UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL ALCIDES CARRION

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

E.F.P AGRONOMIA – LA MERCED
Curso: Biotecnología Agrícola
Docente: Karina Marmolejo Gutarra
Alumna: Merly Jackeline Nalvarte Quispe

COLORACION MICROBIOLOGICAS: SIMPLE Y GRAM

PRACTICA N°02
I. INTRODUCCION
Una tinción simple o coloración simple se caracteriza porque se utiliza un solo
colorante el cual puede ser acido, neutro o básico. Generalmente para este tipo
de coloración se usa el azul de metileno. Puede observarse a través de objetivos
de mayor, gran aumento o inmersión.
La tinción gran en una coloración diferencia, mediante la cual las bacterias gran
positivas como: Staplylococcus sp. Streptococcu ssp. Diplococos, Bacillus
antracis, bacillus subtilis captan el color violeta y no se decoloran con el alcohol
– acetona debido a ciertas sustancias que tienen en su composición química en
su pared celular.
Vista al microscopio eléctrico, las bacterias gran positivas presentan una pared
celular gruesa y homogénea en donde la capa de peptidoglucano aparece con un
grosor de 10 a 20 nm.
Por su parte las bacterias gran negativas son aquellas que no tiñen con el
colorante gran y se decoloran por acción del alcohol – acetona tomándose de
color rosado. Son gran negativa todos los bacilos, con algunas excepciones. Se
caracteriza por presentar una pared celular más compleja en composición y
estructura que las gran positivas.

II. OBJETIVOS
Manejar, siguiendo los protocolos de tinción, adecuadamente los
métodos de coloración simple y gran.
Realizar con ayuda del microscopio óptico, observaciones microscópicas
de preparados biológicos en coloraciones simple y gran.

III. MATERIALES Y METODOS

A. Materiales
Muestras de Rhizobium
Frasco de vidrio
Asa koll, agua destilada
Alcohol acetona
Aceite de inmersión
Pinzas, frasco lavador o piseta
Mechero, Lugol
Lamina portaobjeto y cubreobjetos.
Colorantes de contraste: fucsina básica o safranina
Microscopio compuesto.
Colorante básico: violeta de genciana o azul de metileno.
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B. Procedimiento
a) Recolectar la muestra examen en un frasco de vidrio o Petri
previamente esterilizado.
b) Con el asa koll previamente esterilizada al calor, tomar una
pequeña porción de la sustancia examen y realizar una extensión
en una lámina portaobjeto.
c) Seguidamente debe hacerse la fijación al calor moderado.
d) Agregar el colorante básico elegido, en este caso violeta de
genciana hasta cubrir el preparado y dejarlo en reposo por espacio
de 1 a 5 minutos.
e) Eliminar el exceso de colorante, sin lavar la lámina.

IV. RESULTADOS
Como resultado no llegamos a cumplir nuestros objetivos, ya que solamente
pudimos observar conglomerados, mas no se llegó a identificar las bacterias
Gram negativas como generalmente se debe observar al ver una muestra de
Rhizobium, y esto se debe a que no se realizo de manera correcta la extracción y
proceso de obtención de la muestra.

V. RECOMENDACIONES
Se debe de realizar la extracción de la muestra de manera adecuada, para
poder lograr nuestros objetivos planteados.
Es muy importante tener en cuenta el tiempo que se debe de aplicar cada
tinción sobre el portaobjeto, esto es esencial para una buena tinción de
las muestras a observar.
VI. ANEXO

Figura N°01 Figura N°02

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Figura N°03 Figura N°04

Figura N°05 Figura N°06

Figura N°07 Figura N°08

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Figura N°09 Figura N°10

Figura N°11
VII. CUESTIONARIO
1. ¿En que se fundamenta la tinción Gram?
La tinción de Gram es una técnica muy sencilla que se basa en el uso de
un colorante que permite observar las bacterias mejor que bajo el
microscopio.
Las bacterias Gram negativas pierden un colorante (el cristal violeta) con
mayor facilidad que las Gram positivas. La razón es la menor cantidad de
mucopéptido de las paredes de las bacterias Gram negativas.
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2. ¿Qué diferencias existe entre la tinción simple y Gram?

Una tinción simple o coloración simple se caracteriza porque se utiliza
un solo colorante el cual puede ser acido, neutro o básico. Generalmente
para este tipo de coloración se usa el azul de metileno.
La tinción Gram es la coloración más útil y más ampliamente usada en
bacteriología y es un ejemplo de tinción diferencial porque utiliza más de
un colorante. A más de ser útil para evidenciar la forma, tamaño y la
forma de agruparse de los microorganismos sirve también para
distinguirlos entre Gram positivos y Gram negativos dependiendo del
color que adoptan después de la coloración.

3. ¿Cuáles son las ventajas de la tinción Gram y simple?

Tinción Gram Tinción Simple
Estas técnicas utilizan más de un Se utiliza un solo colorante ya
colorante o bien ciertos reactivos sea acido, neutro o básico.
complementarios para la tinción.
La tinción de Gram no solo sirve La ventaja principal es que nos
para bacterias, sino también para permite observar estructuras que
algunos hongos y parásitos en su forma natural carecen de
coloración suficiente para ser
distinguidas por microscopio.
Esta tinción se basa en las Se pueden diferenciar células.
características de la pared celular
presente en las bacterias, la cual
posee propiedades diferentes y
determinantes en cada
microorganismo.

4. ¿Qué reactivo actúa como mordiente en la tinción Gram?

El que actúa como mordiente en la tinción Gram viene a ser el Lugol.

5. ¿Cuáles son los colorantes usados en la tinción Gram? mencione

además sus características de cada uno de ellos.
Violeta de Fucsina Safranina
genciana básica
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Es un Es un Es un
colorante colorante colorante
histológico, ácido rojo biológico, que
también es brillante. da color rojizo
utilizado o anaranjado a
como las bacterias
indicador de gram
ph. negativas.