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DETERMINACIÓN DE FÓSFORO EN HARINA DE ARVEJA

RESUMEN

La presente práctica se realizó en los Laboratorios de Química de la Universidad Técnica Particular de Loja, con la finalidad de determinar el fósforo presente en una muestra de harina de arveja. El fósforo se encuentra presente en alimentos en forma de fosfatos, reaccionando con el reactivo molibdato de amonio y metavanadato de amonio lo cual origina un compuesto de color amarillo denominado fosfomolibdovanadato de amonio el cual se mide en un espectrofotómetro a 400 nm. La determinación de fósforo se realizó tomando 3,001 g de muestra de harina la cual fue incinerada previamente para obtener cenizas; posteriormente fueron diluidas en10 ml de solución de HCL 1:5 y aforadas

a 100ml, de Para realizar la curva de calibrado se utilizó ocho estándares de 0.25; 0.5; 1;2.5; 5; 10; 15 y 25 ppm. Estos estándares fueron preparados a partir de una solución patrón de 1000 ppm de fósforo, se calculó el volumen requerido para

cada estándar, se agregó 5 ml de reactivo de color, se aforó a 25 ml y de igual forma se dejó reaccionar por 10 minutos. Las muestras fueron leídas en el espectrofotómetro UV visible a una longitud de onda de 400 nm. La curva de calibrado obtuvo un coeficiente de correlación R 2 = 0.9432. Finalmente se obtuvo 0.0007188, 0.0006083 y 0,0001038 ppm de fósforo para las muestras de 2, 5 y 10 ml.

Palabras clave: Fósforo, molibdato de amonio, metavanadato de amonio, coeficiente de correlación, espectrofotómetro.

ABSTRACT

This practice was conducted in the Laboratories of Chemistry, Technical University

of Loja,

in

order to

determine

the phosphorus

present in

a

sample

of wheat

flour. Phosphorus

is

found in

foods as

phosphate,

reacting

with ammonium molybdate reagent and

ammonium metavanadate which

produces

a yellow compound

named ammonium fosfomolibdovanadato which

is

measured in a

spectrophotometer

at 400 nm. The

determination of

phosphorus

was made on 3,001 g of flour sample which was previously burned for ashes were

later en10 ml diluted 1:5 HCL solution and volumetrica100ml.

 

To

perform the

calibration curve was used eight standards of 0.25, 0.5, 1, 2.5, 5, 10, 15 and 25

ppm. These

standards

were prepared

from a stock

solution

of 1000 ppm of

phosphorus, calculated the required volume for each standard was added 5 ml of

color

reagent was diluted

to 25 ml and

similarly allowed

to

react for

10

minutes. Samples were read in the visible UV spectrophotometer at a wavelength

of 400 nm. The calibration curve obtained a correlation

coefficient R 2 = 0.9432. Finally

it was

ppm phosphorus for

samples

0.0007188,

of

0.0006083

and

2,

5 and

0,0001038

10 ml.

Keywords: Phosphorus, ammonium molybdate, ammonium correlation coefficient, spectrophotometer.

metavanadate,

INTRODUCCIÓN

Fósforo (1)

El fósforo

presente

en

forma

de

fosfatos

en

los alimentos,

reacciona

con el reactivo llamado molibdato de

amonio y metavanadato de amonio lo

cual

origina un compuesto

de

color

amarillo

denominado

fosfomolibdovanadato de amonio. La

cantidad

de

compuesto

formada

es

directamente proporcional

 

a

la

cantidad

de

fósforo

presente

en

la

muestra. La medición de la cantidad de

fosfomolibdovanadato formado se mide en un espectrofotómetro calibrado a una longitud de onda de 400 nanómetros.

Espectrofotometría (2)

Medición

cuantitativa

de

las

propiedades de reflexión o transmisión

de un material en función de la

longitud de onda.

Espectrofotometría implica el uso de

un

espectrofotómetro. Un

espectrofotómetro es un fotómetro que puede medir la intensidad como una función de la longitud de onda fuente de luz. Las características importantes de espectrofotómetros son ancho de banda espectral y el rango lineal de medición de la absorción o reflexión.

Un

espectrofotómetro

se

usa

comúnmente para la medición

de

la

transmitancia

o

reflectancia

de

soluciones,

sólidos

transparentes

u

opacos, tales como vidrio pulido, o de gases. Sin embargo, también pueden

ser

diseñados

para

medir

cualquiera

de

los

rangos de luz listadas que cubren por lo general alrededor de 200nm - 2500nm utilizando diferentes controles

y calibraciones . Dentro

de

estos

intervalos de luz, las calibraciones se

necesitan

en

la

máquina

utilizando

estándares que varían en escriba en función de la longitud de onda de la determinación fotométrica.

INTRODUCCIÓN Fósforo El fósforo presente en forma de fosfatos en los alimentos, reacciona con el reactivofotómetro que puede medir la intensidad como una función de la longitud de onda fuente de luz. Las características importantes de espectrofotómetros son ancho de banda espectral y el rango lineal de medición de la absorción o reflexión. Un espectrofotómetro se usa comúnmente para la medición de la transmitancia o reflectancia de soluciones, sólidos transparentes u opacos, tales como vidrio pulido, o de gases. Sin embargo, también pueden ser diseñados para medir la difusividad en cualquiera de los rangos de luz listadas que cubren por lo general alrededor de 200nm - 2500nm utilizando diferentes controles y calibraciones . Dentro de estos intervalos de luz, las calibraciones se necesitan en la máquina utilizando estándares que varían en escriba en función de la longitud de onda de la determinación fotométrica. Fig.1 -Espectrofotometro UV visible Espectrofotometría UV visible Los espectrofotómetros más comunes se utilizan en los UV y visibles las regiones del espectro, y algunos de estos instrumentos también operan en el cercano infrarrojo región. La región visible de 400-700 nanómetros en la espectrofotometría se utiliza ampliamente en " id="pdf-obj-1-234" src="pdf-obj-1-234.jpg">

Fig.1-Espectrofotometro UV visible

Espectrofotometría UV visible (2) (3)

Los espectrofotómetros más comunes se utilizan en los UV y visibles las regiones del espectro, y algunos de estos instrumentos también operan en el cercano infrarrojo región.

La

región

visible

de

400-700

nanómetros en la espectrofotometría

se

utiliza

ampliamente

en

colorimetría. Los fabricantes de tintas

Las

muestras

se

preparan

de impresión, empresas, proveedores

habitualmente

en cubetas ,

de textiles, y muchos más, necesitan

dependiendo de la región de interés,

los datos proporcionados a través de la

que

puede

estar construido

colorimetría. Se toman lecturas en la

región de cada 5-20 nanómetros a lo largo de la región visible, y producir una reflectancia espectral curva o una

secuencia de

datos

para

1. MATERIALES Y MÉTODOS

presentaciones

alternativas. Estas

curvas se pueden utilizar para probar

un

nuevo

lote

de

colorante

para

comprobar si

tiene

un partido

a

las

especificaciones,

por

ejemplo,

las

normas de impresión ISO.

Tradicionales

espectrofotómetros

región visible no puede detectar si un

colorante o el material de base tienen

fluorescencia. Esto puede

hacer

que

sea

difícil de manejar

problemas de

color si, por ejemplo una o más de las

tintas de impresión

es fluorescente.

Cuando un colorante contiene

fluorescencia, un espectrofotómetro fluorescente bi-espectralse utiliza. Hay

dos

configuraciones

principales

para

espectrofotómetros

 

espectro

visual,

D/8 (esférica) y 0/45. Los nombres

se

deben a la geometría de la fuente de

luz

observador,

y

el

interior

de

la

cámara

de

medición. Los

científicos

utilizan este instrumento para medir la

cantidad

de

compuestos

en

una

muestra.

Si

el

compuesto

es

más

concentrado más será absorbida por la

muestra;

dentro

 

de

los

rangos

pequeños,

la ley

de

Lambert sostiene

 

y

la

absorbancia

entre

las

muestras

varía

con

la

concentración lineal. En el caso de las

mediciones

de

impresión

dos

configuraciones alternativas se utilizan

comúnmente-con/sin

filtro

UV

para

controlar mejor el efecto

de

abrillantadores UV dentro de la pasta

de papel.

PREPARACIÓN DE MATERIAL PARA CENIZAS

Los 2 crisoles fueron colocados en la mufla a 500 o C durante 30 minutos, con una pinza se colocó los crisoles en el desecador durante 15 minutos.

<a href=colorimetría . Los fabricantes de tintas Las muestras se preparan de impresión, empresas, proveedores habitualmente en cubetas , de textiles, y muchos más, necesitan dependiendo de la región de interés, los datos proporcionados a través de la que puede estar construido colorimetría. Se toman lecturas en la de vidrio , plástico , o de cuarzo . región de cada 5-20 nanómetros a lo largo de la región visible, y producir una reflectancia espectral curva o una secuencia de datos para 1. MATERIALES Y MÉTODOS presentaciones alternativas. Estas curvas se pueden utilizar para probar un nuevo lote de colorante para comprobar si tiene un partido a las especificaciones, por ejemplo, las normas de impresión ISO. Tradicionales espectrofotómetros región visible no puede detectar si un colorante o el material de base tienen fluorescencia. Esto puede hacer que sea difícil de manejar problemas de color si, por ejemplo una o más de las tintas de impresión es fluorescente. Cuando un colorante contiene fluorescencia, un espectrofotómetro fluorescente bi-espectral s e utiliza. Hay dos configuraciones principales para espectrofotómetros espectro visual, D/8 (esférica) y 0/45. Los nombres se deben a la geometría de la fuente de luz observador, y el interior de la cámara de medición. Los científicos utilizan este instrumento para medir la cantidad de compuestos en una muestra. Si el compuesto es más concentrado más será absorbida por la muestra; dentro de los rangos pequeños, la ley de Beer- Lambert sostiene y la absorbancia entre las muestras varía con la concentración lineal. En el caso de las mediciones de impresión dos configuraciones alternativas se utilizan comúnmente-con/sin filtro UV para controlar mejor el efecto de abrillantadores UV dentro de la pasta de papel. PREPARACIÓN DE MATERIAL PARA CENIZAS Los 2 crisoles fueron colocados en la mufla a 500 C durante 30 minutos, con una pinza se colocó los crisoles en el desecador durante 15 minutos. FIG. 2: crisoles vacíos dentro del desecador PREPARACIÓN PARA CENIZAS DE LA MUESTRA Se pesó en uno de los crisoles 3,001gr de la muestra (harina de arveja), en la ventana de la mufla se colocó el crisol hasta quemar la muestra teniendo en cuenta que no debía observarse la salida de humos. OBTENCIÓN DE CENIZAS Se colocó en la mufla la muestra incinerada a 600 C hasta obtener cenizas permaneciendo aproximadamente 2 a 3 horas observando que la muestra tuviera un color blanquecino-grisáceo. Fig. 3: Incineración de muestras en la mufla " id="pdf-obj-2-372" src="pdf-obj-2-372.jpg">

FIG. 2: crisoles vacíos dentro del desecador

PREPARACIÓN PARA CENIZAS

DE

LA

MUESTRA

Se pesó en uno de los crisoles 3,001gr de la muestra (harina de arveja), en la ventana de la mufla se colocó el crisol hasta quemar la muestra teniendo en cuenta que no debía observarse la salida de humos.

OBTENCIÓN DE CENIZAS

Se

colocó

en

la

mufla

la

muestra

incinerada

a

600 o C

hasta

 

obtener

cenizas

 

permaneciendo

aproximadamente

2

a

3

horas

observando que la muestra tuviera un color blanquecino-grisáceo.

Fig. 3: Incineración de muestras en la mufla

Una vez obtenidas las cenizas nuevamente se colocaron en un desecador hasta el día en que
Una
vez
obtenidas
las
cenizas
nuevamente
se
colocaron
en
un
desecador
hasta
el
día
en
que
se

realizó la práctica.

Una vez obtenidas las cenizas nuevamente se colocaron en un desecador hasta el día en que

FIG.4: mezclando el reactivo de color

PREPARACIÓN DE REACTIVOS

HCl 1:5

SOLUCIONES

ESTANDARES

DE

FOSFORO

En un balón de aforo se colocó 16,7 ml

de HCl y se aforó con agua destilada.

 

1 ml 1 ml HCl HCl

X

X
X

100 ml

6 6 ml ml

100 ml

 

X= 16,7 ml

l

Solución

de

molibdato

de

amonio

Se pesó 15g de molibdato de amonio,

los cuales fueron disueltos en agua

destilada previamente calentada, y

aforada en 250ml.

Solución de metavanadato de

amonio

Se pesó 0,375g de metavanadato de

amonio, los cuales fueron disueltos en

agua destilada previamente calentada,

se añadió 75 ml de HNO 3 y se aforó en

250ml.

PREPARACIÓN

DEL

REACTIVO

DE

Blanco de estándar

En un balón de 25ml se añadió 5ml de

reactivo de color y se aforó.

Estándar de 0.25ppm

Con una micropipeta se tomó 6.25µL

de la solución patrón de 1000ppm, se

añadió 5ml de reactivo de color, y se

aforó en un balón de 25ml.

  • V 1 =C 2 V 2 /C 1

  • V 1 =0,25ppm*25ml/1000

ppm

V 1 = (6.25x10 -3 ml)*1x10 3 µ

  • V = 6 25

l

Estándar de 0.50ppm

Con una micropipeta se tomó 12.5µL

de la solución patrón de 1000ppm, se

añadió 5ml de reactivo de color, y se

aforó en un balón de 25ml.

  • V 1 =C 2 V 2 /C 1

  • V 1 =0,50ppm*25ml/1000

ppm

V 1 = (0.0125ml)*1x10 3 µ

  • V = 12 5

l

COLOR

Estándar de 1.00ppm

Se mezcló la solución del molibdato de

amonio con

 

la

solución

de

metavanadato de amonio, formándose

una

solución

de

color

ligeramente

amarillenta.

 
 

1 ml HCl

6 ml

X

100 ml

X= 16 7

l

Con una micropipeta se tomó 25µL de

la solución patrón

de

1000ppm,

se

añadió 5ml de reactivo de color, y se

aforó en un balón de 25ml.

  • V 1 =C 2 V 2 /C 1

V 1 =1.00ppm*25ml/1000

 

ppm

V 1 = (0.025ml)*1x10 3 µ

V

25

l

Estándar de 2.5 ppm

Con una micropipeta se tomó 62.5 µL

de la solución patrón de 1000ppm, se

añadió 5ml de reactivo de color, y se

aforó en un balón de 25ml. V 1 =C 2 V 2 /C 1 V 1
aforó en un balón de 25ml.
V
1 =C 2 V 2 /C 1
V 1 =2,5ppm*25ml/1000
ppm
V 1 = (0.0625ml)*1x10 3 µ
V
62 5
l
 Estándar de 5.00ppm
Con una micropipeta se tomó 125µL de
la solución patrón de 1000ppm, se
añadió 5ml de reactivo de color, y se
aforó en un balón de 25ml.
V
1 =C 2 V 2 /C 1
V
1 =5ppm*25ml/1000
ppm
V 1 = (0.125ml)*1x10 3 µ
V = 125
l
 Estándar de 10.00ppm
Con una micropipeta se tomó 250µL de
la solución patrón de 1000ppm, se
añadió 5ml de reactivo de color, y se
aforó en un balón de 25ml.
V
1 =C 2 V 2 /C 1
V
1 =10ppm*25ml/1000p
pm
V 1 = (0.25ml)*1x10 3 µ
V 1 =250 µl

Estándar de 15.00ppm

Con una micropipeta se tomó 375µL de

la solución patrón de 1000ppm, se

añadió 5ml de reactivo de color, y se

aforó en un balón de 25ml.

V 1 =C 2 V 2 /C 1

  • V 1 =15ppm*25ml/1000

ppm

V 1 = (0.375ml)*1x10 3 µ

V = 375

l

Estándar de 25.00ppm

Con una micropipeta se tomó 625µL de

la solución patrón de 1000ppm, se

añadió 5ml de reactivo de color, y se

aforó en un balón de 25ml.

 

V 1 =C 2 V 2 /C 1

V

1 =25ppm*25ml/1000

ppm

V 1 = (0.625)*1x10 3 µ

V 1 = 625 µl

 Estándar de 2.5 ppm Con una micropipeta se tomó 62.5 µL de la solución patrón

Fig. 5 Estándares preparados

PREPARACION DE LAS CENIZAS

En

el

crisol

se

colocó

10ml

de

la

solución

de

HCl,

esta

solución

fue

aforada en un balón de 100 ml (el

mismo procedimiento se realizo para el

crisol vacío, blanco de muestra.

PREPARACIÓN DE

LA

MUESTRA

PARA

LA

DETERMINACIÓN

DE

FOSFORO

Para el blanco de muestra, tomamos

5ml

de

la solución

en

un

balón

de

25ml,

se añadió

5ml

del

reactivo de

color y se aforó con agua destilada.

 

Tanto

a

los

estándares

como

a

las

diferentes muestras fueron recubiertas

con

papel

aluminio,

(ya

que

son

sensibles

a

la

luz)

y

se

dejaron

en

reposo

 

por

30mminutos

aproximadamente

 

para

que

reaccionen.

 

LECTURA DE ABSORBANCIA

LECTURA DE ABSORBANCIA FIG.6: parte interna del espectrofotómetro Se prende el equipo con 30min de anticipación

FIG.6: parte interna del

espectrofotómetro

Se prende

el

equipo

con 30min

de

anticipación una vez transcurrido este

tiempo

y

ya

con

los

estándares

y

muestras

listas

se

puede

leer

la

absorbancia.

 

Antes de leer se fijó la longitud de onda

en el equipo que fue de 400nm,

posterior a ello se

las

muestras

en

colocó cada uno de

cubetas,

éstas

se

colocaron verticalmente en el

espectrofotómetro (UV- Visible) y se

procedió

a

la lectura

de

cada

una de

las muestras, primero se leyó el blanco

de

estándares,

seguido

de

los

8

estándares,

después el blanco

de

muestra y por último las muestras.

DISCUSIÓN

RESULTADOS

DE

Determinación del coeficiente de

la curva de calibración.

 

0,25

0.09

0,014

8

0,5

0.12

0,052

3

1

0.15

0,099

8

2.5

0.29

0,400

7

5

0.50

0,866

8

  • 10 0.89

1,145

 

3

  • 15 1.75

1.677

 

3

  • 25 1,871

1,9

47

Curva de calibrado

Según las absorbancias alcanzadas con

los estándares se obtuvo la curva de

calibración la misma que nos dio un

valor de R 2 = 0,9432 mostrándonos la

linealidad de la curva

Curva de Calibrado

Absorbancia

  • f(x) = 0.08x + 0.04

LECTURA DE ABSORBANCIA FIG.6: parte interna del espectrofotómetro Se prende el equipo con 30min de anticipación

20 40

  • 0

LECTURA DE ABSORBANCIA FIG.6: parte interna del espectrofotómetro Se prende el equipo con 30min de anticipación
  • Linear ()

R² = 0.94

Concentra

λ

Abs

Abs. real

ción

(n

(ppm)

m)

blanco

 

0,07

 

400

6

Concentración ppm

Cuantificación de la concentración

de fósforo en harina de arveja.

W

Volu

Alíc

Volu

 

Señ

Con

de

men

uota

men

FD

al

cent

mue

de

(ml)

de

400

raci

stra

afor

afor

nm

ón

(g)

o

o

(pp

origi

final

m)

 

nal

         

(ml)

(ml)

Blan

   

0.07

 

co

-

25

8

-

   

12.5

0.42

0.34

3

50

2

25

3

5

   

5

0.81

0.73

3

 

5

25

4

6

   

2.5

2.57

2.49

3

10

25

0

2

Para determinar la concentración final

de fósforo utilizamos la siguiente

ppm P= C 0 ∙FD ∙ Aforo W m

fórmula:

cantidad desconocida de

soluto, y una

que contiene una cantidad conocida de

la misma sustancia.

En esta práctica

se

pudo

cumplir

positivamente con

los

objetivos

propuestos, los cuales fueron:

Determinar el efecto de la cantidad

de reactivo de molibdovanadato

siendo directamente proporcional a

la cantidad de fósforo presente en

la muestra

Cuantificar la concentración de

fósforo en una harina, teniendo

concentraciones insignificantes en

la harina de arveja

Verificar

la

curva

de

calibración,

teniendo una curva lineal

con

un

valor de R= 0.9432, la cual nos

indica que los estándares no fueron

tan bien preparados.

ppm P2= 0.34512.5 0.5

3000

ppm P2=0,0007188

ppm P5= 0.7350.5

3000

ppm P5=0,0006083

ppm P10= 2.492.50.5

3000

ppm P10=0,0001038

CONCLUSIONES

Se

concluyó

 

que

la

de

espectrofotometría <a href=análisis óptico más " id="pdf-obj-6-292" src="pdf-obj-6-292.jpg">

espectrofotometría

espectrofotometría <a href=análisis óptico más " id="pdf-obj-6-300" src="pdf-obj-6-300.jpg">

más

es

el

usado

método

en

las

investigaciones químicas y

La

cual

determina

la

absorbida o transmitida de

una

solución

que

contiene

 

una

PREGUNTAS

¿Por

qué

debemos

realizar

las

lecturas en la longitud de onda

señalada por la técnica?

Porque la técnica nos indica que a 400

nanómetros el haz de luz detecta el

fosforo de la muestra indica.

¿Qué nos indica el coeficiente de

correlación

 

en

la

curva

de

calibración?

 

El

coeficiente

de

correlación

es

un

estadístico

 

que

proporciona

información

sobre

la relación lineal

existente

entre

dos

variables.

Básicamente,

esta

información

se

refiere

a

dos

características

de

la

relación lineal: la dirección o sentido y

la cercanía o fuerza.

¿Cuál es el efecto del reactivo de

molibdato en el resultado final?

El

fósforo

inorgánico

reacciona

con

molibdato

de

amonio

en

un

medio

ácido

para

formar

un

complejo

de

fosfomolibdato que absorbe a una

longitud de onda

¿Cuál

es

el

principio

de

la

metodología AOAC 970.39?

(1) MARTINEZ,

Juan.

Práctica

de

determinación de fósforo. Blog en

línea, enlace permanente

El principio de esta metodología es la

(2) Allen,

D.,

Cooksey,

C.,

&Tsai,

B.

determinación de fósforo en frutas y

(2010,

05

de

productos frutales mediante el método

octubre).

Espectrofotometría.

Obten

MOLIBDOVANADATO

ido

de

ESPECTROFOTOMÉTRICO

¿La muestra utilizada cumple con

los requisitos de las normas?

No se puede hacer comparaciones de

nuestros resultados con los datos de

ninguna norma debido a que no se

encuentra registro en las normas INEN

acerca del contenido de fósforo en

harinas de arveja.

REFERENCIAS

BIBLIOGRAFÍA

(3) Schwedt,

Georg.

(1997).

La

guía

esencial

para

Química

Analítica.

(Brooks

Haderlie,

trad.).Chichester, Nueva York: Wiley.

(Trabajo

original

publicado

en

1943).

(4) Universidad Autónoma de Madrid.

Química Analítica Instrumental. En

línea, enlace disponible

f