Laboratorio de Química Orgánica I QU – 10304

Experimento #7

Cromatografía en capa fina (ccf) y en papel (cp)

La cromatografía es quizás la técnica más importante usada en química orgánica para
separar componentes de una mezcla. Esta técnica involucra la distribución entre dos fases,
de los diferentes compuestos o iones en la mezcla. Una de ellas es la fase estacionaria y la
otra la fase móvil. La cromatografía se basa en el mismo principio que la extracción con
disolventes. En la extracción, los componentes de una mezcla se distribuyen entre los dos
disolventes de acuerdo a sus solubilidades relativas en ambos. El proceso de separación en
cromatografía depende de que tan fuertemente son adsorbidos los componentes de la
mezcla en la fase estacionaria y que tan solubles son en la fase móvil. Estas diferencias
dependen de las polaridades relativas de los componentes de la mezcla.

Esquema de la cromatografía en capa fina:

Límite del solvente

a b c d

Placa inicial Placa dentro de la cámara de A medida que el disolvente se Un buen disolvente
Línea a lápiz desarrollo desplaza, hace que la muestra causa una buena
Aplicación de muestra Nivel del disolvente aplicada se mueva también separación de los
componentes de la
mezcla
Figura 1

Distancia
recorrida por
el disolvente
muestra
Centro de masa

Distancia
Distancia
recorrida
por
la
muestra Rastro

Rf recorrida por
la muestra
Distancia
recorrida
por
el
solvente

Figura 2
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PARTE A SEPARACIÓN DE COLORANTES DE ALIMENTOS POR CROMATOGRAFÍA
EN PAPEL

Procedimiento.
1. Prepare varias micropipetas (tubos capilares)
2. Corte una pieza rectangular de papel Whatman No. 1 para cromatografía 6,5 x 4 cm
3. Dibuje una línea con lápiz, aproximadamente a 1,0 cm del lado mas angosto (ver figura 1-
a)
4. Haga cuatro marcas con lápiz en la línea, a intervalos equidistantes e identifique cada
marca con la inicial del colorante. (previo a la aplicación de muestra)
5. Diluya en agua un poco de colorante para alimentos de cada uno de los cuatro colores a
trabajar
6. Usando micropipetas o capilares por separado para cada muestra, coloque una gota de
cada color en cada marca y deje secar. (figura 1-a, aplicación de la muestra)
7. Diluya 5 ml de alcohol isopropílico con 2.5 ml de agua en un matraz Erlenmeyer pequeño
y transfiera esta solución a un vaso de precipitados (150 ml), evitando salpicar las
paredes. Asegúrese que el nivel del solvente quede abajo de la muestra aplicada. (figura
1-b)
8. Coloque el papel dentro del vaso de precipitados (cámara de desarrollo) y tápelo con
papel aluminio o un vidrio de reloj y permita que el disolvente eluya durante 30-40 min, o
hasta que el disolvente llegue a aprox. 0.5 cm del borde superior. (ver figura 1-d)

IMPORTATE: ¡NO MUEVA LA

CAMARA DE DESARROLLO NI
CROMATOPLACA MIENTRAS
REALICE LA ELUCION!

9. Saque el cromatograma y déjelo secar.

10. Calcule los factores de reparto (Rf) dividiendo la distancia que recorrió cada muestra
entre la distancia que recorrió el solvente para cada colorante. (Figura 2)

PARTE B PREPARACION DE CROMATOPLACAS PARA CROMATOGRAFÍA EN

CAPA FINA (CCF) Y SELECCIÓN DEL SOLVENTE DE DESARROLLO

Procedimiento.
1. Limpie y seque varios (2 o 3) portaobjetos.

2. En un matraz Erlenmeyer pese el adsorbente y adicione agua. El adsorbente usado en

este experimento es sílica gel, la relación de gel: agua es de 1: 2. Pese 2.5 g de sílica gel
HF - 254 y mézclelos con 5 g de agua destilada, agitando durante un minuto hasta que
todo el polvo este mojado y proceda a la aplicación, este material debe usarse
rápidamente porque el gypsum* presente hace endurecer la mezcla.
*Los materiales adsorbentes más comúnmente utilizados en CCF son el oxido de
aluminio (alumnina G) y gel de sílice G (ácido silícico). La G indica la presencia de
gypsum (sulfato de calcio). El gypsum húmedo se vuelve una masa rígida (CaSO 4.2H2O)
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lo que permite unir al adsorbente y adherirlo a las placas del vidrio. Generalmente se
adiciona en un 10-13%.

3. Extienda la mezcla usando un gotero o con una pipeta Pasteur. Primero aplíquelo por las
orillas del portaobjetos dejando aproximadamente un cm para sujetarla. Inmediatamente
rellene el centro desde el fondo hacia arriba tratando de extender la mezcla. Si se
requiere adicione un poco de agua a la mezcla y revuelva bien.

4. Deje secar durante 15-30 min hasta que el agua de la superficie haya desaparecido.
Después active la placa en una estufa a 105 oC durante 30 min.

5. Prepare 3 soluciones de: a) benzoina, b) bencilo y c) benzoina+ bencilo al 1% en acetona.

6. Prepare 3 cromatoplacas apliando a cada una, con un capilar, tres gotas una de cada
solución preparada anteriormente de la manera siguiente:

7. Desarrolle cada cromatoplaca con un solvente diferente, con la finalidad de elegir el

mejor. Los tres solventes son hexano (no polar), cloruro de metileno (moderadamente
polar) y acetona (polar).

8. Revele con vapores de yodo*. (¡Cuidado los vapores de yodo son tóxicos!). Mida los Rf
para cada compuesto, compárelos y elija el mejor solvente de desarrollo.

* Coloque algunos cristales de yodo en un frasco con tapa, coloque la placa dentro, tape
y espere unos minutos hasta que las manchas reaccionen con el Iodo y se observen a
simple vista. La mayoría de los compuestos orgánicos reaccionan con el Iodo dando
compuestos con diferentes tonalidades entre los colores amarillo-naranja-café.

PARTE C ANÁLISIS DE ANALGÉSICOS MEDIANTE CCF. USO DE

CROMATOPLACAS COMERCIALES

1. Recorte una pieza rectangular de aprox. 6.5 x 4 cm (¡Cuidado de no maltratar las orillas!),
o bien a un tamaño que ajuste al tamaño del vaso de precipitados que vaya a usar como
cámara reveladora.

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9. Tome dos tabletas de un medicamento desconocido (el compuesto será proporcionado
por el maestro), pesan aproximadamente 1 g, pulverícelas en un mortero. Transfiera el
polvo a un tubo de ensaye y añada 5 ml de cloruro de metileno y etanol (1:1). Agite y
deje precipitar el excipiente. Márquelo como “MEZCLA DESCONOCIDA” (este paso lo
realiza sólo un equipo para todo el grupo)

10. Prepare las disoluciones estándar ó patrón de cafeína, ácido acetilsalicílico,

acetaminofén e ibuprofeno a una concentración de 1g / 5 ml de una mezcla de cloruro de
metileno y etanol (1:1). Si no se encuentran las soluciones patrón entonces use tabletas
de los medicamentos que contengan estos analgésicos. (Cada equipo preparará un
estándar diferente)

11. Aplique con un capilar o micropipeta una gota de cada solución patrón y una gota de la
mezcla problema a 1.0 cm del borde de la placa, a una distancia de separación
razonable. Anote en su bitácora el orden en que haga las aplicaciones. (figura 1-a)

12. Prepare el disolvente de desarrollo o de elusión, ácido acético glacial 0.5 % en acetato de
etilo. Transfiera una pequeña cantidad (hasta que el volumen llegue aproximadamente a
medio centímetro de alto en la cámara). Sumerja la placa en la cámara cromatográfica
(vaso de precipitados de 50 ml), tape lo más herméticamente posible y permita que el
disolvente eluya hasta un nivel entre 0.5 y 1 cm antes de alcanzar el borde superior
(observar si se la velocidad, si la elución se detiene retírela). Marque la distancia
recorrida por el solvente.

13. Saque la placa y déjela secar al aire. Ilumine la placa con luz UV, marque las manchas
que observe y mida la distancia recorrida. Enseguida revele también con Iodo.

14. Calcule los Rf para cada una de las manchas.

11. Determine por comparación de los Rf de cada estándar y por las características
observadas al revelar con UV y Iodo, los componentes de la “MEZCLA DESCONOCIDA”.

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Cuestionario #7
Cromatografía en capa fina y en papel

1) Nombre dos sustancias que son comúnmente usadas como adsorbentes en la técnica de
cromatografía en capa fina:
________________________________________________________________________
____________________________________________________________________

2) ¿Qué aseveración describe mejor la interacción entre el adsorbente y los grupos

funcionales en la muestra?
a) Entre más polar es el grupo funcional, más débil es su enlace con en adsorbente
b) Entre menos polar es el grupo funcional, mas fuete es el enlace con el adsorbente
c) Entre más polar es el grupo funcional, más fuerte es el enlace con el adsorbente
d) No es la polaridad sino la capacidad de elusión lo que determina la naturaleza de su
interacción

3) Mencione dos métodos de visualización usados comúnmente para determinar las

manchas invisibles en las placas de cromatografía de capa fina

4) ¿Qué ecuación matemática es usada en cromatografía de papel y de capa fina para

calcular el valor Rf de un componente en una mezcla?

Rf =

5) Considere una muestra que contiene un hidrocarburo, un ácido orgánico y un alcohol,

todos de estructura similar. Prediga los valores relativos Rf para estos compuestos
cuando son eluídos con una mezcla de solventes diclorometano – ciclohexano sobre una
placa para cromatografía fina.

Tiene el valor Rf más alto__________________________________

Tiene un valor Rf medio ___________________________________
Tiene el valor Rf más bajo__________________________________

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6) La cromatografía en capa fina puede usarse para:
a) Determinar el numero de componentes en una mezcla
b) Monitorear el progreso de una reacción
c) Establecer que dos compuestos son idénticos
d) Monitorear una separación de cromatografía en columna
e) Todas las anteriores

7) Si el valor Rf de un componente desconocido corresponde al valor Rf de una sustancia

pura conocida obtenido bajo las mismas condiciones ¿Puede decirse entonces que
ambos Rf son la misma sustancia?

Cierto _____ falso _____ cierto solo para cromatogramas isocráticos_______.

8) Aunque el papel consiste principalmente de celulosa pura, la celulosa por si misma no

funciona como fase estacionaria. Es el agua absorbida sobre la celulosa la que funciona
como fase estacionaria.
Cierto____________ falso ____________.

9) Los compuestos en una mezcla que son altamente solubles en agua, o aquellos que tiene
gran capacidad para formar enlaces de hidrogeno, son los que eluyen fácilmente es decir
se mueven mas rápidamente en la placa de cromatografía en papel y capa fina
Cierto____________ falso _____________.

10) La cromatografía en papel se aplica mayormente a compuestos altamente polares o a

aquellos que son polifuncionales.

Cierto ____________ falso ____________.

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