,
después de 25 días de cultivo, la masa seca total entre estos dos
tratamientos fue similar (Figura 2B). No hubo diferencia significativa
entre el crecimiento de las plántulas cultivadas en los sistemas EF y
MV. La masa seca total de las plantas cultivadas en invernadero fue
similar a la del biorreactor BB y el sistema LFV. En términos de tasa
de producción de biomasa (masa fresca), el biorreactor BB mostró
consistentemente la tasa de producción más alta seguido por el
sistema LFV y el biorreactor TI (Figura 2E).
La clorofila más altaaconcentración se observó en las hojas de las
plántulas cultivadas en invernadero, sistema LFV y biorreactor TRI
seguido del sistema MV y el valor más bajo se observó en el sistema
EF (Figura 2F). la clorofilaaLa concentración de plántulas cultivadas
en biorreactores TI y BB fue de 890 y 730 -gg−1FM, respectivamente.
Una tendencia similar de resultado se observó en la clorofilab
concentración donde se observó una concentración de pigmento
significativamente alta en las plántulas cultivadas en el invernadero,

Fig. 2. Biomasa (A–E) y concentración de clorofila (F–H) de brotes de hierba de San Juan (H. perforatum) plántulas cultivadas en varios sistemas durante 25 días (FM: masa fresca;
MS: masa seca). Cada barra representa la media±SE de 25 repeticiones. Diferencia significativa entre los tratamientos enPAGS≤0,05 indicado por a, b y c se determinó mediante la
prueba de separación de medias de Student-Newman-Keulls.
El sistema LFV y el biorreactor TRI, seguidos del sistema MV y el
sistema de biorreactor TI (Figura 2G). La cantidad más baja se
observó en las plántulas cultivadas bajo el sistema EF. La
concentración de carotenoides también mostró un resultado
similar con la concentración más alta en las plantas de
invernadero y biorreactor TRI, sistemas LFV y MV y la más baja
en el sistema EF (Figura 2H).
En general, las plántulas cultivadas en medio gelificado (sistemas
MV y LFV) y en invernadero tuvieron concentraciones de hipericina,
pseudohipericina e hiperforina más altas que las de los medios
líquidos (biorreactores BB, TI y TRI) (Fig. 3). La mayor concentración
de hipericina se cuantificó en las plántulas cultivadas en el sistema
MV a un valor 3,6 veces mayor que el del biorreactor BB (Figura 3A).
La segunda concentración más alta de hipericina fue en las plantas
cultivadas en invernadero seguidas por el sistema LFV. Se cuantificó
significativamente menos hipericina en las plántulas cultivadas en el
sistema EF que en los otros sistemas de cultivo. La concentración de
hiperforina fue más alta en plántulas cultivadas en invernadero (
Figura 3B) seguida de los sistemas LFV y MV. Las concentraciones de
pseudohipericina en plántulas cultivadas en diferentes sistemas de
cultivo mostraron una distribución similar a la de la hipericina. los
337
La concentración de pseudohipericina también fue la más alta en las
plántulas cultivadas en el sistema MV (Figura 3C). Entre los tratamientos
in vitro, la tasa de producción de hipericina, hiperforina y
pseudohipericina fue significativamente más alta en el sistema LFV (
Figura 4).
La tasa de supervivencia de los trasplantes del biorreactor BB en el
invernadero (Figura 5a) también fue de alrededor del 90% y dentro de las 5
semanas posteriores al trasplante de estas plantas (Figura 5b) estaban listos
para la cosecha.
5. Discusión
La eficacia y la seguridad son las principales preocupaciones al
considerar cualquier producto de plantas medicinales.[21]. En la hierba
de San Juan, una amplia variación del contenido de hipericina y
pseudohipericina en las cápsulas preparadas comercialmente[7]socava
su perspectiva y plantea un grave problema de seguridad. Las posibles
razones de la amplia variación de la hipericina y la pseudohipericina
pueden ser factores ambientales, agronómicos y genéticos.[5]así como
la contaminación, invasión de hongos, bacterias, virus e insectos.
Southwell y Bourke[6]variabilidad descrita en la hipericina
338
Fig. 3. Concentración de hipericina (A), hiperforina (B) y pseudohipericina (C)
de la hierba de San Juan (H. perforatum) plántulas cultivadas en varios
sistemas durante 25 días (FM: masa fresca; MS: masa seca); Cada barra
representa la media±SE de 15 repeticiones. Diferencia significativa entre los
tratamientos enPAGS≤0,05 indicado por a, b y c se determinó mediante la
prueba de separación de medias de Student-Newman-Keulls.
contenido con fecha de cosecha. El crecimiento de la hierba de San Juan
en biorreactores optimizados puede resolver muchos de estos
problemas con la producción de material vegetal perfilado
químicamente y libre de patógenos.
La optimización de dos factores principales, a saber. biomasa y
moléculas bioactivas, se requiere para una producción eficiente a gran
escala de especies de plantas medicinales. El estudio actual examinó
varias configuraciones mecánicas, componentes de medios y factores
ambientales por sus efectos en el metabolismo de la planta con el
objetivo general de desarrollar métodos para la producción de hierba de
San Juan de alta calidad. El uso de biorreactores para la producción de
plantas medicinales completas es un área de investigación relativamente
nueva. Recientemente se reportó la producción de masas de raíces de
ginseng en un biorreactor tipo globo[12,13]. Los cultivos celulares de
varias especies se utilizan para la producción en masa de metabolitos
específicos en biorreactores, pero la producción de órganos
diferenciados o plantas completas ha sido bastante limitada. Hasta
donde sabemos, este es el primer informe de producción de hierba de
San Juan en diferentes biorreactores con evaluación de metabolitos
medicinales.
ce 166 (200
Fig. 4. Tasa de producción de hipericina (A), hiperforina (B) y pseudohipericina
(C) de la hierba de San Juan (H. perforatum) plántulas cultivadas en varios
sistemas durante 25 días (FM: masa fresca; MS: masa seca); Cada barra
representa la media±SE de 15 repeticiones. Diferencia significativa entre los
tratamientos enPAGS≤0,05 indicado por a, b y c se determinó mediante la
prueba de separación de medias de Student-Newman-Keulls.
La cuantificación de la clorofila indicó que el cultivo de
plantas en medios nutrientes líquidos (biorreactor BB,
biorreactor TI y sistema EF) había reducido significativamente el
pigmento. El metabolismo de los pigmentos depende de una
variedad de factores fisiológicos, incluida la disponibilidad de
esqueletos de carbono y energía metabólica. Por lo tanto, la
reducción en la cantidad total de pigmentos puede ser la causa
o la consecuencia de la fotosíntesis reducida.
Uno de los hallazgos significativos de este estudio fue que la
producción de metabolitos secundarios varió con el sistema de cultivo in
vitro, generalmente se encontraron concentraciones más altas en los
sistemas de cultivo que contenían medios gelificados (sistemas LFV y MV)
en comparación con los sistemas líquidos (biorreactor BB, biorreactor TI
y sistema EF). En general, las concentraciones de metabolitos
secundarios estuvieron inversamente relacionadas con la producción de
biomasa; el sistema de mayor producción de biomasa (biorreactor BB)
mostró la menor concentración de metabolitos secundarios. La
excepción de esta generalización fue
 ce 166 (2004) 333–340 339

El estudio actual describe el crecimiento de los tejidos de la hierba de

San Juan en seis sistemas in vitro diferentes. Si bien los sistemas de
medios líquidos en el biorreactor BB produjeron efectivamente grandes
cantidades de biomasa, los perfiles químicos de estos tejidos fueron
menos deseables. El crecimiento en medio sólido con ventilación forzada
(sistema LFV) fue óptimo para la producción de biomasa y metabolitos
secundarios. Sin embargo, el estudio demuestra la posibilidad de cultivar
plantas medicinales en el biorreactor BB para la producción rápida y a
gran escala de biomasa que luego se puede trasplantar en condiciones
de invernadero solo durante unas pocas semanas para optimizar los
contenidos medicinales. En el presente estudio, trasplantamos las
plántulas cultivadas in vitro (vasos magenta) en un invernadero donde el
porcentaje de supervivencia fue de aproximadamente 95. La tasa de
supervivencia de los trasplantes del biorreactor BB en el invernadero
también fue alta (90 %) y la cosecha es posible dentro de las 5 semanas
posteriores al trasplante. Se necesita más investigación para evaluar el
potencial de la producción in vitro de biomasa en combinación con el
trasplante y el crecimiento en invernadero para optimizar la producción
de contenido medicinal.

En conclusión, el sistema de producción in vitro descrito aquí

tiene varias ventajas: (a) las plantas se pueden cultivar en
condiciones estériles y estandarizadas y están libres de
contaminaciones bióticas y abióticas; (b) se puede lograr un
crecimiento uniforme de las plantas con material vegetal uniforme;
y (c) la producción de compuestos medicinales puros para la
investigación bioquímica y clínica es posible en cuestión de semanas
mediante la multiplicación del biorreactor con potencial para la
propagación a gran escala de trasplantes en el invernadero. La
hierba de San Juan ha sido valorada en más de US$ 210 millones en
EE. UU. y US$ 570 millones en todo el mundo[27]. Por lo tanto, las
aplicaciones de esta tecnología son inmensas y un mayor desarrollo
tiene un potencial significativo.

Fig. 5. Plantas de hierba de San Juan cultivadas en condiciones de invernadero durante 2

semanas (a; barra: 150 mm) y 5 semanas (b; barra: 17 mm) de trasplante desde condiciones
Agradecimientos
in vitro.

Se agradece el apoyo financiero del Consejo de Ingeniería y

el sistema de ventilación forzada en el que la acumulación de biomasa se Ciencias Naturales de Canadá, el Centro de Investigación en
asoció con altas concentraciones de metabolitos secundarios. Los Tecnología Espacial y de la Tierra y el Ministerio de Agricultura,
metabolitos secundarios son compuestos característicos de un grupo Alimentación y Asuntos Rurales de Ontario. Damos las gracias a
taxonómico específico que no son necesarios para el crecimiento normal la Sra Tannis Slimmon de asistencia técnica.
de la planta, pero juegan un papel en la interacción de la planta con su
entorno.[22]. La manipulación de ambientes in vitro tiene el potencial de
inducir acumulaciones de metabolitos secundarios[23]. Sin embargo,
Referencias
dependiendo del sistema de cultivo, puede ocurrir la degradación de los
metabolitos y/o la biotransformación de los metabolitos secundarios.[24]
[1] L. Alan, ND Miller, hierba de San Juan (Hypericum perforatum): efectos
. En el estudio actual, la producción de metabolitos secundarios fue más
clínicos sobre la depresión y otras condiciones, Altern. Medicina. Rev. 3
alta en plántulas cultivadas en medios solidificados con los efectos más
(1998) 18–26.
significativos sobre las hipericinas. Las hipericinas se encuentran [2] CM Schempp, V. Krikin, G. Simon-Haarhaus, A. Kersten, J. Kiss,
principalmente en las glándulas de la superficie de las hojas.[25]y estas CC Termeer, B. Gilb, T. Kaufmann, C. Borner, JP Sleeman, JC Simon, Inhibición

glándulas pueden romperse por contacto con el medio líquido. También del crecimiento de células tumorales por hiperforina, un nuevo fármaco contra
el cáncer de la hierba de San Juan que actúa por inducción de la apoptosis,
se ha informado la redirección del metabolismo secundario en cultivos
Oncogene 21 (2002) 1242-1250.
líquidos de la hierba de San Juan para producir compuestos que no se
[3] Centro Nacional de Medicina Complementaria y Alternativa (NC-CAM), St.
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