Santiago de Cali, 12.05.

2021

Guía de práctico de laboratorio

Grado: 11 BIO-NM Profesor: Ivar De Jesús Moreno R.

TEMA: 2.9 Fotosíntesis

Separación de pigmentos fotosintéticos mediante cromatografía en papel
(trabajo práctico). Protocolo.

Nombre: _____________________________

OBJETIVO

El propósito de este trabajo es el de extraer los pigmentos fotosintéticos y

separarlos mediante una técnica de cromatografía en papel.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase móvil y la fase

estacionaria.
Analizar la influencia del solvente en la separación por cromatografía.

INTRODUCCIÓN

La fotosíntesis consiste en la producción de compuestos de carbono en las

células usando energía lumínica.
La fotosíntesis es un ejemplo de conversión de energía: la energía lumínica
se convierte en energía química en los compuestos de carbono.

Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores:

clorofila-a (verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro) y
xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones. Todas estas
sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes, lo
que permite su separación, una solución de estas asciende a través de una
columna de cromatografía verticalmente sobre un papel, ya que las más
solubles se desplazarán a mayor velocidad, pues acompañarán fácilmente
al disolvente a medida que éste asciende. Las menos solubles avanzarán
 menos en la columna. Aparecerán, por tanto, varias bandas de diferentes
colores (dependiendo del material utilizado) estarán separadas por el
disolvente según la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. Estas
bandas poseerán diferente grosor, dependiendo de la abundancia del
pigmento.

MATERIALES

Mortero, pocillo o taza

Pilón cuchara o marcador con tapa
Tijera
Papel filtro o papel de uso en la cafetera
Hojas verdes (espinaca, geranio, swinglea o cualquier hoja verde tierna)
Vaso de vidrio traslucido.
Lápiz, color o palillo.
Clip para papel
Regla
Pincel
Piedra (que quepa en el pocillo o taza)

REACTIVOS

Alcohol al 70% (el que hay en casa)

Acetona, removedor o quita esmalte

1. Cortar con la tijera una hoja en pequeños trozos y colocarlos en un mortero,

taza o pocillo.
2. Añadir un pequeño volumen de alcohol al 70%.
3. Utilizar el mortero, cuchara, marcador con tapa o piedra para triturar los
tejidos de las hojas y extraer sus pigmentos.
4. Si el alcohol se evapora, añadir un poco.
5. Cuando el alcohol se ha vuelto de color verde oscuro, dejar que los sólidos
se asienten.

6. Sobre la tira de papel filtro o de cromatografía dibujar una línea con lápiz a
2 cm de la base del papel.

7. Utilice la punta del pincel para transferir una pequeña cantidad de

disolución de pigmento sobre la línea del papel de cromatografía o papel
filtro. El objetivo es depositar una pequeña gota de pigmento sobre la línea
hecha con lápiz sobre la tira de papel, a 2 cm del extremo. Esto se consigue
dejando que la gota se seque y añadiendo otra pequeña gota sobre la
 anterior se realiza por ambos lados del papel. Repetir dicho proceso tres
veces por cada lado del papel.
8. En el vaso de vidrio agregue la acetona, removedor o quita esmalte,
teniendo cuidado que el nivel de esta no llegue a la línea del papel filtro con
pigmentos.
9. Tome el papel filtro con los pigmentos, colóquelo en el lápiz y sosténgalo
con el clip. Sumérjalo lentamente que la cetona, removedor o quita esmalte
quede por debajo del nivel de la mancha y que no toque las paredes del
vaso.
10. Dejar durante cinco minutos, para que el disolvente ascienda por la tira de
papel. Se puede observar la separación de los pigmentos.
11. Dibuje dos líneas sobre la tira, una donde se encontraba la mancha inicial y
otra en la línea alcanzada por el disolvente.
12. Cuando el solvente casi haya alcanzado el extremo superior de la tira de
papel, retirarla con mucho cuidado.
13. Dibuje un círculo alrededor de cada mancha de pigmento obtenida y una
cruz en el centro del círculo. Mida las distancias desde la mancha inicial

14. Calcule el Rf de cada pigmento y escriba los resultados sobre una tabla
comenzando por el pigmento con mayor recorrido.

15. Muestra todos tus resultados en la tabla de arriba, comenzando por el

pigmento que se ha movido menos.
Tabla para calcular los valores de Rf
Numero Color Distancia que se Rf Nombre del
de ha movido (mm) pigmento
mancha

1
2
3
4
5
6
7