UNIVERSIDAD AUTÓNOMA CHAPINGO

DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGÍA AGRÍCOLA

FISIOLOGÍA VEGETAL
PRÁCTICA 5:
EXTRACCIÓN DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS
M. C. OFELIA HERNÁNDEZ ORDOÑEZ
EQUIPO:
GRUPO; 5° “”

Fecha:
Mensaje:
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
✓ Extraer pigmentos fotosintéticos por medio de solventes orgánicos para
su identificación por medio de cromatografía de papel y del espectro de
absorción de luz de la solución de pigmentos extraídos y las longitudes de
onda de cada uno de ellos.

MATERIALES Y MÉTODOS
✓ 3 g de materia vegetal (hojas de trueno)
✓ 20 ml de cetona con bencina de petróleo
✓ Mortero y pistilo
✓ Papel filtro Whatman No. 1
✓ Micropipeta Pasteur
✓ Vaso de precipitado de 100 ml.
✓ Tubos de ensaye grande
✓ Tapones de hule
✓ Gradilla
✓ Grapas
✓ 8 ml de solvente
✓ Espectrofotómetro
✓ Celdas par espectrofotómetro
METODOLOGÍA
a) Cromatografía de pigmento
1. Obtención del extracto: a las hojas de trueno eliminarles la nervadura central, picarlas finamente, agregarlas al
mortero junto con 5 mL de la mezcla del solvente, moler hasta obtener una pasta muy fina. Adicionar otros 5 mL
para filtrar el extracto y recibirlo en el vaso de precipitado la solución con pigmentos.
2. Obtención de cromatograma: En el papel que se coloca en el tapó de hule, marque con lápiz una línea; con la
ayuda de la micropipeta, aplique sobre la línea tres gotas de extracto. Sumerja el papel en el solvente, póngalo en la
oscuridad y deje que corra unos 20 a 30 minutos, antes de que llegue el solvente al extremo superior (Figura 5.1).
Marcar con un lápiz las distancias corridas por el solvente y pigmentos. Obtener los valores Rf para cada pigmento
𝑑
con la siguiente ecuación: 𝑅𝑓 = 𝑠 ≤ 1; donde ds = distancia alcanzada por el solvente y dm= distancia media de
𝑑𝑚
cada mancha (Figura 5.2). Compare los valores obtenidos con los de la tabla de referencia.

m1

dm
m2 ds

m3
m4

Figura 5.2. Montaje de la cromatografía.

Figura 5.2. Montaje de la cromatografía.
CUADRO 5.1 Valores referenciales del Rf para cromatografía de papel.

PIGMENTO COLOR Rf SOLVENTE a Rf SOLVENTE b

Caroteno Amarillo 0.96 0.90

Feofitina Gris 0.44 0.28

Xantofilas Amarillo 0.35 – 0.10 0.22

Clorofila a Verde – azul 0.28 0.11

Clorofila b Verde - amarillo 0.17 0.10

Solvente a _______________ Solvente b ______________________

b) Espectro de absorción.
1. De las tiras de cromatografía en papel obtenidas anteriormente recorte las
partes que contienen cada uno de los pigmentos y se colocan por separado
en un vaso de precipitado que contenga 10 ml de solvente adecuado para
cada pigmento.
Mezclar perfectamente hasta disolver los pigmentos, retire el papel y
coloque el extracto en el tubo del espectrofotómetro para determinar el
espectro de absorción.
2. Determinación del espectro de absorción. Siguiendo las instrucciones
de manejo del espectrofotómetro realizar lecturas de absorbancia de 340 a
700nm en intervalos de nm.
Grafique la longitud de onda vs. absorbancia.
Identifique los picos de absorción de cada pigmeto.
Fotografía 5.1 Muestras para analizarse en el espectrofotómetro.
 RESULTADOS
Cuadro 5.2 Pigmentos identificados en la cromatografía de papel.
Equipo Rf calculado Color del pigmento Pigmento(s) identificado
1
2
3
4
5
6
7
8

Promedio
 RESULTADOS

Figura 5.1. Identificación de pigmentos en plantas mediante espectofotograma.

ANÁLISIS DE RESULTADOS
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFÍA

✓ Acosta Zamudio, C., Alfaro Maya, Cl., Ortiz Estrella, E., Colinas León, Ma. T.,
Hernández Miranda, Cl. 2003. Manual de Prácticas de Laboratorio de Fisiología
Vegetal. Academia de Fisiología Vegetal del Departamento de Fitotecnia de la
Universidad Autónoma Chapingo. Chapingo, Estado de México. 76 p.

✓ Azcón-Bieto, J.; M. Talon. (1993). Fisiología y Bioquímica Vegetal.