INFORME #3 CROMATOGRAFÍA DE CAPA

DELGADA (CCD): SEPARACIÓN DE LOS

PIGMENTOS DE UNA PLANTA

LUIS EDUARDO CORREA HERNANDEZ

WILFRAN DE JESÚS PLAZA GARAVITO
ANA TERESA MADERA DURANGO
JUAN SEBASTIAN HERNANDEZ VIELLARD

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA AMBIENTAL,

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

LABORATORIO QUÍMICA ORGÁNICA

JAVIER MARTINEZ GUZMAN

2023
INTRODUCCIÓN
La cromatografía es una técnica de separación que se basa una fase
estacionaria y una móvil. Con el fin de que los diversos componentes de una
mezcla se separen a través de la fase móvil, la cromatografía logra la
separación de diversos compuestos en diferentes estados de agregación, ya
sea sólido-líquido, gaseoso-gaseoso entre otros. La cromatografía es de suma
importancia debido a su gran uso tanto en la industria como en el campo de la
salud y la biología, por lo que se busca con esta práctica enseñar un tipo de
cromatografía (la de capa fina).
En la práctica se busca separar los pigmentos del extracto de espinaca. El
objetivo principal de esta es la separación e identificación de los principales
compuestos de una mezcla mediante la cromatografía de capa fina.

OBJETIVO GENERAL
El objetivo de esta practica es aprender a utilizar la técnica de la cromatografía
para separar diferentes tipos de compuestos conocer sus clases y aprender a
utilizar cada una de ellas. Para este caso, separar los pigmentos de una planta,
se utilizará la cromatografía de capa delgada (CCD).

OBJETIVOS ESPECIFICOS
- Conocer la técnica de CCD, sus características y los factores que en ella
intervienen.
- Calcular los valores de RF de las sustancias separadas.
- Deducir a través del RF, la relación que existe entre la polaridad de las
sustancias que se analizan y la de la fase móvil empleada.
- Aplicar la técnica de CCD como criterio de pureza de las sustancias.
MARCO TEORICO
La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como
finalidad la separación de mezclas basándose en la diferente capacidad de
interacción de cada componente en otra sustancia. De forma general, consiste
en pasar una fase móvil (una muestra constituida por una mezcla que contiene
el compuesto deseado en el disolvente) a través de una fase estacionaria fija
sólida. La fase estacionaria retrasa el paso de los componentes de la muestra,
de forma que los componentes la atraviesan a diferentes velocidades y
se separan en el tiempo. Cada uno de los componentes de la mezcla presenta
un tiempo característico de paso por el sistema, denominado tiempo de
retención Cuando el tiempo de retención del compuesto deseado difiere del
de los otros componentes de la mezcla, éste se puede separar mediante la
separación cromatográfica.
La separación de los diferentes componentes de una mezcla que se encuentran
en un líquido o gas es el resultado de las diferentes interacciones de los solutos
a medida que se desplazan alrededor o sobre una sustancia líquida o sólida (la
fase estacionaria). Las cromatografías se hacen en dos fases. Una estática y
otra móvil.

MATERIALES Y REACTIVOS
1 probeta 2 Erlenmeyer Metanol
1 gotero 1 agitador Cloroformo
1 espátula 2placas Espinaca(hojas)
cromatográficas
3 capilares Éter de petróleo
1 hoja de papel filtro
1 vaso de 400ml Sulfato de sodio
1embudo de
1 calentador Hexano
separación
1 mortero Acetado de etilo
1 beaker
1 vidrio de reloj
 METANOL CLOROFORMO

ÉTER DE PETROLEO HEXANO

ÉTER DE PETROLEO
DIAGRAMAS

PROCEDIMIENTO
EXTRACCIÓN DE LA ESPINACA
En un mortero muela aproximadamente 65 gramos de espinaca con 50 ml de
metanol. Decante la solución de metanol haciendo presión sobre la espinaca
tratando de sacar la mayor parte del solvente. Vote la solución de metanol.
Muela la espinaca con una mezcla de 25 ml de metanol y 35 ml de Éter de
petróleo (punto de ebullición de 30 a 60 °C). Filtre la mezcla a través de un
embudo tapado con un poco de lana de vidrio en un embudo de separación.
Vuelva a moler la espinaca con 25 ml de metanol y 75 ml de Éter de petróleo y
vuelva a filtrar la mezcla en el embudo de separación. Estas operaciones
extraerán la mayor parte de los pigmentos orgánicos en la fase de Éter de
petróleo. Saque la fase inferior de metanol y vuelta. Agregue 50 ml de agua. El
objeto de lavar la solución de Éter de petróleo con agua es sacarle las pequeñas
cantidades de metanol que contenga. Vierta la solución de Éter de petróleo en
un Erlenmeyer y séquela agregándole aproximadamente 2g de sulfato de sodio
anhido y agitando. Decante la solución en otro Erlenmeyer. Agregue una
piedrita de ebullición y evapore hasta que el volumen de la solución se haya
reducido a unos 20 ml. Guarde esta solución para los siguientes experimentos.

APLICACIÓN DE LA MUESTRA
Como ejemplo de sustancias a separar por cromatografía se han tomado los
pigmentos presentes en las plantas. Estos pigmentos son los carotenos y la
clorofila. Introduzca la punta de un capilar en la solución de los pigmentos.
Luego que la solución haya ascendido en le capilar, retírelo. Toque
momentáneamente y con suavidad con la punta del capilar lleno un punto en
la placa (aproximadamente en el centro y a 2 cm del borde inferior). Se debe
lograr una manchita circular de unos 3 a 5 mm de diámetro. Debe tenerse
cuidado en no perforar la superficie del absorbente al hacer la aplicación así
que el toque en el punto de la aplicación debe ser muy suave. Si se estima que
no quedó suficiente cantidad de los compuestos en la mancha se puede hacer
otra aplicación en el mismo punto. Se deja que el solvente se evapore de la
placa y ya entonces queda Esta lista para hacer cromatografía.

CROMATOGRAFÍA
En un cilindro o beaker se introduce una tira de papel filtro de unos 10 ml de
ancho y unos 3 cm más corta que la altura del cilindro. Se impregna bien el
papel con cloroformo y luego se agrega cloroformo al recipiente hasta una
altura de unos 5 mm y se tapa con un vidrio de reloj dejándolo en reposo unos
5 minutos para que su atmÛsfera se sature con los vapores del solvente. Luego
con cuidado se introduce la placa verticalmente por su parte superior (mancha
hacia abajo) en el recipiente volviendo a taparlo. El solvente al entrar en
contacto con la parte inferior de la placa empieza a ascender y cuando llega la
mancha empezar· el proceso cromatográfico. Permita que el solvente llegue
hasta el nivel superior del adsorbente en la placa, entonces retire la placa con
cuidado.
REVELADO DE LA PLACA
Para poder ver la posición de manchas incoloras en la placa se introduce Está
en un recipiente cerrado con yodo (I2) en el fondo y se deja un rato. Una
mancha café aparecer· donde hay compuestos orgánicos en la placa producto
de un complejo formado entre el yodo gaseoso y el compuesto. Como las
manchas no son muy estables al sacar la placa del recipiente se deben
demarcar con un lápiz.

RESULTADOS

Fase 1: la placa fue introducida en el beaker con hexano, a medida que la fase
móvil fue avanzando solo se evidencio una pequeña mancha amarilla en la
mitad este solvente no alcanzó a separar completamente el compuesto, cabe
recalcar que en la fase estacionaria se conservó el pigmento que se aplicó
inicialmente, lo que nos indicó que esta fase tuvo un fallo, los datos tomados
fueron los siguientes:
Dp
Mancha: 1,9 cm Rf = Dp= distancia del punto
DRS
DRS= distancia recorrida del
Desplazamiento del solvente: 6,75cm solvente
1,9cm
Rf = = 0,28
6,75cm
Fase 2: la placa fue introducida en acetato de etilo, en esta se puede apreciar
que la en la fase móvil todos los compuestos fueron arrastrados hacia el final
quedando acumulados en la parte superior de la placa formando una mezcla
de colores amarillo, verde y verde oscuro, cabe recalcar que en la fase
estacionaria el pigmento desapareció. como dato curioso el color más
predominante fue el verde oscuro. Es decir, este tuvo un fallo debido a que no
separó correctamente el compuesto. Los datos tomados fueron los siguientes:
Dp
Mancha: 6,3 cm Rf =
DRS
6,3 cm
Desplazamiento del solvente: 6,6 cm Rf = = 0,95
6,6 cm

Dp= distancia del punto

DRS= distancia recorrida del

solvente

Fase 3: la placa fue introducida en cloroformo, en esta pudimos notar que la

fase estacionaria se mantuvo a pesar de opacarse un poco y la fase móvil nos
dio como resultado 7 manchas con los siguientes datos:
0,5 cm 2,8 cm
Mancha 1: 0,5 cm Rf1 = = 0,09 Rf5 = = 0,5
5,6 cm 5,6 cm
Mancha 2: 1 cm 1 cm 4 cm
Rf2 = = 0,17 Rf6 = = 0,71
5,6 cm 5,6 cm
Mancha 3: 1,5 cm
5,4 cm
Rf7 = = 0,96
Mancha 4: 2,3 cm 5,6 cm
1,5 cm
Rf3 = = 0,26
Mancha 5: 2,8 cm 5,6 cm
2,3 cm
Mancha 6: 4 cm Rf4 = = 0,41
5,6 cm
Mancha 7: 5,4 cm
Desplazamiento del solvente: 5,6 cm
Fase 4: la placa fue introducida en hexano con acetato de etilo, en esta pudimos
notar que la fase estacionaria se mantuvo, aunque se opacó y la fase móvil se
fue junto con el solvente lo que nos lleva a concluir que hubo un fallo en los
reactivos ya que el compuesto se fue junto con el solvente. Y así obtuvimos los
siguientes datos:
Mancha: 6.5 cm
Dp
Desplazamiento del solvente: 8,3 cm Rf =
DRS
1,9cm
Rf = = 0,28 Dp= distancia del punto
6,75cm
DRS= distancia recorrida del
solvente

Fase 5: la placa fue introducida en hexano y cloroformo, en esta pudimos notar

que se separó correctamente el compuesto, tal vez pudo ser ya que había un
solvente polar y uno apolar lo que conllevo a que se separara correctamente
este, los datos tomados fueron los siguientes:
Mancha 1: 0,1 cm Mancha 6: 1,6 cm
Mancha 2: 0,2 cm Mancha 7: 2,6 cm
Mancha 3: 0,7 cm Mancha 8: 2,7 cm
Mancha 4: 0,7 cm Mancha 9: 5,6 cm
Mancha 5: 1,6 cm Mancha 10: 5,8 cm
Desplazamiento del solvente: 5,8 cm
0,1cm 0,7cm 1,6cm
Rf1 = = 0,02 Rf3 = = 0,12 Rf5 = = 0,27
5,8cm 5,8cm 5,8cm
 0,2cm 0,7cm 1,6cm
Rf2 = = 0,03 Rf4 = = 0,12 Rf6 = = 0,27
5,8cm 5,8cm 5,8cm

2,6cm 2,7cm 5,6cm

Rf7 = = 0,44 Rf8 = = 0,46 Rf9 = = 0,96
5,8cm 5,8cm 5,8cm

5,8cm
Rf10 = =1
5,8cm

ANALISIS DE RESULTADOS
Los solventes (fase móvil) son muy importantes a la hora de separar los
compuestos presentes en una mezcla para una práctica cromatográfica, puesto
que la polaridad de estos afecta las velocidades relativas con la que los
diferentes compuestos de la mezcla se mueven por toda la fase móvil. Los
solventes polares compiten de manera más eficiente con las moléculas polares
de una mezcla por los lugares polares del adsorbente.
En las distintas fases influyeron algunos errores ya que los reactivos no
funcionaron a la perfección, cabe recalcar que las fases que mejor funcionaron
fueron la fase 3 del cloroformo y la fase 5 del hexano y cloroformo, lo que nos
lleva a concluir que fue necesario tener un solvente polar y uno apolar para
llevar a cabo correctamente la cromatografía.

CONCLUSIÓN
Para concluir con el análisis, la fase móvil ideal fue la número 5 (hexano +
cloroformo), puesto que este solvente tiene la polaridad correcta para separar
cada uno de los compuestos y dejarlos regados a lo largo de la fase móvil, en
el caso de la fase 1, el hexano no fue la sustancia adecuada, debido a su baja
polaridad, motivo por el cual solo pudo separar un compuesto. En el caso de la
fase 2, el acetato de etilo tiene una elevada polaridad, aun así, no fue una
sustancia adecuada, ya que todos los componentes quedaron juntos al final de
la cromatoplaca. En la fase 3 el cloroformo alcanzó a separar algunos
compuestos, pero no fue suficiente, y en la fase 4 el hexano y el acetato de
etilo no tuvieron la polaridad suficiente para separar los compuestos lo que
nos lleva a la conclusión de que, en la hoja de espinaca, la mezcla de hexano y
cloroformo es lo suficientemente polar para separar cada uno de los
compuestos presentes en ella.

CUESTIONARIO
1 en la cromatografía de capa delgada, ¿cuál es la fase estacionaria y cuál es la
fase móvil?
R/ La fase estacionaria es una capa delgada de un adsorbente (como por
ejemplo gel de sílice, alúmina o celulosa) depositada sobre un soporte plano
como una placa de vidrio, una lámina de aluminio o de plástico y la fase móvil
es la sustancia que penetra todo el lecho estacionario, es decir, el solvente, en
nuestro caso las fases móviles fueron: hexano, acetato de etilo, cloroformo,
hexano + acetato de etilo y hexano + cloroformo.
2 explique cómo y por qué se separan los componentes de la mezcla de
pigmentos. ¿Cuál de los pigmentos es atraído con más fuerza por la sílica? ¿por
qué?
R/ Los componentes de la muestra son atraídos con diferentes fuerzas por la
fase estacionaria a medida que fluyen a través de ella, además, influye mucho
la polaridad de la fase móvil, ya que los arrastra a lo largo de la placa, siempre
y cuando esta fase tenga la suficiente polaridad. Es como una pelea de
polaridades, ya que si la sílica es más polar que el solvente los pigmentos más
polares serán atraídos hacia la sílica y los menos polares se irán con el solvente
o viceversa.
3 ¿Qué solvente o mezcla de solventes recomendaría usted para hacer que el
desplazamiento de las manchas desde su posición original fuera menor que el
observado por usted en la práctica?
R/ En este caso utilizamos cinco solventes diferentes, hexano, acetato de etilo,
cloroformo, hexano + acetato de etilo y hexano + cloroformo si se desea que el
desplazamiento de las manchas sea menor, es necesario utilizar el hexano, ya
que es una sustancia con baja polaridad, por lo que no tiene la suficiente fuerza
para arrastrar los pigmentos. Lo más recomendable es utilizar sustancias con
baja polaridad en caso de que se desee un desplazamiento menor, aunque no
sería recomendado, debido a que lo ideal es separar cada uno de los
compuestos presentes en un pigmento por lo cual se necesita una sustancia
con la polaridad adecuada.

4 usted tiene un compuesto impuro y quisiera saber cuántas sustancias están

contaminando su compuesto. Explique cómo lo haría utilizando cromatografía
de capa delgada.

R/ Lo más importante es conocer la polaridad del compuesto impuro para

utilizar una fase móvil adecuada. Si el compuesto impuro presenta baja
polaridad se debe utilizar un solvente con baja polaridad como el hexano, si el
compuesto impuro es polar se debe utilizar la mezcla de hexano + cloroformo
en proporción 1 y 1.
Conociendo la polaridad, lo primero que se hace es buscar la placa de
cromatografía, hacer las respectivas mediciones, sembrar con un capilar el
compuesto impuro en la fase estacionaria, introducir la placa en un beaker con
el solvente adecuado, tapar con un vidrio de reloj, esperar aproximadamente
un minuto, sacar la placa y ahí se evidenciarán las sustancias contaminantes
del compuesto.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
- MANUAL PRÁCTICAS QUÍMICA ORGÁNICA (IDENTIFICACIÓN DE LOS ELEMENTOS DE UNA
MUESTRA ORGÁNICA)

- pictogramas tomados de Reglamento (CE) no 1272/2008 sobre clasificación, etiquetado y

envasado (Classification, Labelling and Packaging) de sustancias y mezclas. Reglamento (CE) no
1907/2006 (REACH), modificado por 2020/878/UE. https://www.carlroth.com/com/en/

-
https://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa#:~:text=Por%20ejemplo%2C%20un%20crom
at%C3%B3grafo%20de,mueve%20en%20una%20direcci%C3%B3n%20definida.