Universidad autónoma Chapingo

Preparatoria agrícola

PRACTICA No. 2
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES POR
CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA

Integrantes:
Luis Rodrigo Ortega Tovar
José Antonio Méndez Tentle
Mariana Dalí Pérez Vásquez

Profesor:
Morales Hernández Mario Noel

Grado y grupo:
2° 11-B
Introducción
La gran mayoría de los compuestos orgánicos, ya sean naturales o sintéticos no se
encuentran puros. Para determinar sus propiedades físicas y químicas o poder usarlos
como medicamentos, conservadores, edulcorantes, insecticidas, etc., es necesario
separarlos y purificarlos. Dado que la separación de mezclas es una de las operaciones
más importantes en el laboratorio; la cromatografía es una técnica muy importante y
versátil que permite separar y purificar sustancias químicas. La cromatografía se define
como la separación de una mezcla de dos o más compuestos diferentes por su
distribución entre dos fases, una de las cuales es la fase estacionaria y la otra la fase
móvil. Varios tipos de cromatografía son posibles, dependiendo de las fases
involucradas: sólido-líquido (cromatografía en columna, capa fina y papel), líquido-
líquido y gas-líquido. Los métodos cromatográficos dependen de la solubilidad
diferencial (o absortividad) de las sustancias a ser separadas con respecto a las dos
fases entre las cuales son particionadas. En esta práctica se llevará a cabo la
separación de los pigmentos contenidos en hojas de diferentes vegetales mediante la
técnica de cromatografía en capa fina, se utilizará un soporte de vidrio cubierto con una
capa adsorbente de gel de sílice.

Tabla 1. Lista de material y reactivos

Cantidad Material Reactivos
1 Mortero Hojas de espinacas
1 Tuvo capilar Acetona
1 Placa de cromatografía de gel de Dicloruro
sílice (si es de vidrio calentar
previamente en horno)
1 Cámara de elusión Etanol
1 Embudo de tallo corto Hexano
1 Regla Mezcla eluyente de hexano:CH2Cl2:
etanol (6:3:1)
Procedimiento
1. Preparación del extracto
1.1 En un mortero, moler una hoja de espinaca. Agregar 1 mL de acetona y 2 mL de
hexano. Si el disolvente se evapora adicionar otro mL de acetona

Figura 1. Preparación de extracto

2. Aplicación de la muestra sobre la placa cromatográfica

2.1 Con un capilar tomar una muestra del extracto concentrado y aplicarlo en la placa
previamente marcada. Cada equipo aplico su muestra en una marca (trazada con
lápiz).
2.2 Introducir la placa con la muestra a separar en una cámara de elución teniendo
cuidado de no sumergir en la mezcla de elución el área de aplicación de las muestras.
2.3 Eluir la placa empleando una mezcla de hexano:diclorometano:etanol en
proporciones de (6:3:1)
2.4 Observar la separación de los pigmentos en la placa.
2.5 Marcar con lápiz la línea de avance (frente del eluyente).
2.7 Medir el Rf del pigmento a partir de la relación entre la distancia que avanza y el
frente del eluyente
 Figura 2. Elución de la placa

Valor de desplazamiento del pigmento frente respecto del frente eluyente

distancia que recorre la muesta

Rf =
distancia que recorre el frente de disolvente

6 cm
Rf = =¿0.779
7.7 cm
El factor de retención es de 0.779
 Figura 2.1. Factor de retención

Figura 2.2. Aspectos considerados en la placa de cromatografía en capa delgada

Conclusiones
¿Qué material vegetal se utilizó? Para la práctica se utilizó una hoja de espinaca.
Con base en la coloración y polaridad de los pigmentos ¿se podría predecir la
identidad de los pigmentos separados? La coloración y polaridad de los pigmentos
pueden ofrecer pistas sobre su identidad, pero no son suficientes para una predicción
precisa
¿Cuál es la técnica más utilizada para la separación adecuados de materiales
vegetales? La cromatografía de Capa Delgada (TLC), porque es una técnica rápida y
económica, utiliza una placa recubierta con un adsorbente para separar los pigmentos,
puede proporcionar una visualización directa de los compuestos separados y es eficaz
para análisis cualitativos y semicuantitativos.