Estrategias de regulación enzimática

Regulación de la actividad 1. Cambio en la cantidad de enzima

enzimática: a largo plazo

2. Modificación covalente de enzimas

cooperatividad y alosterismo a medio plazo

3. Unión reversible de ligandos

a corto plazo

Estrategias de regulación enzimática Estrategias de regulación enzimática

1. Cambio en la cantidad de enzima 2. Modificación covalente de enzimas

ƒ velocidad de síntesis (transcripción/traducción) ƒ cascadas de enzimas interconvertibles
• Quinasas y fosfatasas
ƒ velocidad de degradación
ƒ otras modificaciones:
ƒ isoenzimas
• Adenilación, acetilación, ADP-ribosilación…
a largo plazo ƒ proteolisis
• Activación: zimógenos
• Inhibición: ubiquitinación, proteasoma, ciclinas

a medio plazo
Activación de zimógenos por proteolisis
Estrategias de regulación enzimática
Secretada por células
del duodeno
3. Unión reversible de ligandos
ƒ disponibilidad de los sustratos
ƒ inhibición por producto
ƒ macromoléculas activadoras/inhibidoras específicas
• Inhibidor de tripsina, calmodulina, interacción con otras
proteínas
ƒ cooperatividad y alosterismo

a corto plazo

Enzimas reguladoras
Cooperatividad 1. ¿Cuáles son/deben ser las propiedades de las
enzimas reguladoras?

y 2. ¿Cómo detectan las enzimas reguladoras las

necesidades momentáneas de las células?

alosterismo 3. ¿Cuáles son los mecanismos moleculares

utilizados para regular la actividad enzimática?
 Las enzimas reguladoras tienen Cooperatividad:
algunas propiedades excepcionales sitios iguales y dependientes
1. No siguen la cinética de Michaelis-Menten

2. La retroinhibición no sigue ningúno de los patrones

de inhibición convencional – Inhibición alostérica

3. Algunas moléculas efectoras disminuyen la actividad,

mientras que otras aumentan la actividad, en algunos
casos uniéndose al mismo sitio en la enzima.

4. Estructura oligomérica.

5. Los efectos reguladores producidos por los efectores

están mediados por cambios conformacionales
producidos por su unión.

Cooperatividad: Cooperatividad: ecuación de Hill

sitios iguales y dependientes
Cooperatividad (+) n[P]0 [L]hlibre n: número de sitios
[L]unido [L] unido = K: constante de Hill
no cooperatividad
K + [L]hlibre h: coeficiente de Hill
Cooperatividad (-)

[L]unido [L]hlibre
Y (fracción de saturación) = =
h > 1 cooperatividad (+) n[P]0 K + [L]hlibre
h = 1 no cooperatividad [L]hlibre
[L]libre
h < 1 cooperatividad (-) 1- Y =
K + [L]hlibre
No cooperatividad Cooperatividad (¡empírico!)
Ecuación de Hill

n[P]0 [L]libre n[P]0 [L]hlibre Y [L]hlibre Y

= log = h log[L]libre - logK
[L] unido = [L] unido = K 1- Y
Kd +[L]libre K + [L]hlibre 1- Y
 Cooperatividad: representación de Hill Cooperatividad positiva en la unión
Y
del sustrato
Ecuación de Hill log = h log[L]libre - logK v0 Vmáx
1- Y
Y
log
1- Y
logK
h ½ Vmáx
h

log[L]libre

-logK
Km K0,5 [S]

Beneficios de la cooperatividad Significado de la cooperatividad

1. Cooperatividad positiva
0,9 Vmáx
ƒ Interruptor molecular
ƒ ↓ [S]: enzima inactiva
ƒ ↑ [S]: enzima completamente activa
↑ 9x

2. Cooperatividad negativa
0,1 Vmáx ƒ Enzima muy insensible a variaciones [S]
ƒ Bajas concentraciones de ligando pueden producir
cambios conformacionales intensos
↑81x
↑3x Cuando h=1 81 [S] ↑v0 9 veces
Cuando h=4 3 [S] ↑v0 9 veces
Cuando h=0,5 6560 [S] ↑v0 9 veces
 Regulación por retroinhibición Regulación alostérica
(feedback)
• La regulación alostérica actúa para modular enzimas
situadas en puntos clave de las rutas metabólicas

• F, el producto final de la vía, inhibe la primera etapa de

la ruta metabólica

Enz 1 Enz 2 Enz 3 Enz 4 Enz 5

A → B → C → D → E → F
• F no se parece ni al sustrato ni al producto, se une a
otro sitio.

• No es una inhibición isoestérica sino alostérica

Efectos alostéricos Cooperatividad ≠ Alosterismo

Regulatory site
• Enzimas alostéricas: además del sitio activo
tienen otro sitio al que se une reversiblemente
un efector

• Efecto homotrópico: influencia de una

molécula sobre otra del mismo tipo
• Positivo: aumenta la afinidad (o la velocidad)
• Negativo: disminuye la afinidad (o la velocidad) Cooperatividad Alosterismo:
Efecto Efecto
homotrópico (+) Homotrópico (-)
• Efecto heterotrópico: influencia de una
molécula sobre otra distinta
• Positivo: aumenta la afinidad (o la velocidad)
• Negativo: disminuye la afinidad (o la velocidad)
 Cooperatividad ≠ Alosterismo Efectores alostéricos
Regulatory site

Cooperatividad Alosterismo:
Efecto Efecto
heterotrópico (+) Heterotrópico (-)

Frecuentemente las enzimas reguladoras suelen

presentar tanto cooperatividad como alosterismo

Alosterismo
enzimas tipo K Enzimas tipo V (más raras)
Cooperatividad y
alosterismo:

Hemoglobina
 Estructura cuaternaria de la
Hemoglobina y mioglobina hemoglobina
• Ejemplo clásico de cooperatividad y alosterismo 2 pares α−β
• Proteínas que transportan y almacenan oxígeno.

• Composición:
¾ Mioglobina: 153 aa (músculo)
¾ Hemoglobina: dos subunidades α de 141 aa y 2
subunidades β de 146 aa (eritrocitos)

Hemoglobina y mioglobina Curvas de unión del oxígeno

Figure 15.21
O2-binding curves for hemoglobin and myoglobin.
 Unión del oxígeno: cambios Unión del oxígeno: cambios
conformacionales conformacionales
O2
El hierro se mueve hacia el plano, arrastrando a la His

O2
El hierro tira de la His;
le sigue la hélice alfa

Unión del oxígeno: cambios Modelos moleculares que

conformacionales explican la cooperatividad
El par superior rota 15o respecto al inferior 1. Modelo concertado o simétrico
Monod-Wyman-Changeux (MWC), 1964
L
a) 2 conformaciones T y R
L: constante alostérica
[To]
L = (en ausencia de ligando)
[Ro]
b) La molécula es simétrica

c) Los ligandos tienen distinta

afinidad por ambas formas
Desoxihemoglobina (T) Oxihemoglobina (R) KR
C =
Interfase muy afectada T R KT
Base molecular de la cooperatividad Base molecular de la cooperatividad
en la hemoglobina en la hemoglobina
Estado R: Baja Km
Estado R: Baja Km Estado T: Alta Km
Estado T: Alta Km La cooperatividad
aumenta:

Cinética sigmoidal
[To]
L =
compuesta de 2 [Ro]

curvas de
Michaelis-Menten KR
c =
KT

Base molecular de la cooperatividad Modelo concertado o simétrico (MWC)

en la hemoglobina
Estado R: Baja Km
Estado T: Alta Km [To] KR [S]
L = c = α =
[Ro] KT KR
La cooperatividad
aumenta:
[To]
L =
[Ro]

KR
c =
KT
T R

¡No puede explicar la cooperatividad negativa! http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?rid=stryer.section.1323

 Modelo concertado o simétrico (MWC) Cooperatividad: representación de Hill
Y
Ecuación de Hill log = h log[L]libre - logK
1- Y

[To] KR
L = c =
[Ro] KT

Unión del oxígeno a la hemoglobina: Significado de la ecuación de Hill

representación de Hill Cooperatividad (¡empírico!)
%sat. n[P]0 [L]hlibre
2
99%
[L] unido =
1.5
h=1 P + nL PLn K + [L]hlibre
strong
1 binding
90%
log [Y/ (1–Y)]

h =2.8 limit
0.5 [P] [L]nlibre
K=
0
50% [PLn]
-0.5
weak
-1
binding 10%
limit
-1.5
h=1 n[P]0 [L]nlibre
-2 1%
[L] unido =
10
-11
10
-10
10
-9
10
-8 K + [L]nlibre

n≠h
pO2
 Modelos moleculares que Generalización del modelo
explican la cooperatividad
2. Modelo secuencial MWC
Koshland-Némethy-Filmer (KNF), 1966
Koshland: ajuste inducido

La unión del ligando induce un cambio conformacional

en la subunidad a la que se une
KNF

Diagrama de Eigen

Alosterismo: efecto del 2,3- Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato

bisfosfoglicerato

Sólo el 8% del O2 es liberado en ausencia de 2,3-BPG

Alosterismo y hemoglobina Desoxihemoglobina (T)
Um sitio para el 2,3-BPG (cargas positivas en azul)
• ¿Cómo afecta el 2,3 bisfosfoglicerato a la
afinidad de la hemoglobina por el O2?

Efector alostérico heterotrópico negativo

Oxihemoglobina (R) Hemoglobina: estados T y R

Se pierde el sitio para el 2,3-BPG
Efectos alostéricos en el modelo Efectos alostéricos en el modelo
concertado (MWC) concertado (MWC)

Efector alostérico heterotrópico

negativo

Efector alostérico heterotrópico

positivo

T R
T R En el modelo secuencial (KNF) similar pero
aplicado a cada subunidad